肖建华
- 作品数：15 被引量：15H指数：2
- 供职机构：中国人民解放军第一军医大学热带医学研究所更多>>
- 发文基金：美国中华医学基金湖南省医药卫生科研计划课题更多>>
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- 恶性疟原虫富含组氨酸蛋白Ⅱ基因大肠杆菌中的表达
- 1999年
- 目的在大肠杆菌中表达富含组氨酸蛋白Ⅱ，为抗疟疫苗研究及制备疟疾诊断单克隆抗体提供实验材料。方法采用ＰＣＲ方法特异性扩增恶性疟原虫云南株（ＰＦＤ—３／ＹＮ）富含组氨酸蛋白Ⅱ部分基因，经基因序列测定后克隆于ｐＧＥＸ４Ｔ－１融合蛋白的表达，并用ｄｏ－ＥＬＩＳＡ对表达产物进行鉴定。结果ＨＲＰⅡ基因与ｐＧＥＸ４Ｔ－１重组后在大肠杆菌ＴＧ１中表达—４１ｋＤａ的融合蛋白。Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ鉴定表明ＨＲＰⅡ基因表达产物能被抗ＨＲＰⅡ单克隆抗体所识别。结论大肠杆菌表达的ＨＲＰⅡ能与抗ＨＲＰⅡ单克隆抗体发生反应，且具有恶性疟原虫ＨＲＰⅡ抗原表位。
- 肖建华李明李英杰
- 关键词：疟原虫基因表达
- 恶性疟原虫环子孢子蛋白基因在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 1999年
- 用ＰＣＲ方法特异性扩增恶性疟原虫云南株（ＰＦＤ－３／ＹＮ）环子孢子蛋白基因片段，经基因序列测定后克隆于ｐＷＲ４５０－１融合蛋白表达载体，并转化大肠杆菌ＴＧ１、ＪＭ１０３及ＪＭ１０９。在不同菌体浓度及不同剂量ＩＰＴＧ诱导下检测ＣＳＰ融合蛋白的表达，结果显示仅ｐＷＲ－ＣＳＰ／ＴＧ１工程菌在菌体浓度ＯＤ５９０值达０．７～０．８时，加入终浓度１ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ进行诱导，可表达一８８ｋＤａ的融合蛋白。
- 肖建华李明崔东毕惠祥王萍李英杰
- 关键词：恶性疟原虫环子孢子蛋白基因表达大肠杆菌
- 恶性疟原虫云南株环子孢子蛋白部分基因的克隆和序列分析
- 1998年
- 目的：测定我国恶性疟原虫环子孢子蛋白部分基因序列，了解我国虫株与其它虫株ＣＳ蛋白基因序列的差异。方法：采用ＰＣＲ方法特异性扩增ＣＳ蛋白基因片段，并将该基因片段克隆于Ｍ１３噬菌体，取３个阳性克隆制备Ｍ１３－ＣＳＰ单链ＤＮＡ，用双脱氧链末端终止法测定该基因片段核苷酸序列。应用ＰＣＧＥＮＥ软件对六个虫株ＣＳ蛋白基因序列进行了一系列比较分析。结果：我国恶性疟原虫云南株（ＰＦＤ－３／ＹＮ）与Ｔ４、Ｗｅｌｃｏｍｅ、ＮＦ５４、３Ｄ７及７Ｇ８等虫株ＣＳ蛋白基因序列有不同程度的差异，其中一个有意义核苷酸突变发生在Ｐ．ｆＴｈ／Ｔｃ抗原表位区。结论：云南株与其它虫株ＣＳ蛋白基因存在差异。
- 肖建华李明崔东毕惠祥王萍李英杰
- 关键词：疟原虫蛋白基因基因测序
- 恶性疟原虫云南株丝氨酸重复抗原部分基因的克隆和序列分析
- 1998年
- 用ＰＣＲ方法特异性扩增ＳＥＲＡ基因片段，并将该基因片段克隆于Ｍ１３噬菌体，用双脱氧链末端终止法进行测序，应用ＰＣＧＥＮＥ软件对该基因序列进行了分析，结果显示该基因片段长度为４５３ｂｐ，Ａ＋Ｔ／Ｇ＋Ｃ为２．６∶１，符合恶性疟原虫结构基因的特点。同源性分析显示该基因在不同虫株间高度保守，我国ＰＦＤ－３／ＹＮ虫株ＳＥＲＡ基因片段仅与Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３（巴西）株及Ｓ１６（塞内加尔）株在第６６７位氨基酸有不同，与ＦＣＲ３（冈比亚）、ＦＣＢＲ（哥化比亚）、及Ｓ１４、Ｓ１５（塞内加尔）等其它虫株ＳＥＲＡ基因序列完全一致。抗原表位预测分析显示该多肽Ｎ端和Ｃ端可能有抗原表位存在。
- 肖建华李明毕惠祥王萍李英杰
- 关键词：恶性疟原虫基因序列
- 恶性疟原虫不同虫株间环子孢子蛋白基因多态性分析
- 1998年
- 本文采用ＰＣＲ方法扩增了恶性疟原虫云南株（ＰＦＤ－３／ＹＮ）环子孢子蛋白（ＣＳＰ）部分基因，将扩增的基因片断克隆于Ｍ１３测序载体进行了基因序列测定。用ＰＣＧＥＮＥ软件对恶性疟原虫不同虫株ＣＳＰ基因序列进行了一系列比较分析。其结果表明恶性疟原虫虫株间ＣＳＰ基因存在多态性，ＰＦＤ－３／ＹＮ株ＣＳＰ基因序列与Ｔ４、Ｗｅｌｃｏｍｅ、ＮＦ５４、３Ｄ７及７Ｇ８等虫株均有不同程度的差异。
- 肖建华李明李英杰
- 关键词：恶性疟原虫基因基因多态性
- 抗恶性疟原虫重组HRP-Ⅱ单克隆抗体的制备与鉴定被引量：1
- 2000年
- 采用恶性疟原虫重组富组氨酸蛋白 (HRP- )融合表达蛋白免疫 BAL B/ c小鼠 ,取脾细胞与 SP2 / 0细胞融合 ,经 3次 EL ISA筛选 ,共获得 6株分泌抗恶性疟原虫重组 HRP- 单克隆抗体的杂交瘤细胞株 (1B11、1D10、2 E7、3A3、3F9、4G5 ) ,用有限稀释法进行克隆、亚克隆及扩大培养 ,并用杂交瘤细胞经腹腔接种 BAL B/ c小鼠制备腹水。 6株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体 (Mc Ab)经琼脂双扩散鉴定均为 Ig G1亚类 ,Dot- EL ISA及 Western blot分析显示 6株 Mc Ab都能与重组 HRP- 抗原发生特异性反应 ,但其中只有 2 E7和 3A3在 Dipstick免疫胶体金反应中能与恶性疟原虫培养上清中的天然 HRP-
- 郝文波李明罗树红方建民董文其王萍毕惠祥肖建华胡旭初李英杰
- 关键词：恶性疟原虫单克隆抗体
- 恶性疟原虫丝氨酸重复抗原部分基因的克隆及其鉴定
- 1998年
- 根据恶心疟原虫丝氨酸重复抗原基因的保守序列。设计并合成了一对寡核苷酸引物，用PCR方法扩增恶性疟原虫云南株(PFD-3／YN）与海南株(FCC-1／HN)丝氨酸重复抗原部分基因片段．经基因序列测定后，将该片段用SmaI+SaⅡ双酶消化，克隆于表达载体pR1T2T，并转化大肠杆菌N4830-1，用PCR及酶切法鉴定pR1T2T-SERA重组质业，为丝氨酸重复抗原的表达奠定基础。
- 肖建华李明毕惠祥王萍李英杰
- 关键词：恶性疟原虫基因克隆染色体
- 恶性疟原虫海南株丝氨酸重复抗原部分基因序列分析被引量：1
- 2000年
- 该文采用PCR方法特异性扩增恶性疟原虫海南株 (FCC - 1 HN)SERA基因片段 ,并将该基因片克隆于M 13噬菌体 ,用双脱氧链末端终止法进行测序 ,应用PCGENE软件对该基因序列进行了分析 ,结果显示该基因片段长度为 45 3bp ,A +T G +C为 2 .6∶1,符合恶性疟原虫结构基因的特点。同源性分析显示该基因在不同虫株间高度保守 ,我国FCC - 1 HN虫株SERA与B1、B2、B3(巴西 )株及S16 (塞内加尔 )株仅一个氨基酸不同 ,与FCR3(刚比亚 )、FCBR(哥伦比亚 )、及S14、S15 (塞内加尔 )等其它虫株SERA基因序列完全一致。
- 肖建华李明毕惠祥王萍李英杰
- 关键词：恶性疟原虫基因序列
- 六地卫氏并殖吸虫及斯氏狸殖吸虫种间和种内虫体重复DNA序列的比较被引量：5
- 1993年
- 从湖南、广东两省六地采集卫氏并殖吸虫和斯氏狸殖吸虫,分别制备各地虫体基因组DNA,用 BamHI、HaeⅢ及 HindⅢ 3种限制性内切酶消化,琼酯糖凝胶电泳后,比较酶切片段长度。结果显示两种虫种间重复 DNA序列带型有明显的差异,而同种虫种不同地区虫体的重复 DNA序列带型则多数相同或完全相同。
- 肖建华陈翠娥张悟澄聂崇兴李本文
- 关键词：卫氏并殖吸虫斯氏狸殖吸虫
- 恶性疟原虫HRPⅡ基因的克隆与表达被引量：2
- 1999年
- 采用ＰＣＲ方法特异性扩增恶性疟原虫云南株（ＰＦＤ－３／ＹＮ）富含组氨酸蛋白Ⅱ基因，经基因序列测定后克隆于ｐＷＲ４５０－１融合蛋白表达载体，并转化大肠杆菌ＴＧ１。在不同菌体浓度及不同剂量ＩＰＴＧ诱导下检测ＨＲＰⅡ融合蛋白的表达。采用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ及Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ分析对表达产物进行鉴定。结果显示ＨＲＰⅡ基因与ｐＷＲ４５０－１重组后在大肠杆菌ＴＧ１中表达一６８ＫＤａ的融合蛋白，当工程菌ＯＤ５９０为１．０～１．２时，加入终浓度１ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ进行诱导，表达量较高。
- 肖建华李明李明毕惠祥李英杰
- 关键词：恶性疟原虫基因表达
