范达
- 作品数：3 被引量：21H指数：2
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- 相关领域：医药卫生理学更多>>
- 疏水化阳离子透明质酸胶束介导的siRNA转染影响因素及细胞靶向性研究
- 2012年
- 研究疏水化阳离子透明质酸胶束HAPL9600介导基因转染的影响因素。通过测定HAPL9600胶束与siRNA形成复合物的粒径,分别考察透明质酸相对分子质量、HAPL9600浓度、HAPL9600与siRNA比例、pH、介质、孵育时间以及血清对疏水化阳离子透明质酸胶束体外转染效率的影响,筛选较优的转染条件。同时进行受体抑制实验,考察该载体的细胞靶向性。结果表明当透明质酸相对分子质量为9 600、载体与siRNA质量比为8,孵育时间为30 min、体系中HAPL9600浓度为15 mg/mL,转染介质为pH 6.8的PBS溶液时转染效率较高。游离透明质酸可抑制经CD44介导的siRNA的转染效率。HAPL9600可作为合成新型靶向非病毒载体的骨架,但必须控制有关因素才能得到可重复的最佳转染结果。
- 沈雁李谦范达李瑞珺涂家生
- 关键词：SIRNA疏水改性细胞靶向转染效率
- 特异性抑制环氧合酶-2表达的siRNA筛选被引量：3
- 2012年
- 目的筛选有效抑制环氧合酶-2(COX-2)表达的小干扰RNA(siRNA)序列,并观察其对细胞中COX-2表达的抑制作用。方法设计针对COX-2的3对(siRNA24,siRNA954,siRNA1553)及一条FAM荧光标记的阴性对照siRNA(称为HK)。在Lipofectamine2000介导下转染人胃癌细胞系SGC-7901。同时采用RT-PCR法和Western blot方法检测细胞中COX-2含量,以β-actin蛋白做内参照。结果当Lipofectamine2000浓度在50μmol.L 1时能实现最大转染效果。与其他各组相比,转染了siRNA954的人胃癌细胞中,编码COX-2 mRNA的含量明显减少(P<0.01)。结论成功设计了针对COX-2的siRNA,并从中筛选出siRNA954,能够有效抑制人胃癌细胞COX-2表达,为肿瘤治疗及其临床应用奠定了基础。
- 沈雁李瑞珺范达李谦涂家生
- 关键词：环氧合酶-2SIRNART-PCR转染
- 顶空气相色谱法测定注射用甲磺酸吉米沙星中基因毒性杂质被引量：18
- 2014年
- 目的：建立测定注射用甲磺酸吉米沙星中甲磺酸烷基酯类基因毒性杂质的顶空气相色谱法。方法：以Supelco 毛细管柱（30m×250μm，0．25μm）为色谱柱，程序升温：氮气为载气，流速为0．5mL·min-1：采用微池电子捕获检测器，检测器温度为250℃：顶空进样，平衡温度为60℃，平衡时间为30min，进样口温度为110℃，进样量为1mL;分流比为1：10。结果：基因毒性杂质甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯和甲磺酸异丙酯在限度为20％～120％的范围内线性关系良好，定量限分别为0．0100、0．2500和1．2500μg·L-1．检测限分别为0．0020、0．0100和0．2500μg·L-1，平均回收率分别为99．20％、99．45％和99．98％（n=9）。结论：该方法准确、简便，适用于甲磺酸吉米沙星中基因毒性杂质的检测及限度控制。
- 范达涂家生
- 关键词：顶空气相色谱法
