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棕色固氮菌突变种UW3部分提纯的固氮酶CrFe蛋白溶液中残存细菌铁蛋白的晶体生长及鉴定被引量：2: 2004年; 从无钼、无氨而含铬的固氮培养基中生长的棕色固氮菌(Azotobacter vinelandii Lipmann)突变种UW3中纯化得到了部分纯的CrFe蛋白。在试图培养CrFe蛋白大晶体时发现，棕色晶体和砖红色晶体可同时或单独出现。SDSPAGE和厌氧天然PAGE皆表明，棕色晶体主要由与固氮酶钼铁蛋白(Avl)类似大小的亚基(～60kD)组成，而砖红色晶体则由～20kD亚基组成。免疫分析表明只有～60kD的亚基可与固氮酶钼铁蛋白的抗体反应，而～20kD亚基则无这种反应。在部分纯的CrFe蛋白溶液中，～20kD的总蛋白含量远低于～60kD蛋白的含量，表明由这种小亚基组成的蛋白只是CrFe蛋白溶液中的一种污染蛋白。用3，5-二氨基苯甲酸染色的天然电泳表明，形成砖红色和棕色晶体的蛋白是迁移率不同的两种含铁蛋白。质谱分析表明砖红色晶体蛋白为棕色固氮菌的细菌铁蛋白。分辨率为2．34A的X射线衍射结果也表明，砖红色晶体属于H3空间群，晶胞参数为a=124．965A^°，b=124．965A^°和c=287．406A^°。即将发表的三维结构解析表明，此砖红色晶体确为24聚体的细菌铁蛋白。; 赵剑峰刘合力周会娜汪志平赵颖边少敏李树兴毕汝昌黄巨富; 关键词：细菌铁蛋白棕色固氮菌突变种

缺失nifH的棕色固氮菌突变种固氮酶钼铁蛋白的结晶被引量：1: 2004年; 从限氨固氮培养基中培养的缺失nifH的棕色固氮菌(Azotobacter vinelandii Lipmann)突变种DJ54中，分离纯化出部分纯的缺失FeMoco的钼铁蛋白(△nifH Avl)。用相同纯化方法分别从DJ35和UW45突变种中纯化的△nifE Avl和NifB^-Avl的纯度明显高于△nifH Avl的纯度。在合适的结晶条件下，可得到这三种蛋白的深棕色短斜四棱柱晶体。△nifH Avl与NifB^-Avl一样，晶体形成所需的时间比△nifE Avl的长。而它结晶所需的沉淀剂和缓冲液最适浓度则与△nifE Avl的相同。SDS—PAGE鉴定表明，结晶的△nifH Avl与OP Avl的组成相似。这表明，在△nifH Avl溶液中形成的晶体可能就是该蛋白质的晶体。; 边少敏赵剑峰吕玉兵赵颖周会娜王耀萍黄巨富; 关键词：棕色固氮菌突变种固氮酶钼铁蛋白 NIFH 沉淀剂

棕色固氮菌nifE缺失突变株(DJ35)钼铁蛋白的特性被引量：1: 2005年; 从棕色固氮菌缺失nifE的突变株DJ35中纯化得到纯度约为80%的MoFe蛋白(△nifE Av1).与野生种OP中纯化出的MoFe蛋白(OP Av1)相比,△nifE Av1具有与之相同的亚基组成,并可与OP Av1的抗体发生免疫交叉反应,但在厌氧天然电泳中的迁移率略大于OP Av1.金属含量测定表明,△nifE Av1的Mo和Fe含量均显著下降.△nifE Av1单独与OP Fe蛋白互补时不具乙炔还原活性,但可被从OP Av1中抽提出的FeMo-co体外激活.△nifE Av1的圆二色谱450nm附近区域与OP Av1的相似,而电子顺磁共振谱中g≈3.7的信号则完全消失,g≈4.3和2.0处的信号也分别下降75%和50%左右.上述结果表明,从DJ35中纯化出的△nifE Av1是一种FeMo-co缺失而P-cluster正常的MoFe蛋白.; 赵颖边少敏张纯喜周会娜王煌平赵剑峰黄巨富; 关键词：棕色固氮菌电子顺磁共振 NIFE 缺失突变株钼铁蛋白

Crystallization of Nitrogenase MoFe Protein from a Mutant nifE Deleted Strain of Azotobacter vinelandii被引量：2: 2003年; Under a suitable condition of crystallization, dark brown short rhombohedron crystals could be obtained from FeMoco-deficient MoFe protein (DeltanifE Avl) purified from a nifE deleted mutant DJ35 of Azotobacter vinelandii Lipmann grown in NH3-limited medium. The number, size and quality of crystals were significantly affected by either the concentration of precipitants and buffer or diffusion method. The longest sides of the largest crystal of DeltanifE Avl protein, which was obtained by vapor diffusion in the hanging drop method, were 0.12 and 0.13 mm, respectively.; 赵颖赵剑峰吕玉兵汪志平王耀萍黄巨富; 关键词：CRYSTALLIZATION

固氮菌突变种DJ35钼铁蛋白和UW3细菌铁蛋白的纯化、特性、晶体生长及鉴定: 一、棕色固氮菌突变种DJ35固氮酶钼铁蛋白的纯化、体外重组及结晶研究棕色固氮菌(Azotobacter vinelandii Lipmann)突变种DJ35的菌体破碎后,所得的未经加热的粗提物经DEAE Cellulos...; 赵剑峰; 关键词：细菌铁蛋白纯化和特性; 文献传递

两种新型固氮酶组分Ⅰ蛋白的晶体生长研究: ＜正＞由固氮酶起关键作用的生物固氮是自然界最重要的活动之一。经典固氮酶由组分Ⅰ蛋白（MoFe蛋白）和组分Ⅱ蛋白（Fe蛋白）组成。长久以来,人们一直将Mo当作固氮酶必需的组成元素,但无Mo含V和只含铁的第二和第三固氮酶体...; 赵颖赵剑峰吕玉兵代小虎仓怀兴王耀萍黄巨富; 文献传递

三种缺失铁钼辅因子的固氮酶钼铁蛋白结晶研究: 自然界中,很多在生命活动中起着重要作用的金属酶对氧都很敏感。组成固氮酶的两种组分蛋白,钼铁(MoFe)蛋白和铁(Fe)蛋白,及它们分子内的三种金属原子簇也是这样。MoFe蛋白中的铁钼辅因子(FeMoco)被公认为N还原中...; 赵剑峰吕玉兵赵颖代小虎王耀萍黄巨富; 文献传递

固氮酶晶体学研究进展: 2004年; 生物大分子的功能取决于它的空间结构。X射线衍射分析是获得生物大分子结构信息的常用方法。本文对固氮酶晶体的生长及其X射线衍射分析的主要进展简要地进行了介绍和评论。最后展望了今后的发展及问题。; 赵剑峰周会娜赵颖边少敏黄巨富; 关键词：固氮酶晶体空间结构 X射线衍射分析生物大分子

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赵剑峰