韩庆旺
- 作品数：16 被引量：33H指数：3
- 供职机构：中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划江苏省科技厅科研基金北京市科技新星计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 乙型肝炎病毒蛋白和绿色荧光蛋白的共表达研究被引量：6
- 2008年
- 目的:构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的乙型肝炎病毒(HBV)真核表达载体,并研究其在真核细胞和小鼠体内的共表达。方法:以质粒pBR322-HBVadr2.0和pCX-EGFP为基础,构建含有双拷贝HBV全基因组DNA和EGFP基因的真核表达载体pCX-EGFP-HBVadr2.0,分别转染真核细胞和小鼠肝组织,建立体外、体内表达系统,研究GFP和HBV基因的表达。结果:构建了真核表达载体pCX-EGFP-HBVadr2.0,EGFP和HBV病毒蛋白在体内和体外均可表达。结论:构建的pCX-EGFP-HBVadr2.0真核表达载体可以GFP作为HBV存在与否的报告基因,提高了培育检测转基因小鼠的效率,为转基因小鼠的制备及后续研究奠定了基础。
- 黄洁訾小渊韩庆旺李建秀王新民杨勇骥胡以平
- 关键词：乙型肝炎病毒增强型绿色荧光蛋白真核表达载体转基因小鼠
- SOX9的表达在诱导肝细胞向胰腺干祖样细胞转化中的意义研究被引量：2
- 2013年
- 目的:研究SOX9的表达在诱导肝细胞向胰腺干祖样细胞转化过程中的意义。方法:分离培养小鼠原代肝细胞,包装、浓缩表达OCT4的慢病毒并感染肝细胞,使用RT-PCR监测慢病毒感染后肝细胞中SOX9的表达,并根据SOX9表达情况尝试向胰腺干祖样细胞诱导。使用PCR和免疫荧光鉴定生成的胰腺干祖样细胞。结果:肝细胞感染OCT4-慢病毒后,肝细胞内颗粒逐渐释出,细胞折光性增强。SOX9表达从第6 d持续至第8 d。从SOX9阴性的第4 d开始向胰腺诱导,无集落样的胰腺干祖样细胞生成,RT-PCR检测其标志物CK19为阴性;从SOX9阳性的第6 d开始向胰腺诱导,可见集落样生长的胰腺干祖样细胞,RT-PCR检测CK19为阳性,免疫荧光染色显示CK19表达在胞浆中。结论:肝细胞向胰腺干祖样细胞转化过程中SOX9的表达提示了"兼性肝细胞"的出现,此细胞具有向胰腺谱系诱导分化的潜能,这为进一步生成有功能的胰岛内分泌细胞和实现糖尿病的细胞替代治疗提供了理论和实验依据。
- 李冰郝好杰韩庆旺申晶程愈母义明
- 关键词：SOX9胰腺干细胞
- 嵌合抗原受体及其基因和重组表达载体、工程化CD138靶向性的NKT细胞及其应用
- 本发明公开了一种嵌合抗原受体及其基因和重组表达载体、工程化CD138靶向性的NKT细胞及其应用，所述嵌合抗原受体为CD138ScFv-2-CD8-CD137-CD3ζ，由CD138ScFv-2、CD8的铰链区和跨膜区、C...
- 韩庆旺付小兵韩为东刘洋王晓慧
- 文献传递
- Oct4介导肝细胞直接重编程为Pdx-1阳性细胞
- 目的:糖尿病是一组慢性血葡萄糖水平增高为特征的代谢性疾病,口服降糖药及胰岛素替代治疗无法避免长期并发症和血糖水平紊乱的发生,所以功能性胰岛β细胞的替代治疗成为最切实有效的方法。本实验通过慢病毒载体在小鼠原代肝细胞中异位过...
- 郭恩凯李冰申晶程愈郝好杰韩庆旺伍志强韩为东母义明
- LRP16短发夹RNA慢病毒载体的构建及LRP16稳定抑制细胞的建立
- 2014年
- 目的:构建靶向LRP16基因的短发夹RNA(shRNA)慢病毒表达载体,鉴定其在HeLa细胞中对LRP16的抑制效果。方法:构建pWPT-U6-LRP16shRNA-CMV-GFP慢病毒载体,通过病毒感染、细胞筛选、Western印迹等步骤,获得LRP16基因稳定抑制的细胞株。结果:构建了具有LRP16干扰效果的慢病毒载体,感染HeLa细胞后获得了稳定沉默LRP16及对照的细胞株;经克隆筛选,在荧光显微镜下观察到近似100%感染细胞发出绿色荧光;Western印迹证实pWPT-U6-L374-CMV-GFP和pWPT-U6-L668-CMV-GFP均可显著抑制HeLa细胞株中LRP16蛋白的表达,其中pWPT-Gsi-L374-GFP的抑制效果更好。结论:构建了靶向人LRP16基因shRNA慢病毒载体及LRP16稳定抑制的HeLa细胞系。
- 王春萌柏苗苗伍志强李小雷李祥梅倩韩庆旺韩为东
- 关键词：LRP16HELA细胞慢病毒载体
- 短发夹RNA慢病毒载体稳定抑制NLRP3表达的HepG2细胞的构建
- 2015年
- 目的:构建针对NLRP3基因的短发夹RNA(sh RNA)慢病毒表达载体,在Hep G2细胞中鉴定该载体对NLRP3的抑制效果。方法:设计针对NLRP3基因的sh RNA序列,将其插入慢病毒表达载体p WPT-U6-sh RNA-CMV-GFP中,将载体与包装质粒ps PAX2、p MD2.G共转染293T细胞,进行病毒包装;得到的病毒原液浓缩后系列稀释为9个浓度递减的病毒液,分别转染293T细胞后进行滴度测定;用获得的慢病毒液感染人肝癌细胞系Hep G2,获得稳定沉默NLRP3的细胞株;利用实时定量PCR和Western印迹检测稳定细胞株中NLRP3的沉默效应。结果:构建了具有沉默效应的慢病毒干扰载体;稀释法测定干扰病毒滴度为2×108TU/m L;实时定量PCR和Western印迹实验均证实慢病毒转染后,细胞株中NLRP3表达水平明显降低。结论:构建了人NLRP3基因特异性慢病毒干扰载体,获得NLRP3基因稳定干扰的Hep G2细胞株。
- 孙晓雅韩庆旺宋晓艳何文俊郝好杰韩为东母义明
- 关键词：NLRP3短发卡RNA慢病毒载体HEPG2细胞
- Oct4介导小鼠原代肝细胞直接重编程为Pdx-1阳性细胞
- 2013年
- 目的:Oct4介导小鼠原代肝细胞直接重编程为Pdx-1阳性细胞的研究。方法:利用小鼠慢病毒载体pWPT-Oct4联合包装质粒包装病毒,含有PEG6000的病毒浓缩液对病毒原液进行浓缩;慢病毒浓缩液感染利用两步胶原酶灌流法分离培养的小鼠肝细胞;RT-PCR检测肝脏、胰腺谱系及多能性转录因子表达。结果:含有Oct4慢病毒感染小鼠原代肝细胞后,Oct4出现表达,肝细胞相关转录因子(Alb、Afp)表达逐渐下降,内胚层早期标志物Foxa2的表达随时间的增加而减弱,Sox17在感染后12d、18d出现表达,并表达胰腺发育过程中的关键性基因-胰十二指肠同源异盒蛋白-1(pancreatic duodenal homeobox-1,Pdx-1);不表达Nanog及Sox2等多能性基因。结论:在Oct4介导下成功去分化小鼠原代肝细胞,出现Pdx-1阳性细胞。
- 郭恩凯李冰申晶程愈郝好杰韩庆旺伍志强韩为东母义明
- 关键词：OCT4肝细胞重编程PDX-1
- 工程化CD20靶向性的NKT细胞及其制备方法和应用
- 本发明涉及一种工程化CD20靶向性的NKT细胞及其制备方法和应用，该细胞是嵌合抗原受体CD20ScFv-CD8-CD137-CD3ζ修饰的NKT细胞，所述嵌合抗原受体的氨基酸序列如序列表中SEQID NO.1所示。其制备...
- 韩为东韩庆旺王瑶付小兵
- 文献传递
- 嵌合抗原受体及其基因和重组表达载体、工程化CD138靶向性的NKT细胞及其应用
- 本发明公开了一种嵌合抗原受体及其基因和重组表达载体、工程化CD138靶向性的NKT细胞及其应用，所述嵌合抗原受体为CD138ScFv-CD8-CD137-CD3ζ，由CD138ScFv、CD8的铰链区和跨膜区、CD137...
- 韩为东韩庆旺王晓慧陈美霞王瑶付小兵
- 文献传递
- RNA干扰对VEGF在人卵巢癌细胞中表达及细胞增殖的影响被引量：8
- 2005年
- 目的:探讨小发夹RNA(shRNA)载体介导抑制人卵巢癌细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth fac-tor,VEGF)的表达和对卵巢癌细胞增殖的影响。方法::采用脂质体介导的方法将抗VEGF小发夹状双链RNA真核基因表达载体转染到人卵巢癌细胞(HO-8910)中,用G418筛选获得阳性克隆。用Western印迹法、RT-PCR检测VEGF基因在卵巢癌细胞中的表达;通过MTT及细胞周期分析观察其对卵巢癌细胞增殖的影响。结果:转染特异性小发夹RNA质粒表达载体的HO-8910细胞中VEGF表达量明显减少;HO-8910细胞生长减慢,阻滞于G1期的增多,S期细胞减少。结论:VEGF小发夹RNA质粒载体可显著抑制HO-8910细胞中的VEGF基因的表达,抑制卵巢癌细胞的增殖,该研究为应用RNAi进行肿瘤的基因治疗提供了实验依据。
- 韩庆旺樊燕蓉傅更锋刘新卷徐根兴
- 关键词：RNA干扰血管内皮细胞生长因子卵巢肿瘤增殖
