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高为民

作品数：2 被引量：14H指数：2
供职机构：中国农业大学生物学院微生物学与免疫学更多>>
发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
相关领域：农业科学生物学更多>>

合作作者

文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇生物学
  • 1篇农业科学

主题

  • 1篇亚克隆
  • 1篇中华根瘤菌
  • 1篇片段
  • 1篇苜蓿中华根瘤...
  • 1篇耐盐
  • 1篇克隆
  • 1篇基因文库
  • 1篇根瘤
  • 1篇根瘤菌
  • 1篇DNA片段

机构

  • 1篇中国农业大学

作者

  • 1篇张海瑜
  • 1篇杨苏声
  • 1篇高为民
  • 1篇陈雪松
  • 1篇阚凤玲

传媒

  • 1篇微生物学报

年份

  • 1篇1999
共 2 条 记 录，以下是 1-1
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排序方式：
苜蓿中华根瘤菌与耐盐有关的DNA片段的克隆被引量：10
1999年
以耐盐的苜蓿中华根瘤菌（Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｍｅｌｉｌｏｔｉ）０４２Ｂ为材料，制备其总ＤＮＡ，经过限制性内切酶ＥｃｏＲⅠ的部分酶解，利用电洗脱方法回收１５ ～２５ｋｂ 大小的ＤＮＡ 片段。以碱法制备载体质粒ｐＬＡＦＲⅠ，用ＥｃｏＲⅠ将其切成线状，然后用Ｔ４ＤＮＡ 连接酶将回收片段与线状载体连接，利用包装蛋白进行包装后，感染大肠杆菌（ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）Ｓ１７１，构建了０４２Ｂ的基因文库。以固体亚硝基胍作为诱变剂处理出发菌株，在０５ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ 的条件下，从２０００ 个菌落中筛选得到１２ 株０４２Ｂ的盐敏感突变株，以其中稳定的盐敏突变株ＧＺ１７ 为受体菌，利用两亲本杂交将含有０４２Ｂ的ＤＮＡ 片段的ｐＬＡＦＲⅠ重组质粒转移到ＧＺ１７ 中，在含有四环素和０５ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ 的基本培养基上筛选出能够耐盐的阳性克隆，获得了与耐盐有关的７ｋｂ 长的ＤＮＡ片段。对该片段进行亚克隆，最终获得了４ｋｂ
陈雪松张海瑜高为民朱坤阚凤玲杨苏声
关键词：苜蓿中华根瘤菌耐盐基因文库亚克隆
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