陈雪松
- 作品数：2 被引量：13H指数：2
- 供职机构：中国农业大学生物学院微生物学与免疫学更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 苜蓿中华根瘤菌与耐盐有关的DNA片段的克隆被引量：9
- 1999年
- 以耐盐的苜蓿中华根瘤菌（Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｍｅｌｉｌｏｔｉ）０４２Ｂ为材料，制备其总ＤＮＡ，经过限制性内切酶ＥｃｏＲⅠ的部分酶解，利用电洗脱方法回收１５ ～２５ｋｂ 大小的ＤＮＡ 片段。以碱法制备载体质粒ｐＬＡＦＲⅠ，用ＥｃｏＲⅠ将其切成线状，然后用Ｔ４ＤＮＡ 连接酶将回收片段与线状载体连接，利用包装蛋白进行包装后，感染大肠杆菌（ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）Ｓ１７１，构建了０４２Ｂ的基因文库。以固体亚硝基胍作为诱变剂处理出发菌株，在０５ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ 的条件下，从２０００ 个菌落中筛选得到１２ 株０４２Ｂ的盐敏感突变株，以其中稳定的盐敏突变株ＧＺ１７ 为受体菌，利用两亲本杂交将含有０４２Ｂ的ＤＮＡ 片段的ｐＬＡＦＲⅠ重组质粒转移到ＧＺ１７ 中，在含有四环素和０５ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ 的基本培养基上筛选出能够耐盐的阳性克隆，获得了与耐盐有关的７ｋｂ 长的ＤＮＡ片段。对该片段进行亚克隆，最终获得了４ｋｂ
- 陈雪松张海瑜高为民朱坤阚凤玲杨苏声
- 关键词：苜蓿中华根瘤菌耐盐基因文库亚克隆
- 苜蓿中华根瘤菌与耐盐有关DNA片段的亚克隆和测序分析被引量：4
- 2001年
- 将苜蓿中华根瘤菌 (Sinorhizobiummeliloti) 0 4 2B与耐盐有关的 4kbClaⅠDNA片段克隆在 pML1 2 2上 ,用HindⅢ酶切下其 2 4kbDNA片段 ,回收后与 pBBR1 MCS2连接 ,然后转化大肠杆菌 (Escherichiacoli)DH5α,筛选到转化子GS2。将残留在 pML1 2 2上 1 6kbClaⅠ HindⅢDNA片段连同质粒一起回收 ,让其自连 ,转化大肠杆菌S1 7- 1 ,得到转化子GS0。以GS0为供体 ,0 4 2B的盐敏感突变株GZ1 7为受体 ,进行二亲本杂交 ,没有得到接合子。以GS2为供体 ,GZ1 7为受体 ,在辅助质粒pRK2 0 1 3的协助下 ,进行三亲本杂交 ,筛选到接合子GG2 ,获得 2 4kbHindⅢ与耐盐有关的DNA片段。将此片段连接到测序载体 pGEM 7Zf(+)上进行测序。测序结果表明 ,该 2 4kbHindⅢDNA片段含有 3个开放阅读框 (ORF)。在此基础上再一次亚克隆 ,获得 1 9kb与耐盐有关的DNA片段。
- 葛世超樊振川陈雪松杨苏声
- 关键词：苜蓿中华根瘤菌耐盐亚克隆测序
