黄保英
- 作品数：61 被引量：56H指数：4
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学化学工程更多>>
- 基于多重PCR-质谱的18种呼吸道病毒高通量检测引物组、试剂盒和检测方法
- 本发明公开了基于多重PCR‑质谱的18种呼吸道病毒高通量检测引物组、试剂盒和检测方法，属于生物技术领域。本发明针对18种常呼吸道病毒分别设计扩增引物和延伸引物，并开发一种可以同时检测和特异性识别18种呼吸道病毒的高通量方...
- 谭文杰陆柔剑秦影黄保英翟德胜
- 广谱流感疫苗研究进展被引量：6
- 2008年
- 黄保英王文玲阮力
- 关键词：流感疫苗广谱呼吸道传染病流感病毒病毒亚型疫苗接种
- 甲型流感病毒核蛋白在大肠杆菌中的可溶性高效表达与纯化被引量：4
- 2011年
- 为了在大肠杆菌中高效表达甲型流感病毒A/京科/30/95(H3N2)核蛋白NP,以便对原核表达的NP蛋白进行免疫原性研究,本研究通过密码子优化及全基因合成等方法,将3种形式的NP基因:与6×His标签融合的NP基因NP(His)、非融合的野生型NP基因NPwt及非融合的按大肠杆菌优势密码子改造的基因NP(O)分别插入原核表达载体pET-30a,构建了表达3种形式NP基因的3种原核表达质粒并研究不同质粒中NP蛋白的表达形式、条件、纯化工艺及抗原性。限制性酶切反应与测序表明,三种形式的NP基因均正确插入原核表达质粒pET-30a;SDS-PAGE凝胶电泳显示,三种形式的NP基因均能在大肠杆菌中表达,NP(O)基因的表达量最高;在不同温度诱导条件下,NP蛋白呈现可溶性表达,NP(O)基因可溶性高效表达的条件为:T=25℃,t=10 h;经阴离子交换和凝胶过滤层析两步纯化,可溶性表达的NP蛋白纯度可达90%;Western blot检测显示,纯化的NP能与流感病毒A/PR/8/34(H1N1)株感染小鼠的血清发生特异性结合。这些结果表明,非融合表达的密码子优化甲型流感病毒NP蛋白能在大肠杆菌中高效表达和纯化,同时保持良好的免疫反应活性。
- 黄保英王文玲王秀平蒋涛谭文杰阮力
- 关键词：甲型流感病毒核蛋白原核系统密码子优化蛋白质表达
- 石蒜碱在制备广谱抗冠状病毒药物中的应用
- 本发明公开了石蒜碱在制备广谱抗冠状病毒药物中的应用。本发明选用无毒性浓度的石蒜碱进行广谱抗冠状病毒研究，发现石蒜碱能在体外有效抑制β群冠状病毒HCoV‑OC43、MERS‑CoV、MHV‑A59以及α群冠状病毒HCoV‑...
- 谭文杰申梁黄保英牛军伟
- 文献传递
- 甲型流感病毒NP和M2e融合蛋白高效表达和纯化
- 2015年
- 目的 探索甲型流感病毒NP-M2e融合蛋白在大肠埃希菌中可溶性高效表达和纯化的条件.方法 将NP-M2e融合基因（NM2e）经密码子优化后插入pET30a后获得pET30a-NM2e原核表达质粒,通过转化BL21（DE3）后的克隆筛选、诱导温度与诱导时间等条件的优化实现NM2e蛋白在大肠埃希菌中的可溶性高效表达;表达产物经离子交换层析与分子筛层析纯化并通过Western-Blot鉴定其抗原性.结果 NM2e基因正确插入pET30a中并能在大肠埃希菌中表达;25℃温度诱导下NM2e蛋白出现可溶性表达,诱导时间由4h延长至10 h可明显提高蛋白表达量;可溶性NM2e蛋白经阴离子交换和凝胶过滤层析两步纯化后的纯度可达90％,纯化产物能特异性结合NP鼠多抗及M2e鼠单抗.结论 甲型流感病毒NM2e融合蛋白能在大肠埃希菌中高效表达和纯化并保持良好的免疫反应活性。
- 黄保英王秀平谭文杰王文玲阮力
- 关键词：流感病毒A型原核细胞蛋白质工程
- 一种编码甲型流感病毒NP蛋白和M2e多肽的融合基因
- 一种编码甲型流感病毒NP蛋白和M2e多肽的融合基因。所属技术领域：1.生物技术，2.基因工程疫苗。本发明提供一种根据大肠杆菌偏爱密码子优化的人工合成的编码甲型流感病毒核壳蛋白NP和基质蛋白2胞外区M2e多肽的融合基因NM...
- 阮力王文玲黄保英王秀平
- 季节性流感病毒H1N1和H3N2疫苗株在BALB/c小鼠中的传代适应被引量：1
- 2015年
- 目的 探索季节性流感病毒H1N1和H3N2疫苗株在BALB/c小鼠中传代适应的可能性.方法 将2008-2009年度季节性流感病毒疫苗株滴鼻感染BALB/c小鼠,在病毒增殖高峰期取肺组织制备肺悬液,连续传代10代,并对野生型与鼠肺适应株在小鼠中的致死性与全基因组序列进行比较.结果 H3N2疫苗株感染BALB/c小鼠后均未在肺部检测到病毒;而H1N1疫苗株感染小鼠后第2天为病毒生长高峰期,病毒滴度随传代次数的增加而升高;全基因组序列分析结果表明HA-N142D突变与病毒毒力的的提高密切相关.结论 H3N2疫苗株难以在BALB/c小鼠中有效复制与适应;而H1N1疫苗株能够在BALB/c小鼠中有效复制,其毒力可以通过连续的鼠肺传代而提高,HA-N142D突变对H1N1疫苗株致病性的增加密切相关,为进一步研究流感病毒鼠肺适应的分子机理奠定了基础.
- 黄保英王秀平王文玲谭文杰阮力
- 关键词：流感病毒A型流感疫苗
- 甲型流感病毒X31(H3N2)小鼠适应后毒力增强与HA及PB2突变相关
- 2019年
- 流感小鼠适应毒株及感染模型是研究流感病毒致病机理、评价抗流感病毒药物和疫苗效果的重要工具。为建立甲型流感病毒X31(H3N2)的鼠肺适应毒株,并探讨其在小鼠适应过程中毒力增强的分子机制,本研究将X31在BALB/c小鼠肺组织中连续传代,通过观察病毒滴度测定、感染小鼠症状变化、体重改变和致死力等指标,发现X31经过鼠肺连续传代10次以后,病毒毒力逐渐增强,与原代病毒相比,鼠肺中病毒滴度提高10倍,半数致死量(50%lethal dose,LD50)提高大于1 000倍。确定获得高致病力的鼠肺适应毒株(Mouse adapted X31,X31MA);对X31MA毒株全基因组测序发现,血凝素(Hemagglutinin,HA)基因出现3个有义突变(P221H、V309I、K411T),聚合酶碱性蛋白2(Basic protein 2,PB2)基因出现1个有义突变(M483T)。结果表明,通过在小鼠肺组织中连续传代X31(H3N2)致病力增强,其HA和PB2蛋白中四个适应性突变位点可能与流感病毒X31MA毒力增加相关。本研究为流感疫苗评价及致病机制研究提供了重要技术支持。
- 鲁福娜王文玲张雅薇童贻刚刘科芳黄保英沈晓玲谭文杰
- 关键词：甲型流感病毒突变位点致病力
- 麦考酚酸及其衍生物吗替麦考酚酯在制备广谱抗冠状病毒药物中的应用
- 本发明公开了麦考酚酸及其衍生物吗替麦考酚酯在制备广谱抗冠状病毒药物中的应用。本发明选用无毒性浓度的麦考酚酸及其衍生物吗替麦考酚酯进行广谱抗冠状病毒研究，发现二者均能在体外有效抑制β群冠状病毒HCoV‑OC43、MERS‑...
- 谭文杰申梁黄保英牛军伟
- 文献传递
- 基于Avicel-结晶紫染色空斑的中东呼吸综合征冠状病毒感染滴定与中和抗体检测方法被引量：3
- 2017年
- 目的针对中东呼吸综合征冠状病毒（Middle East respiratory syndrome coronavirus, MERS-CoV），建立安全、操作简易的空斑试验检测方法。方法将MERS-CoV（EMC/2012）感染Vero或Huh7.5细胞，通过研究MERS-CoV感染后镜下细胞病变与染色后蚀斑，比较染毒时间（2 d和3 d）以及细胞培养覆盖物[琼脂、微晶纤维素-羧甲基纤维素钠复合物（Avicel）]对空斑试验的影响，确定MERS-CoV空斑试验适用的细胞类型、染毒时间以及细胞培养覆盖物，并将该方法用于MERS-CoV中和抗体的检测。结果MERS-CoV感染Vero细胞后能形成清晰的病毒空斑；染毒后3 d后能稳定清晰地形成MERS-CoV特异性空斑；微晶纤维素-羧甲基纤维素钠复合物覆盖细胞所产生的病毒空斑较琼脂覆盖物更为清晰，操作简易，更易于在BSL-3实验室进行操作；该方法可用于MERS-CoV中和抗体的检测。结论建立了基于Avicel-结晶紫染色技术的适用于BSL-3实验室操作的MERS-CoV空斑试验方法，为MERS-CoV的滴定、中和抗体检测等提供了实验资料。
- 王文玲黄保英王慧娟赵莉陆柔剑朱娜邓瑶谭文杰
- 关键词：VERO细胞
