黄勇
- 作品数：8 被引量：93H指数：4
- 供职机构：扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划江苏省高校高新技术产业发展项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鹅源新城疫病毒ZJI株基因组cDNA克隆的序列修饰被引量：2
- 2005年
- 将鹅源新城疫病毒ZJI株全基因组cDNA克隆通过酶切切下包含T7启动子区域和转录载体的片段,将其自身环化后获得约6.5kb的质粒。设计引物,利用基因定点突变技术,在此质粒上T7启动子与NDV Leader序列之间突变插入额外的3个G碱基,将此突变最终引入到原基因组cDNA克隆中。应用RT-PCR技术从尿囊液中扩增NDV基因组F/HN基因区域部分片段,利用限制性内切酶BsmB I将扩增片段连接,最终将原cDNA克隆中相应片段替换下。测序结果表明,原基因组cDNA克隆中特定位置碱基插入突变成功,F/HN基因区域碱基突变均得以纠正。以上cDNA克隆的修饰与替换为该毒株的反向遗传研究打下了基础。
- 刘玉良胡顺林张艳梅吴艳涛刘秀梵Rmer-Oberdrfer AngelaWeits JuttaLange Martina黄勇龙进学
- 关键词：鹅源新城疫病毒基因定点突变
- 鹅源新城疫病毒ZJ1株微型基因组的构建及其初步应用被引量：7
- 2005年
- 在获得鹅源新城疫病毒ZJ1株全基因组序列的基础上 ,用增强型绿色荧光蛋白 (eGFP)报告基因取代鹅源新城疫病毒ZJ1株整个编码区 ,只保留与病毒复制、转录和病毒粒子包装相关的调控序列 ,将其反向克隆入转录载体TVT7R(0 0 )中 ,构建了该毒株的微型基因组。当转染用辅助病毒ZJ1株感染的HEp_2细胞时报告基因得到表达 ,表明此微型基因组RNA可被辅助病毒提供的NP、P和L蛋白翻译。同时将该病毒NP、P和L蛋白基因分别克隆入真核表达载体pCI_neo中 ,构建了表达该病毒NP、P与L蛋白的辅助质粒 ,用此微型基因组对辅助质粒的表达产物进行了功能鉴定并对该病毒拯救过程中痘苗病毒的最适感染剂量进行了摸索。
- 张艳梅刘玉良黄勇贾立军刘秀梵卢建红韦栋平吴艳涛
- 关键词：新城疫病毒病毒拯救
- 运用锚引物扩增新城疫病毒鹅源分离株基因组末端序列被引量：1
- 2002年
- 在T4RNA连接酶的作用下,将人工合成的锚引物直接与新城疫病毒(NDV)鹅源毒株ZJ1株的基因组5′末端的反转录产物及NDV基因组3′末端直接相连,然后用聚合酶链反应(PCR)和RT PCR分别快速扩增基因组5′末端和3′末端。测序结果表明:3′末端的Leader序列为55nt,5′末端的trailer序列为114nt。将该序列与GenBank报道的NDV鸡源毒株的相应序列相比,ZJ1株与6个鸡源NDV毒株的Leader和trailer序列的同源性分别为83.6%～92.7%和60 5%～63.2%。序列比较结果表明:该鹅源毒株与鸡源毒株在基因组3′端调控区有较高的同源性,而在基因组5′端的调控区同源性则较低。
- 黄勇吴艳涛刘秀梵
- 关键词：新城疫病毒基因组PCR
- 鹅源新城疫病毒NP、P和L基因的克隆与P基因的表达鉴定被引量：12
- 2004年
- 将鹅源新城疫病毒的NP、P和L基因通过RT PCR方法从尿囊液中扩增后分别克隆进pGEM Teasy载体 ,再分别亚克隆到真核表达载体pCI neo上 ,通过酶切、PCR和测序验证克隆正确。利用P基因开放性阅读框 (ORF)上靠近终止密码上游的AgeI位点 ,将报告基因绿色荧光蛋白 (GFP)基因克隆进P基因真核表达重组质粒 ,分别转染COS 1细胞和CEF细胞 ,在倒置荧光显微镜下可见到绿色荧光 ,表明GFP基因已得到表达 ,由此证明P基因也已得到表达。鹅源新城疫病毒NP、P和L基因的克隆成功 。
- 刘玉良吴艳涛黄勇邵卫星韦栋平刘秀梵
- 关键词：新城疫病毒绿色荧光蛋白
- 鹅源新城疫病毒NP、P和L基因的克隆与P基因的表达鉴定
- 本文对一株鹅源新城疫病毒NP、P和L基因成功克隆进真核表达载体,并且对P基因的表达进行了初步的鉴定.
- 刘玉良吴艳涛黄勇邵卫星韦栋平卢建红张艳梅张如宽刘秀梵
- 关键词：鹅源新城疫病毒基因克隆基因表达
- 文献传递
- 在疫苗免疫选择压力下H_9N_2亚型禽流行性感冒病毒HA基因的遗传变异被引量：34
- 2002年
- 为了解H9N2 亚型禽流行性感冒 (流感 )病毒在同亚型灭活疫苗的选择压力下的遗传变异情况 ,对某鸡场的感染鸡群进行连续 4年的跟踪监测 ,对使用疫苗前和持续使用疫苗后不同时段分离到的H9N2 亚型禽流感病毒的HA基因进行全序列分析。结果表明 ,在使用第一次分离的病毒株制备的疫苗后 8个月分离到的病毒株 ,其HA基因仅发生一个氨基酸的差异 ;但在继续使用该疫苗的第二个和第三个年头分离的病毒株 ,它们的HA基因则一直在发生较大的变化。这一发现对进一步研究禽流感病毒在不断使用疫苗的选择压力下发生变异的规律 。
- 刘红旗黄勇程坚彭大新贾立军张如宽刘秀梵
- 关键词：HA基因
- 鹅源新城疫病毒NP、P和L基因的克隆与P基因的表达鉴定
- 新城疫(Newcastle disease,ND)是威胁养禽业的一种高度接触性、烈性传染病。ND的病原是副粘病毒科、腮腺炎病毒属中的新城疫病毒(NDV)。NDV是一种有囊膜、单股不分节段的负链RNA病毒。NDV基因组全长...
- 刘玉良吴艳涛黄勇邵卫星韦栋平卢建红张艳梅张如宽刘秀梵
- 文献传递
- 鹅源新城疫病毒ZJ1株全基因组的序列测定被引量：43
- 2003年
- 依据GenBank上公布的新城疫病毒(NDV)的基因序列,自行设计了9对引物,运用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)获取覆盖NDV鹅源毒株ZJ1株全基因组的部分重叠片段。病毒RNA的5′及3′端的序列由cDNA末端快速扩增技术(RACE)获取。整个病毒基因组序列由15192个碱基组成,比GenBank上公布的其它4个NDV毒株BeaudetteC、B1、Lasota及Clone-30的全基因组序列长6个核苷酸。这6个核苷酸位于核衣壳蛋白(NP)基因内,相对于NDV毒株Lasota株全基因序列的1647nt～1648nt位。其它10个NDV毒株中的9个毒株也被验证具有此特征,且它们分属于3个不同的基因型。
- 黄勇万洪全刘红旗吴艳涛刘秀梵
- 关键词：新城疫病毒基因组
