严孝金
- 作品数：6 被引量：7H指数：2
- 供职机构：北京林业大学理学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
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- 传染性法氏囊病病毒VP5蛋白跨膜区的敲除及可溶性原核表达研究
- 2011年
- [目的]构建敲除传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP5蛋白跨膜区序列的原核表达载体,并进行目的蛋白的表达、分离和纯化。[方法]利用PCR技术分别扩增IBDVVP5基因的胞外片段和胞内片段,然后将2个片段及pET-28b(+)同时相接,即载体-胞内片段-胞外片段-载体,构建了敲除跨膜区基因片段的VP5重组表达质粒pET-VP5-FC及改进后的pET-VP5-SC。将表达质粒转化BL21(DE3),IPTG诱导后经Ni亲和层析及凝胶过滤层析纯化重组蛋白。[结果]得到可溶性表达的IBDVVP5。[结论]为进一步研究VP5蛋白的结构与功能奠定了基础。
- 严孝金李锋秦立廷李倩倩韩翠晓冯舵王笑梅高伟
- 关键词：传染性法氏囊病病毒原核表达
- 传染性法氏囊病病毒VP5蛋白跨膜区的敲除及可溶性原核表达研究(英文)被引量：3
- 2011年
- [目的]构建敲除传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP5蛋白跨膜区序列的原核表达载体,并进行目的蛋白的表达、分离和纯化。[方法]利用PCR技术分别扩增IBDVVP5基因的胞外片段和胞内片段,然后将2个片段及pET-28b(+)同时相接,即载体-胞内片段-胞外片段-载体,构建了敲除跨膜区基因片段的VP5重组表达质粒pET-VP5-FC及改进后的pET-VP5-SC。将表达质粒转化BL21(DE3),IPTG诱导后经Ni亲和层析及凝胶过滤层析纯化重组蛋白。[结果]得到可溶性表达的IBDVVP5。[结论]为进一步研究VP5蛋白的结构与功能奠定了良好的基础,另外为本文的研究方法对其它跨膜蛋白的可溶性表达及进一步研究也有一定的借鉴意义。
- 严孝金李锋秦立廷李倩倩韩翠晓冯舵王笑梅高伟
- 关键词：传染性法氏囊病病毒原核表达
- 叶绿体分裂蛋白PDV1胞质侧结构域可溶性表达条件的研究及纯化被引量：2
- 2012年
- 目的:探索叶绿体分裂蛋白PLASTID DIVISION1(PDV1)胞质侧结构域的高效可溶性表达条件,并得到高纯度目的蛋白。方法:通过改变表达载体种类、基因片段大小、诱导剂浓度、诱导温度的方法,以及运用分子伴侣的协助,实现目的蛋白高效可溶性表达。通过镍柱亲和层析和分子筛层析纯化目的蛋白。结果:(1)带His标签的目的蛋白大部分以包涵体形式存在于沉淀中;(2)截掉疏水区域并与增溶标签GST或NusA融合表达,再通过改变诱导表达条件,可以实现PDV1胞质侧结构域的可溶性表达;(3)比较目的蛋白可溶性表达量,选择高效可溶性表达体系,并在该条件下纯化得到高纯度目的蛋白。结论:PDV1胞质侧结构域的高效可溶性表达及纯化,为进一步研究该蛋白的结构及其在叶绿体分裂过程中的作用奠定了一定基础。
- 韩翠晓李锋严孝金冯舵李倩倩高宏波高伟
- 关键词：叶绿体分裂可溶性表达蛋白纯化
- 木聚糖酶XynB-E18的重组表达纯化及酶学性质测定被引量：1
- 2018年
- 为了测定木聚糖酶Xyn B-E18的活性以及酶学特征,采用大肠杆菌原核表达系统对来源于青贮饲料菌群的木聚糖酶Xyn B-E18进行重组表达纯化。在16℃180 r·min-1条件下表达,并通过Ni亲和层析和分子排阻层析的方法进行纯化,用DNS显色法测定其酶学性质。得到的重组蛋白能在大肠杆菌中获得高效表达,纯化后的蛋白溶液纯度达90%以上,蛋白分子量约为38k Da,酶活力可达1782 U,最适反应p H为6.5,在中性偏碱性条件下酶的稳定性较好,最适反应温度为50℃,在50℃以下酶的热稳定性保持较好。实验结果表明Xyn B-E18具有良好的稳定性,可具有更大应用潜力。
- 宋迎鲁芳严孝金张蓓刘永张立孟昆杨培龙姚斌高伟
- 关键词：分离纯化酶学特性
- 拟南芥LRR-RLK家族蛋白CLV1胞外域的可溶性表达与纯化
- 2011年
- 大肠杆菌NusA蛋白与拟南芥LRR-RLK家族蛋白CLAVATA1(CLV1)胞外结构域(Ectodomain,ECD)融合表达,实现了蛋白CLV1-ECD的可溶性表达;CLV1-ECD与其配体蛋白CLAVATA3(CLV3)共表达,可以明显提高它的水溶性。该实验方法快速简易地获得了大量纯化的CLV1-ECD蛋白,避免了包涵体变性与复性的复杂过程,为植物CLAVATA信号系统的进一步研究奠定了基础。
- 李锋严孝金韩翠晓冯舵李倩倩高伟
- 关键词：可溶性表达胞外结构域共表达
- 木聚糖酶xyn-E18和IBDV VP5蛋白的表达纯化及晶体生长
- 本文使用大肠杆菌表达系统,表达了类芽孢杆菌中的单结构域双功能木聚糖酶xyn-E18和传染性法氏囊病病毒的非结构蛋白VP5,并通过Ni亲和层析和分子筛层析纯化得到了较高纯度和浓度的蛋白。在此基础上使用悬滴法进行了木聚糖酶和...
- 严孝金
- 关键词：木聚糖酶传染性法氏囊病病毒
- 文献传递
