李倩倩
- 作品数：10 被引量：8H指数：2
- 供职机构：北京林业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 芽孢杆菌β-折叠桶植酸酶和虎杖白藜芦醇合酶的表达优化及初步研究
- 来源于芽孢杆菌的p-折叠桶植酸酶基因PhyH,截去N端40个氨基酸的分泌信号肽后,成功构建了原核表达体系。但我们发现表达的目的蛋白PhyHT以无活性的包涵体形式存在,降低表达温度和改变诱导剂浓度等优化条件均不能明显改善包...
- 李倩倩
- 关键词：分子伴侣可溶性表达包涵体
- 文献传递
- 一种大量制备双功能域β-折叠桶植酸酶二体的方法
- 本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种大量制备双功能域β-折叠桶植酸酶（二体）的方法。根据本发明的方法，首先利用PCR反应从phyH基因中获得双功能域β-折叠桶植酸酶基因，在大肠杆菌中的表达，变复性得到有活性的酶溶液，再分...
- 高伟鲁芳李倩倩郭刚兴
- 芽孢杆菌β-折叠桶植酸酶的原核可溶性表达优化及包涵体复性研究被引量：2
- 2012年
- 目的:来源于芽孢杆菌的β-折叠桶植酸酶基因PhyH,截去N端120个碱基编码的40个氨基酸后,成功构建了原核表达体系,通过两种方法分别得到有活性的目的蛋白PhyHT,并通过进一步纯化提高目的蛋白的纯度。方法:通过分子伴侣共表达系统提高目的蛋白的可溶性表达,并通过包涵体复性研究,从包涵体中制备出有活性的目的蛋白。结果:(1)目的蛋白PhyHT主要以包涵体形式存在于沉淀中;(2)通过优化表达条件,降低温度和诱导剂浓度均不能明显改善包涵体问题,通过构建分子伴侣共表达系统(即pG-KJE8、pGro7、pKJE7和pTf16 4种分子伴侣质粒分别与重组表达质粒pET28b-PhyHT共表达),筛选能提高目的蛋白可溶性表达的分子伴侣质粒;(3)包涵体经过复性和进一步的纯化,得到了高纯度的有生物活性的目的蛋白。
- 李倩倩李中媛冯舵黄火清韩翠晓杨培龙姚斌高伟
- 关键词：分子伴侣可溶性表达包涵体
- 传染性法氏囊病病毒VP5蛋白跨膜区的敲除及可溶性原核表达研究(英文)被引量：3
- 2011年
- [目的]构建敲除传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP5蛋白跨膜区序列的原核表达载体,并进行目的蛋白的表达、分离和纯化。[方法]利用PCR技术分别扩增IBDVVP5基因的胞外片段和胞内片段,然后将2个片段及pET-28b(+)同时相接,即载体-胞内片段-胞外片段-载体,构建了敲除跨膜区基因片段的VP5重组表达质粒pET-VP5-FC及改进后的pET-VP5-SC。将表达质粒转化BL21(DE3),IPTG诱导后经Ni亲和层析及凝胶过滤层析纯化重组蛋白。[结果]得到可溶性表达的IBDVVP5。[结论]为进一步研究VP5蛋白的结构与功能奠定了良好的基础,另外为本文的研究方法对其它跨膜蛋白的可溶性表达及进一步研究也有一定的借鉴意义。
- 严孝金李锋秦立廷李倩倩韩翠晓冯舵王笑梅高伟
- 关键词：传染性法氏囊病病毒原核表达
- 拟南芥LRR-RLK家族蛋白CLV1胞外域的可溶性表达与纯化
- 2011年
- 大肠杆菌NusA蛋白与拟南芥LRR-RLK家族蛋白CLAVATA1(CLV1)胞外结构域(Ectodomain,ECD)融合表达,实现了蛋白CLV1-ECD的可溶性表达;CLV1-ECD与其配体蛋白CLAVATA3(CLV3)共表达,可以明显提高它的水溶性。该实验方法快速简易地获得了大量纯化的CLV1-ECD蛋白,避免了包涵体变性与复性的复杂过程,为植物CLAVATA信号系统的进一步研究奠定了基础。
- 李锋严孝金韩翠晓冯舵李倩倩高伟
- 关键词：可溶性表达胞外结构域共表达
- 芽孢杆菌β-折叠桶植酸酸酶和虎仗白藜芦醇合酶的表达优化及初步研究
- 来源于芽孢杆菌的β-折叠桶植酸酶基因PhyH，截去N端40个氨基酸的分泌信号肽后，成功构建了原核表达体系。但我们发现表达的目的蛋白PhyHT以无活性的包涵体形式存在，降低表达温度和改变诱导剂浓度等优化条件均不能明显改善包...
- 李倩倩
- 关键词：芽孢杆菌
- 叶绿体分裂蛋白PDV1胞质侧结构域可溶性表达条件的研究及纯化被引量：2
- 2012年
- 目的:探索叶绿体分裂蛋白PLASTID DIVISION1(PDV1)胞质侧结构域的高效可溶性表达条件,并得到高纯度目的蛋白。方法:通过改变表达载体种类、基因片段大小、诱导剂浓度、诱导温度的方法,以及运用分子伴侣的协助,实现目的蛋白高效可溶性表达。通过镍柱亲和层析和分子筛层析纯化目的蛋白。结果:(1)带His标签的目的蛋白大部分以包涵体形式存在于沉淀中;(2)截掉疏水区域并与增溶标签GST或NusA融合表达,再通过改变诱导表达条件,可以实现PDV1胞质侧结构域的可溶性表达;(3)比较目的蛋白可溶性表达量,选择高效可溶性表达体系,并在该条件下纯化得到高纯度目的蛋白。结论:PDV1胞质侧结构域的高效可溶性表达及纯化,为进一步研究该蛋白的结构及其在叶绿体分裂过程中的作用奠定了一定基础。
- 韩翠晓李锋严孝金冯舵李倩倩高宏波高伟
- 关键词：叶绿体分裂可溶性表达蛋白纯化
- 传染性法氏囊病病毒VP5蛋白跨膜区的敲除及可溶性原核表达研究
- 2011年
- [目的]构建敲除传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP5蛋白跨膜区序列的原核表达载体,并进行目的蛋白的表达、分离和纯化。[方法]利用PCR技术分别扩增IBDVVP5基因的胞外片段和胞内片段,然后将2个片段及pET-28b(+)同时相接,即载体-胞内片段-胞外片段-载体,构建了敲除跨膜区基因片段的VP5重组表达质粒pET-VP5-FC及改进后的pET-VP5-SC。将表达质粒转化BL21(DE3),IPTG诱导后经Ni亲和层析及凝胶过滤层析纯化重组蛋白。[结果]得到可溶性表达的IBDVVP5。[结论]为进一步研究VP5蛋白的结构与功能奠定了基础。
- 严孝金李锋秦立廷李倩倩韩翠晓冯舵王笑梅高伟
- 关键词：传染性法氏囊病病毒原核表达
- 福氏志贺菌硫氧还过氧化物酶的表达、纯化、活性检测及晶体生长的初步研究被引量：2
- 2012年
- Sf2523蛋白属于硫氧还蛋白过氧化物酶(Prx)家族,在有氧代谢过程中消除活性氧,起到保护生命大分子的重要作用。通过构建原核表达体系,可溶性表达并纯化了Sf2523酶蛋白,并对蛋白进行了过氧化物酶活性检测,证明其依然具有天然活性,酶的核心结构并未发生变化。由分子排阻色谱结果发现,酶蛋白体内和体外聚集状态不同,离体蛋白聚集状态不稳定,趋于二体化。将纯化的单体蛋白即时进行了结晶实验,初筛长出了针状晶体。通过进一步切除标签蛋白进行优化处理,最终得到了均匀的三维单晶。
- 冯舵张阔李倩倩韩翠晓高伟
- 关键词：蛋白纯化酶活性晶体生长
- 一种大量制备双功能域β‑折叠桶植酸酶二体的方法
- 本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种大量制备双功能域β‑折叠桶植酸酶（二体）的方法。根据本发明的方法，首先利用PCR反应从phyH基因中获得双功能域β‑折叠桶植酸酶基因，在大肠杆菌中的表达，变复性得到有活性的酶溶液，再分...
- 高伟鲁芳李倩倩郭刚兴
- 文献传递
