冯文荣
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 供职机构：厦门大学海洋与地球学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 半滑舌鳎骨形态发生蛋白4基因的克隆和表达分析被引量：4
- 2016年
- 本研究克隆了半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)骨形态发生蛋白4(BMP4)基因的c DNA序列,并分析其在半滑舌鳎成鱼的组织表达分布及其在早期发育阶段的定位和表达变化趋势。结果表明,半滑舌鳎BMP4基因c DNA全长为1680 bp,包括了419 bp的5′非翻译区(5′UTR)、编码403个氨基酸的1212 bp的开放阅读框(ORF)以及49 bp的3′非翻译区(3′UTR)。同源性分析和分子进化聚类分析结果显示,半滑舌鳎与已报道慈鲷科(Cichlidae)各鱼种的同源性最高,并与之共同聚为鱼类BMP4分支。BMP4 m RNA在半滑舌鳎成鱼的13个组织中具有广泛的分布,并在鳃组织中表达量最高,其次在背鳍、软骨等组织具有中等水平的表达。此外,BMP4基因在早期胚胎发育阶段(卵裂期和原肠期)具有极高水平的表达,此后其表达水平逐渐降低;但在后期仔鱼期(孵化后3日龄和4日龄),其表达水平再次升高。整体原位杂交检测结果表明,BMP4 m RNA在早期仔鱼期主要在头部及躯干前部表达;后期仔鱼BMP4基因主要在冠状幼鳍、上下颌及胸鳍处表达;进入稚鱼期后在鳃盖骨及各鳍均有表达。上述研究结果揭示了BMP4在半滑舌鳎早期骨骼发育中的重要作用,为揭示海水硬骨鱼类骨骼发生、发育的调控机制奠定了理论基础。
- 马骞冯文荣柳淑芳庄志猛马慧
- 关键词：半滑舌鳎BMP4克隆整体原位杂交骨骼发育
- 半滑舌鳎线粒体DNA含量测定方法的建立与优化被引量：1
- 2014年
- 本研究旨在应用实时荧光定量PCR技术,建立半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)线粒体DNA(mtDNA)含量测定方法并进行优化。通过质粒标准品的线性化处理、模板DNA的酶切和超声处理、mtDNA和核DNA(nDNA)基因引物的筛选实验,建立半滑舌鳎mtDNA含量测定方法。结果表明,质粒标准品的构象对荧光定量PCR标准曲线影响较大,线性化的质粒更适合用作标准品;酚-氯仿方法提取的模板DNA适用于mtDNA含量测定,无需进行预处理;用D-loop和ND1这2对引物所得的拷贝数较小且结果一致,适用于mtDNA拷贝数的测定;以不同核基因为参照所得的mtDNA含量可能存在差异,当以单拷贝核基因ENC1和MYH6为参照时,可以计算出单个细胞中mtDNA含量,若以多拷贝基因GAPDH为参照,mtDNA含量测定值则较小。采用本方法分别对半滑舌鳎肝、肾、脾和肌肉组织的mtDNA含量进行重复性检测实验,结果表明,相同组织的mtDNA含量显示出良好的重复性(P>0.05),而不同组织中mtDNA含量具有差异性,可见该方法稳定可靠,能为海洋鱼类mtDNA含量检测提供借鉴。
- 冯文荣柳淑芳庄志猛马骞苏永全唐启升
- 关键词：实时荧光定量PCR半滑舌鳎
- 日本囊对虾过氧化氢酶cDNA全长克隆及表达分析被引量：3
- 2013年
- 采用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)及cDNA末端快速扩增(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术,在日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)肝胰腺组织克隆到过氧化氢酶(catalase,CAT)基因cDNA全序列.日本囊对虾CAT基因(MjCAT)cDNA全长1 802bp,开放阅读框(open reading frame,ORF)长1 563bp,编码520个氨基酸,理论等电点为7.26,分子质量为58.9ku.同源建模分析表明,MjCAT蛋白分子结构高度保守.同源性比对后发现,MjCAT基因氨基酸序列与中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)相似性最高(94.2%),其次是凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)(90.9%).随后的聚类分析表明,其与中国明对虾和凡纳滨对虾聚为一支.荧光定量结果显示,MjCAT基因在检测的多种组织中均有表达,其中以肝胰腺中表达量最高,其次为眼柄、肠、鳃、胃、心脏和血细胞,在肌肉中的表达水平最低.白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)感染12h后,肝胰腺MjCAT基因的表达量逐渐升高,48h上调至最高的表达水平.研究表明,MjCAT基因在维持机体稳态及抗氧化防御反应过程中发挥着重要的作用.
- 张曼苏永全冯文荣王军宋晓红毛勇
- 关键词：日本囊对虾过氧化氢酶白斑综合征病毒
- 转录因子Runx2和Osterix在半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)早期发育阶段的时序性表达分析被引量：1
- 2015年
- 转录因子Runx2和Osterix在高等脊椎动物骨骼发育的调控过程中具有重要作用。本研究以Runx2和Osterix基因作为研究对象,利用实时荧光定量PCR技术分析了两个转录因子在半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)成鱼的组织表达分布及其在早期发育阶段的表达水平变化。研究结果显示,Runx2和Osterix在半滑舌鳎成鱼的13个组织中具有较广泛的分布,并在脾组织中表达量最高,在背鳍、脑等组织中次之,在肝、肠、胃等组织中仅有微弱的表达。在半滑舌鳎早期发育阶段(卵期、仔鱼、稚鱼和幼鱼),Runx2和Osterix的时序性表达特征如下:1)孵化前,Runx2在卵裂期与原肠期的表达水平最高,在胚胎期最低,而Osterix表达水平呈逐渐升高的趋势并在胚胎期达到最大值,表明两个基因功能作用的起始可能存在一定的时序性;2)Runx2和Osterix在1-5日龄仔鱼阶段的表达水平均呈现先升高后降低的趋势,而在10-90日龄稚、幼鱼阶段未呈现特定的变动规律,表达量在一定范围内呈波动变化;3)相关性分析结果显示,两个基因的表达量在孵化后(1-90日龄)存在显著的相关性。研究结果表明,Runx2和Osterix基因可能共同参与半滑舌鳎早期发育阶段生长发育调控,但其与骨骼发生、发育的相关性有待进一步研究。
- 马骞庄志猛冯文荣柳淑芳
- 关键词：半滑舌鳎MRNA表达早期发育阶段
- 日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)组织蛋白酶D基因克隆及表达分析被引量：1
- 2016年
- 组织蛋白酶D是溶酶体天冬氨酸蛋白酶家族的主要成员,广泛参与动物机体细胞内蛋白质的降解过程,对维持细胞稳态和正常代谢具有重要的作用。为研究组织蛋白酶D在甲壳动物非特异性免疫和幼体发育过程中的作用,本研究采用RACE技术首次克隆得到日本囊对虾组织蛋白酶D基因cDNA序列,命名为MjCatD,其中开放阅读框长为1 161bp,编码386个氨基酸残基。序列分析和同源建模显示该基因编码的蛋白含有保守的N-糖基化位点、天冬氨酸蛋白酶签名序列、酶活化位点和非消化性组织蛋白酶D的特征序列,并且呈保守的双叶形结构。同源性比较和系统进化分析发现,MjCatD与斑节对虾、美洲螯龙虾和脊尾白虾相似性较高,并且与它们紧密聚为一支。实时荧光定量PCR结果显示,MjCatD基因在日本囊对虾多个组织中均有表达,其中肝胰腺中表达量最高。在白斑综合征病毒（white spot syndrome virus,WSSV）感染后3～24h日本囊对虾肝胰腺中MjCatD的表达量逐渐下降,而在48h急剧上调至最高表达量并且与对照组差异极显著（P〈0.01）。此外,MjCatD基因在幼体发育不同阶段中也表现出明显的变化趋势。以上研究表明,MjCatD基因可能参与日本囊对虾先天免疫反应和幼体发育过程。
- 张曼程光平苏永全徐伊桦冯文荣王军宋晓红毛勇
- 关键词：日本囊对虾组织蛋白酶D基因克隆基因表达
