刘然义
- 作品数：71 被引量：186H指数：8
- 供职机构：中山大学肿瘤防治中心更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 用于检测癌症放疗敏感性的试剂盒及其应用
- 本发明涉及用于检测癌症放疗敏感性的试剂盒及其在疗效预测上的应用，本发明对分子标志物的筛选完全是基于国际研究水平中较为实用和有效的筛选方式——全基因组RNAi文库筛选。鉴定是在体内外基于放疗耐受诱导过程中逐级进行，最终发现...
- 刘然义岳欣王雪涔黄文林
- 文献传递
- 携带截短型SARS-CoV刺突蛋白S1亚单位重组腺病毒在大鼠体内诱导的抗SARS-CoV免疫反应研究
- 研究背景和研究目的：严重急性的呼吸道综合症(severe acute respiratory syndrome，SARS)是一种由SARS病毒感染引起的突发性致命性疾病。发展有效而安全的SARS病毒疫苗是控制和预防SAR...
- 刘然义
- 关键词：SARS病毒腺病毒载体严重急性呼吸道综合症
- 文献传递
- 携带人6Ckine/IFNγ融合基因腺病毒载体的构建和鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的构建携带人次级淋巴组织趋化因子(6Ckine)和γ-干扰素(IFNγ)融合基因的重组腺病毒载体Ad-6Ckine/IFNγ,并在真核细胞中表达。方法RT-PCR法分别从人淋巴结和外周血单个核细胞中扩增人6Ckine cDNA和IFNγ cDNA,分两步先后将6Ckine cDNA和IFNγ cDNA连接到腺病毒穿梭质粒的多克隆位点上,二者之间以XbaⅠ酶切位点相连,应用AdMax腺病毒包装系统在HEK293细胞内同源重组,构建重组腺病毒载体Ad-6Ckine/IFNγ,经扩增和纯化后感染真核细胞HepG2,并检测6Ckine/IFNγ融合蛋白的表达。结果所构建的重组腺病毒Ad-6Ckine/IFNγ经扩增和纯化后,滴度为1.26×1010IFU/ml。PCR法鉴定无野生型腺病毒的污染,所携带的6Ckine/IFNγ融合基因能在真核细胞中得到表达,表达形式为分泌型。结论已成功构建重组腺病毒载体Ad-6Ckine/IFNγ,并在真核细胞中表达,为进一步研究肿瘤的基因和免疫治疗奠定了基础。
- 薛刚程莹曹永宽刘然义田伏洲黄文林
- 关键词：次级淋巴组织趋化因子Γ-干扰素融合基因腺病毒载体
- 大鼠GLUT3基因重组腺病毒载体的构建及鉴定被引量：3
- 2006年
- 目的构建携带大鼠葡萄糖转运体3(GLUT3)基因的复制缺陷型重组腺病毒载体,为研究GLUT3的生物学功能提供工具。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法获取大鼠GLUT3基因全长cDNA片段,将其克隆至穿梭质粒pShuttle中构建穿梭质粒pShuttle-GLUT3,经酶切后与线性化的腺病毒骨架质粒pAdeno-X体外连接并转化大肠杆菌DH5α,构建重组腺病毒质粒pAd-GLUT3,酶切线性化重组腺病毒质粒后转染293细胞包装成重组病毒颗粒,重组腺病毒在293细胞中反复扩增数代后,分别用聚合酶链反应(PCR)及免疫印记法(westernblot)的方法从基因和蛋白表达水平鉴定重组的腺病毒。结果经DNA测序和PCR分析显示GLUT3cDNA序列正确。成功筛选出重组腺病毒质粒pAd-GLUT3后在HEK293细胞中成功包装出重组病毒,包装后冻融细胞行PCR及westernblot检测表明重组腺病毒包装成功。结论本研究成功构建了携带大鼠GLUT3基因的复制缺陷型重组腺病毒载体。
- 李方成李军亮吴中华张培峰黄文林刘然义
- 关键词：基因克隆重组腺病毒
- 人次级淋巴组织趋化因子腺病毒载体的构建和鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的构建携带人次级淋巴组织趋化因子的重组腺病毒载体(Ad-6Ckine),并观察其在真核细胞中的表达,为进一步的肿瘤基因治疗研究奠定基础。方法 RT-PCR法从人淋巴结中扩增出人次级淋巴组织趋化因子cDNA,利用AdMax腺病毒包装系统在细胞内同源重组出Ad-6Ckine,然后用Ad-6Ckine感染真核细胞,观察6Ckine蛋白在真核细胞中的表达。结果成功构建了重组Ad-6Ckine,PCR法鉴定无野生型腺病毒的污染,构建的Ad-6Ckine所携带的6Ckine基因能在真核细胞中得到表达。结论 AdMax腺病毒包装系统是一种简便高效的重组腺病毒构建方法,构建的重组Ad-6Ckine可用于肿瘤基因治疗的体内外研究。
- 薛刚程莹曹永宽刘然义田伏洲黄文林
- 关键词：肿瘤次级淋巴组织趋化因子基因治疗腺病毒载体
- NT-3基因修饰施万细胞促进神经干细胞体外分化为神经元样细胞被引量：11
- 2005年
- 目的观测神经营养素-3(NT-3)基因修饰施万细胞(SCs)对神经干细胞体外分化为神经元样细胞的影响。方法神经干细胞(NSCs)分别与NT-3基因修饰SCs(NT-3-SCs)、LacZ基因基因修饰SCs(LacZ-SCs)和SCs在体外共培养,7d后用免疫组化方法观测NSCs的分化并计算其中神经元样细胞的分化率。结果NSCs在体外可分化为神经元样细胞(NF阳性)和神经胶质样细胞(GFAP阳性),与未基因修饰的SCs相比,NT-3-SCs能更有效地提高神经元样细胞的分化率,而LacZ-SCs与SCs没有明显区别。结论NT-3-SCs能促进NSCs向神经元样细胞分化。
- 郭家松曾园山李海标黄文林刘然义
- 关键词：干细胞神经元样细胞
- 腺病毒携带人Endostatin在Tca8113细胞和ECV细胞中的表达和作用
- Objective: To study the expression of endostatin in TCA8113 and ECV cell line infected by Ad/hEnd and to evalu...
- 陈宇丁学强黄嘉凌李立刘然义冼励坚曾益新黄文林赖坤吴秀菊柯妙拉
- 文献传递
- 腹腔注射人淋巴细胞建立人肝癌PBL-SCID嵌合模型被引量：8
- 2005年
- 目的探索建立人肝癌PBL-SCID嵌合模型的方法.方法 C57/BL SCID小鼠腹腔注射健康志愿者外周血淋巴细胞(huPBL)2×107(1.0 ml),同时右腋部皮下注射5×105(0.2 ml)HepG2细胞.第2、4周鼠尾取血ELISA法测定人IgG含量,用流式细胞仪分析小鼠外周血单个核细胞中人淋巴细胞比例.4周MTT法测定小鼠脾细胞对HepG2细胞的杀伤能力,免疫组化检测小鼠脾脏中人淋巴细胞的存在.结果模型成瘤率为100%,成瘤潜伏期12～18 d.2、4周时小鼠血中人IgG 分别达69.8 μg/ml、125.9 μg/ml,人淋巴细胞占单核细胞的比例分别为10.5%和3.5%.4周时免疫组化检测出人淋巴细胞分布于小鼠脾脏中,小鼠脾细胞对HepG2细胞的杀伤力为20.3%.处死动物,常规病理切片见肿瘤生长.结论 SCID小鼠腹腔注射人淋巴细胞、皮下注射肝癌细胞可建立人肝癌PBL-SCID嵌合模型.
- 黄嘉凌刘燕艳刘然义方壮伟申权吕明德
- 关键词：人淋巴细胞SCID人肝癌腹腔注射BL脾细胞
- 壳蛋白免疫法测定重组腺病毒滴度的方法学评价被引量：12
- 2005年
- 目的:介绍壳蛋白免疫法(hexonimmunoassay) ,并同传统细胞病变(CPE)法比较,检测其可靠性和可重复性。方法:3种重组腺病毒(Ad -lacz、Ad -hEndo和dl15 2 0 )扩增、提纯后,用壳蛋白免疫法、CPE法测定病毒滴度及A2 60 值法测定病毒总颗粒数。结果:壳蛋白免疫法和CPE法同时测定3种同批次病毒滴度,结果一致,P >0. 0 5 ;对不同批次3种腺病毒滴度测定,结果仍相似,平均差值 x±s=0. 15 2. 7±0 . 32 70 ,P >0 .0 5 ,两法有很好的相关性,r=0 913;壳蛋白免疫法对同批dl15 2 0测定19次,变异系数仅为1. 4 2 %。结论:壳蛋白免疫法是测定腺病毒滴度的有效方法,系统误差小、重复性好、结果客观可靠,可避免CPE法中由于细胞退化和工作人员主观判断造成的系统误差,比CPE法更精确、更省时。
- 张艳玲刘然义刘然义柯妙拉陈洁敏李晓红叶春玲
- 关键词：腺病毒
- mB7-1基因转染小鼠黑色素瘤细胞诱导的抗瘤效应研究
- 1999年
- 目的 :研究共刺激B7- 1(CD80 )在诱导有效的抗肿瘤免疫反应中所起的作用。方法 :在体外 ,三种肿瘤细胞与同源小鼠脾淋巴细胞混合培养 (MLTCs)后 ,测定淋巴细胞增殖指数 (MTT法 )和特异杀伤活性 (LDH释放改良法 ) ;MTT法测定肿瘤细胞体外增殖能力后 ,将B16 -neo和B16 -mB7- 1细胞分别接种于C57BL/6小鼠皮下后观察成瘤期、荷瘤小鼠存活期以及肿瘤结节生长速度。结果 :与野生型B16细胞和模拟转染的B16细胞 (B16 -neo)比较 ,mB7- 1基因转染的B16细胞 (B16 -mB7- 1)在体外刺激淋巴细胞增殖和诱导CTLs的能力明显增强(P <0 0 5 ) ;尽管两种细胞在体外无明显差异 ,但是与B16 -neo相比 ,B16 -mB7- 1细胞在同源小鼠体内生长速度明显减慢 (P <0 0 5 ) ,成瘤潜伏期和荷瘤小鼠存活期均明显延长 (P <0 0 5 )。结论 :将B7- 1基因导入弱免疫原性的黑色素瘤B16细胞中表达能增强其免疫原性 ,在体内外较有效地诱导CTL介导的抗肿瘤免疫反应。
- 刘然义王剑波屈伸周华
- 关键词：免疫原性肿瘤疫苗肿瘤
