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猪圆环病毒II型结构蛋白的二级结构及其B细胞抗原表位预测被引量：21: 2005年; 本研究以猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)II型的基因组序列为材料,采用Garnier-Robson方法、Chou-Farplus方法和Karplus-Schulz方法预测了其结构蛋白的二级结构,用Kyte-Doolittle方法对结构蛋白的亲水性进行了分析,用Emini方法预测了结构蛋白的表面可能性,以Jameson-Wolf方法预测了蛋白的抗原指数。然后综合评价了PCV-2型结构蛋白的B细胞抗原表位。结果表明,PCV-2结构蛋白形成α螺旋结构的能力较差,但是该蛋白含有较多的β折叠和转角结构,因而该蛋白具有丰富的二级结构。分析结果还表明结构蛋白具有多处抗原指数较高的区段,其中羧基端含有潜在的B细胞优势抗原表位,因此其在免疫学中的地位也应当引起重视。本研究将为猪圆环病毒的反向疫苗学的研究提供一定的理论依据。; 刘光清倪征云涛梁华丽华炯刚李双茂杜清云; 关键词：口蹄疫病毒结构蛋白 B细胞表位

鸡ILV、IBV、NDV和AIV多重RT-PCR检测方法的初步建立被引量：5: 2007年; 初步建立了鸡传染性喉气管炎(IL)、鸡传染性支气管炎(IB)、新城疫(ND)和禽流感(AI)的多重RT- PCR鉴别诊断方法,并对其特异性和敏感性进行了检测。结果表明,所设计的4对引物可对同一样品中的ILV、IBV、NDV和AIV进行特异性扩增,所扩增的目的片断的长度分别为620 bp(ILV)、445 bp(IBV)、344 bp(NDV)和240 bp (AIV);建立的RT-PCR检测方法能够检测出10 pg AIV、1 ng NDV和10 ng IBV的RNA及100 pg ILV的DNA,说明该检测方法特异性强,敏感性较高。本研究所建立的多重RT-PCR方法可用于上述鸡4种病毒性呼吸道疾病的快速鉴别诊断,在临床诊断和流行病学调查方面具有较好的应用前景。; 王非蒋建一华炯刚母安雄云涛王桂军魏建忠刘光清; 关键词：鸡传染性支气管炎鸡新城疫禽流感

转译过程中小RNA病毒与宿主细胞的相互作用被引量：1: 2005年; 小RNA病毒的转译机制不同于真核细胞mRNA的转译机制,该类病毒是借助于内部核糖体进入位点来启动内部翻译过程的,同时还伴随着宿主细胞蛋白质合成的抑制过程。在此过程中,小RNA病毒与宿主细胞间发生了一系列复杂的相互作用和信息交流,本文对该领域的研究进展作了综述。; 倪征刘光清云涛梁华丽华炯刚李双茂杜青云; 关键词：小RNA病毒内部核糖体进入位点宿主细胞

利用反向遗传学技术获得适应RK13细胞的兔出血症病毒被引量：7: 2006年; 在前期构建的兔出血症病毒(rabbithemorrhagicdiseasevirus,RHDV)全长cDNA分子的基础上,利用SP6RNA聚合酶系统,在体外转录合成了病毒RNA.用转染试剂将病毒RNA导入RK13细胞,12h后可见明显致细胞病变(CPE),用间接免疫荧光方法在RK13细胞中检测到了病毒抗原的产生.将收获的细胞培养物再次接种RK13细胞,仍然能产生明显病变.大量收取细胞培养物,经差速离心法纯化病毒后,在电子显微镜下可观察到RHD病毒粒子.结果表明,利用反向遗传学技术获得了可适应于RK13培养的RHDV,为将来研究RHDV的分子致病机理和新型疫苗等提供了有利的工具.; 刘光清倪征云涛张玉颖杜青云盛祖恬梁华丽华炯刚李双茂陈剑平; 关键词：兔出血症病毒反向遗传学全长CDNA

兔病毒性出血症病毒基因组3′端非编码区的分子克隆及生物信息学分析被引量：15: 2006年; 采用3′RACE方法对兔病毒性出血症病毒(RHDV)JX／CHA／97株基因组3′端全序列进行了扩增、克隆和测序,并利用ONAstar和DNAman软件分析了RHDV JX／CHA／97株与各参比毒株3′NCR的序列同源性,用RNA structure软件对3′NCR的二级结构进行了预测和分析。结果表明,所扩增的目的基因片段长1500 bp,包括部分VP60基因序列、ORF2基因、3′端非编码区(3′Non Coding Region,3′NCR)和poly(A)尾巴,其中 3′NCR位于ORF2终止密码子TAG之后,长59 bp,poly(A)至少含有27个A;3′NCR序列具有较高的同源性 (93．5％-100％);3′NCR二级结构可以形成2个潜在的茎-环结构(SL1和SL2),其中SL2具有一定的保守性,其形状和形成位置与poly(A)尾巴的长度关系不大,但是SL1的结构和形成位置与poly(A)尾巴的存在与否密切相关,提示poly(A)尾巴与3′NCR高级结构的稳定性以及基因组复制有一定关系。; 刘光清张玉颖云涛倪征张淼涛梁华丽华炯刚李双茂杜青云盛祖恬; 关键词：兔病毒性出血症病毒 POLY(A)

聚合酶链反应技术及其应用被引量：3: 2006年; 聚合酶链反应(PCR)技术自1985年发明至今不断得到发展和完善,在常规PCR技术的基础上,结合免疫学、计算机技术、原位杂交等技术的利用和相关仪器的运用,衍生出了各种PCR方法和技术,如原位PCR、复合PCR、反向PCR、定量PCR、不对称PCR、电子PCR及PCR芯片等。这些衍生出的PCR新类型和新方法有着独特的技术特点,解决了以往传统PCR的局限性。PCR技术作为一种革命性的新技术将不断推动分子生物学及相关学科的发展,并广泛应用于病原诊断、基因表达、遗传病检测等生命科学研究领域。; 王非蒋建一华炯刚母安雄谷根林王桂军魏建忠刘光清; 关键词：聚合酶链反应 PCR 病原诊断基因表达

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华炯刚