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倪征: 作品数：119 被引量：251H指数：7; 供职机构：浙江省农业科学院更多>>; 发文基金：浙江省自然科学基金国家自然科学基金浙江省重大科技专项基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生环境科学与工程更多>>

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番鸭呼肠孤病毒通用型RT-PCR检测引物及检测方法: 本发明公开了一种番鸭呼肠孤病毒通用型RT-PCR检测引物及检测方法，属于鸭类病毒检测技术领域。该通用型RT-PCR检测引物为上游引物：5’-CACAGTGCTACCATC-3’，下游引物：5’-CTGCTGATCATAA...; 叶伟成余斌张存云涛陈柳倪征华炯钢; 文献传递

表达小鹅瘟病毒VP2的重组鸭瘟病毒及其构建方法和应用: 本发明公开了一种表达小鹅瘟病毒VP2的重组鸭瘟病毒及其构建方法和应用，该重组鸭瘟病毒的基因组中插入有小鹅瘟病毒VP2基因，所述小鹅瘟病毒VP2基因的核苷酸序列如SEQ？ID？NO.1所示。所述构建方法包括：(1)将pDE...; 陈柳张存倪征叶伟成余斌云涛华炯钢; 文献传递

鸭坦布苏病毒抗体间接ELISA检测方法的建立和应用被引量：6: 2014年; 为建立特异性和敏感性较高的鸭坦布苏病毒（DTMUV）抗体检测方法,采用原核表达系统对DTMUV E蛋白的DⅢ结构域进行了双串联融合表达,SDS-PAGE电泳结果显示目的蛋白大小约25 Ku.Western blot结果显示,经亲和层析纯化的重组蛋白能与DTMUV阳性血清发生特异性反应.以纯化的重组DⅢ蛋白作为包被抗原,初步建立了检测DTMUV血清抗体的间接ELISA方法.采用梯度稀释法对ELISA各种反应条件进行优化,确定最适工作条件.重组抗原最适包被浓度为5 μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶100,兔抗鸭酶标抗体最适稀释度为1∶1000;抗体临界值S/P≥0.336判定为阳性,S/P≤0.287判定为阴性,介于两者之间为可疑.该方法检测禽流感病毒、鸭源新城疫、鸭甲肝病毒、鸭圆环病毒、鸭细小病毒、经典呼肠孤病毒及新型鸭呼肠孤病毒等血清均为阴性,4个批次批内与批间重复试验的OD值变异系数分别为6.21％～7.27％和3.4％～7.2％,显示该法具有很好的特异性、稳定性和重复性.用建立的间接ELISA与中和试验分别对108份疑似鸭坦布苏病血清样品进行检测,两种方法的阳性符合率为83.3％.; 余斌华炯钢刘跃生赵灵燕倪征叶伟成云涛陈柳徐辉张存; 关键词：间接酶联免疫吸附试验

DEV囊膜糖蛋白gI基因缺失病毒生物学特性研究被引量：2: 2014年; 在构建鸭瘟病毒疫苗株细菌人工染色体感染性克隆pDEV-vac的基础上,通过两步Red E/T重组,构建了gI基因缺失的pDEV-ΔgI突变体克隆,并转染鸡胚成纤维细胞获得了重组病毒rDEV-ΔgI。病毒生长曲线显示,rDEV-ΔgI的滴度从12 h到60 h稳步增加,在此期间gI基因缺失毒株病毒滴度较亲本毒株稍有降低,但病毒滴度于72 h接近并超过对照毒株。蚀斑面积测定发现rDEV-ΔgI较亲本毒rDEV-BAC增加约60%。动物实验表明,rDEV-ΔgI注射组对强毒攻击的保护率较对照组下降40%。研究表明:gI为DEV的非必需基因,且gI基因与病毒扩散、免疫保护能力等相关。; 陈柳余斌倪征华炯钢叶伟成云涛张存; 关键词：鸭瘟病毒 GI

兔出血症病毒在体外诱导细胞凋亡: 2009年; The apoptosis of RK13 cells induced by RHDV was investigated with DAPI staining,DNA ladder,Caspase 3 activity and flow cytometry,etc.The results showed that nuclear staining of infected cells with DAPI showed gradually morphological changes of the nuclei.As shown in the paper,a canonic oligonucleosome-sized DNA ladder was observed in cells harvested at 24h,48h and 72h post-infection,confirming that DNA fragmentation was induced by RHDV infection.The results of flow cytometry showed that about 63 % of cells were in apoptosis at 48h post-infection.Besides,we also demonstrated that the activation of Caspase 3 occurred during the infection process.In conclusion,our results showed that apoptosis in RHD might be determinant in the development of the pathogenesis of RHD.; 倪征魏威刘光清陈柳余斌云涛华炯钢李双茂; 关键词：兔出血症病毒凋亡 CASPASE-3

慢病毒介导的稳定表达鸭干扰素-γ细胞株的构建: 2024年; 干扰素-γ是一种具有抗病毒活性和免疫调节能力的细胞因子之一。为了建立稳定表达鸭干扰素-γ(duIFN-γ)的细胞系,本研究优化并合成了duIFN-γ基因,插入到慢病毒表达载体plenti-GIII-CMV-GFP-2A-Puro,获得重组质粒plenti-IFN,将plenti-IFN与辅助质粒共转染包装细胞293T,筛选出了携带duIFN-γ基因的重组慢病毒rlenti-IFN,将该病毒感染中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)细胞,利用有限稀释法和抗性加压筛选法,筛选出了30个具有嘌呤霉素抗性基因的单克隆细胞系。利用RT-qPCR荧光定量法对这些单克隆细胞的duIFN-γ mRNA水平进行检测,筛选出了duIFN-γ mRNA水平最高的1个单克隆细胞,对其进行扩大培养,获得了1株稳定细胞系。Western blot检测结果表明,duIFN-γ稳定表达于该细胞系中。本研究获得了1株稳定表达duIFN-γ蛋白的细胞系,该研究为开展duIFN-γ生物学功能研究、建立duIFN-γ检测方法及生产廉价鸭(禽)用干扰素奠定了基础。; 陈柳倪征刘可姝叶伟成华炯钢云涛朱寅初张存; 关键词：慢病毒 CHO细胞

鸭新病原坦布苏病毒的发现及致病特征与检测新技术: 张存云涛张大丙余斌叶伟成周彩琴李剑秋陈柳倪征华炯钢徐辉吴赟竑张传亮吴雪军; 研究成果在国际上首次发现了鸭的一种新病原坦布苏病毒，明确了其分类地位、病毒特性和致病性；建立了鸭坦布苏病毒一步法RT-PCR检测方法和实时定量RT-PCR检测方法；研制了鸡、鸭和鹅IgG通用型单克隆抗体，建立了家禽通用型...; 关键词：; 关键词：流行病学调查

鸭Ⅰ型肝炎病毒ZJ-V/2006在BHK-21细胞上的分离与鉴定: 鸭Ⅰ型肝炎病毒(duck hepatitis virus,DHV-Ⅰ)最先由Levine等用鸡胚培养方法分离得到。国外很多学者尝试利用各种细胞培养DHV-Ⅰ,但证明都很困难。国内有关细胞培养DHV-Ⅰ的研究报告很少,仅见...; 云涛倪征余斌陈柳华炯钢李双茂; 文献传递

一种分泌鸭新型呼肠孤病毒σB蛋白单抗的杂交瘤细胞、单抗及应用: 本发明公开了一种分泌鸭新型呼肠孤病毒σB蛋白单抗的杂交瘤细胞、单抗及应用。所述杂交瘤细胞保藏号为CCTCC NO：C202148，分泌的鸭新型呼肠孤病毒σB蛋白单抗，具有较高的效价，且具有较强的特异性。使用制备的单抗建立...; 云涛张存华炯钢叶伟成陈柳倪征朱寅初; 文献传递

表达鸭坦布苏病毒E蛋白的重组鸭瘟病毒的构建及其生物学特性被引量：3: 2015年; 为开展鸭瘟病毒-鸭坦布苏病毒二联苗的研究,将密码子优化的鸭坦布苏病毒(DTMUV)E基因插入转移载体p EP-BGH-end构建了p EP-BGH-E重组表达质粒。在鸭瘟病毒疫苗株细菌人工染色体(p DEVvac)的基础上,首先通过Red E/T两步重组法构建了EF1启动子替换GFP基因CMV启动子的p DEV-EF1突变体克隆,并将p EP-BGH-E质粒上的重组表达框p CMV-E-BGH-p A再次通过两步重组克隆至p DEV-EF1突变体的US7和US8基因之间,构建了携带有外源基因DTMUV E的突变体克隆p DEV-E。用磷酸钙法转染鸡胚成纤维细胞(CEFs)获得了重组病毒r DEV-E。病毒蚀斑大小测定结果显示,r DEV-E在CEFs上的蚀斑面积较亲本株相比稍有减少。Western blotting分析表明,外源蛋白E在病毒感染的CEFs细胞中成功表达。; 陈柳余斌倪征华炯钢叶伟成云涛张存; 关键词：鸭瘟病毒 E蛋白细菌人工染色体重组病毒

倪征

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