吴晓娟
- 作品数：17 被引量：39H指数：4
- 供职机构：长春生物制品研究所更多>>
- 发文基金：吉林省科技发展计划基金吉林省科技厅资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 带有IL-2基因佐剂的乙肝病毒DNA疫苗构建及其免疫效果的观察
- ：构建带有白细胞介素Ⅱ蛋白佐剂基因的乙肝病毒DNA疫苗. 方法：将微小病毒内部核糖体进入位点基因克隆到质粒pVAX1栽体多克隆位点，构建出DNA疫苗双表达载体pVAX1.将PCR扩增出的白细胞介素Ⅱ基因和HBsA...
- 吴晓娟冷梅赵大鹏崔颖杰张岩汪春义戚凤春郭新付学奇
- 关键词：乙肝病毒免疫效果
- 麻疹病毒L4株基因组全序列的测定
- 2008年
- 将麻疹病毒L4株毒种接种于CEC细胞,传代培养及鉴定合格后,用Trizol法提取总RNA,进行分段RT-PCR扩增,并将PCR产物精制后测序分析。结果表明,成功测出麻疹病毒L4株15894 nt全基因组序列,为了解其基因组结构与生物功能的关系及研究开发麻疹病毒新型疫苗而奠定基础。
- 赵大鹏姚为民于淑艳吴晓娟戚凤春汪春义张雪梅徐建国崔屹潘永前
- 关键词：基因组
- 乙肝病毒DNA疫苗的构建及其诱导小鼠的免疫应答被引量：9
- 2004年
- 构建含adr亚型HBV表面抗原基因的核酸疫苗 ,考察人白细胞介素II基因及重组白细胞介素II的免疫佐剂作用。用含有人白细胞介素II基因的真核表达质粒及基因重组白细胞介素II蛋白作为佐剂 ,将编码乙型肝炎病毒表面抗原的重组真核表达质粒 pVAX/HBS免疫BALB/C小鼠 (试验组 ) ,同时设置注射质粒pVAX的阴性对照组 ,并分别于第 2 ,4周后加强免疫各 1次。试验组在第 4周时开始有HBsAb产生 ,阴性对照组未测到HbsAb ,试验组和对照组均未检测到HBsAg。乙肝病毒DNA疫苗能引起小鼠特异性体液免疫应答 ,白细胞介素II的真核表达质粒的佐剂作用不明显 ,基因重组白细胞介素II蛋白具有提高小鼠对乙肝病毒核酸疫苗免疫应答水平的佐剂活性。
- 赵大鹏吴晓娟张岩冷梅戚凤春张连忠苏凯方勇郑全莉刘丹盛军赵一晖周剑慧
- 关键词：乙型肝炎病毒DNA疫苗HBSAB
- 胰岛素样生长因子I(IGF-I)基因的克隆及分泌表达被引量：2
- 2004年
- 目的 构建原核分泌型表达载体并高效表达胰岛素样生长因子I(IGF I)。方法 构建出 2种分泌型表达载体 ,命名为pCSA和pCST ,并将胰岛素样生长因子I(IGF I)基因插入pCSA和pCST中 ,转化E .coliW3110 ,经筛选获得工程菌pCSA/IGF I/W3110和pCST/IGF 1/W3110 ,并进行表达。结果 经SDS PAGE检测 ,在相对分子质量 76 0 0处有明显表达带 ,Westernblot表明重组蛋白具有IGF I的抗原性。结论 原核分泌型IGF I的高效表达 ,为进一步研究人IGF
- 赵大鹏王晓宇刘畅郭桥戚凤春蒙冲吴晓娟王妍盛君杨煜傅学奇
- 关键词：胰岛素样生长因子IIGF-I基因克隆分泌表达质粒
- 人Cu,Zn-SOD基因在毕赤酵母中的表达及稳定性被引量：4
- 2008年
- 目的构建人Cu,Zn-SOD基因的真核表达载体,转化毕赤酵母,并检测表达产物的稳定性。方法根据酵母密码子偏好性,合成人Cu,Zn-SOD基因,克隆至真核表达载体pPIC9k中,转化毕赤酵母GS115。甲醇进行诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。优化表达条件,并检测粗酶液的稳定性。结果经SDS-PAGE和Western blot检测,表达的目的蛋白相对分子质量为18000左右;最佳表达条件为pH6.0,甲醇浓度1.5%,持续培养96h;目的蛋白占分泌蛋白总量的27%,最高表达量为91mg/L;最佳条件下培养液上清的酶活性最高达334U/ml,粗酶对氯仿和乙醇稳定,对H2O2不稳定,对温度有一定的耐受性,pH在6和8时较稳定。结论在毕赤酵母GS115中成功表达了具备酶活性的人Cu,Zn-SOD基因。
- 迟春萍隋红李雨桐薛向光王志武牛灵刘畅王艳芳吴晓娟郭立君盛军李校堃
- 关键词：真核表达毕赤酵母稳定性
- CpG-ODN对乙肝核酸疫苗及重组疫苗免疫效果的影响被引量：5
- 2005年
- 目的研究CpG寡聚脱氧核苷酸(CpGODN)对乙肝核酸疫苗及重组(CHO细胞)疫苗免疫效果的影响。方法核酸疫苗实验组用CpGODN与乙肝核酸疫苗联合免疫BALBc小鼠,阳性对照组注射核酸疫苗,阴性对照组注射质粒pVAX1;重组疫苗分4个实验组,用CpGODN与不同剂量的重组疫苗配伍后分别免疫BALBc小鼠,阳性对照组注射重组疫苗,阴性对照组注射生理盐水。应用ELISA检测小鼠血清中的抗HBs水平。结果CpG与乙肝核酸疫苗组抗体阳转率比阳性对照组提高3倍,抗体水平提高2倍。CpG与重组疫苗组的阳转率和阳转时间均高于或早于CpG与核酸疫苗实验组。加入CpGODN后,即使重组疫苗用量减少3倍,诱导抗体水平和阳转率均无明显改变。结论CpGODN可提高乙肝核酸疫苗和重组疫苗的免疫效果,并使抗体产生的时间提前。
- 吴晓娟赵大鹏冷梅刘丹戚凤春汪春义王佳凤岳丹王华齐影付学奇
- 关键词：CPG-ODN核酸疫苗重组疫苗免疫效果乙肝寡聚脱氧核苷酸疫苗用量
- HBsAg与GM-CSF基因双表达载体的构建及其免疫效果被引量：1
- 2008年
- 目的构建乙型肝炎表面抗原基因(HBsAg)与GM-CSF基因的双表达载体,提高乙肝病毒DNA疫苗的免疫效果。方法将微小病毒内部核糖体进入位点(IRES)基因克隆到质粒pVAXⅠ多克隆位点,再将HBsAg基因和GM-CSF基因依次克隆到IRES的上、下游多克隆位点处,构建双表达载体pHIG。将pHIG转染到COS-7细胞中,检测瞬时表达情况,并用双表达质粒pHIG免疫BALB/c小鼠,检测免疫后小鼠血清中抗-HBs及其脾脏T细胞表面CD4+、CD8+分子的数量。结果在转染pHIG质粒的COS-7细胞上清液中有HBsAg的表达,pHIG双表达质粒组比pVAX/HBs组抗体产生时间提前2周,抗体阳转率提高2倍,小鼠脾脏T细胞表面CD4+分子数量及CD4+/CD8+值均高于pVAX/HBs组。结论HBsAg与GM-CSF基因双表达质粒能引起小鼠特异性免疫应答,并可提高免疫效果。
- 冷梅闫刚迟春萍韩顺子吴晓娟赵大鹏汪春义郑全莉李鑫李雨桐张秀霞姜崴
- 关键词：乙型肝炎表面抗原DNA疫苗粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子内部核糖体进入位点
- 含IL-2基因的乙型肝炎病毒DNA疫苗的构建及其免疫效果被引量：5
- 2006年
- 目的构建含白细胞介素-2(IL-2)基因的乙型肝炎病毒DNA疫苗,并考察免疫效果。方法将微小病毒内部核糖体进入位点(Internal ribosomal entry site,IRES)基因克隆到质粒pVAX1载体多克隆位点处,再将乙肝病毒表面抗原(HB-sAg)基因和IL-2基因分别连接在IRES基因的两侧,构建出乙肝病毒DNA疫苗pHII。将pHII转染COS-7细胞,进行瞬时表达。大量提取质粒后,按0、2、4周程序免疫BALB/c小鼠,以pVAX1质粒为阴性对照,pVAX/HBsAg质粒为阳性对照。第1针免疫1周后开始眼眶采血,检测血清中HBsAg和HBsAb含量。第1针免疫13周后处死小鼠,用流式细胞仪检测其脾脏T细胞表面CD4+、CD8+分子数量。结果在转染pHII质粒的COS-7细胞上清液中检测到HBsAg和IL-2的表达。实验组和阳性对照组小鼠分别于第1针免疫2、4周后,在血清中检测出HBsAb,但阴性对照组未测出。以上3组均未检测出HBsAg。实验组与阳性对照组相比,产生抗体的时间提前2周,抗体阳转率提高2.5倍,产生抗体的量也提高了近3倍。实验组CD4+分子数量和CD4+/CD8+值均高于阳性对照组。结论乙肝病毒DNA疫苗pHII成功诱导出小鼠的免疫应答,其免疫效果明显优于不含分子佐剂的乙肝DNA疫苗。
- 吴晓娟赵大鹏冷梅崔颖杰张岩汪春义戚凤春郭新陈云波何伟徐建国付学奇
- 关键词：乙型肝炎DNA疫苗白细胞介素-2佐剂
- CpG对乙肝核酸疫苗及基因重组(CHO细胞)疫苗免疫效果的影响
- 通过CpG与乙肝核酸疫苗及基因重组乙肝疫苗的联合使用,考察CpG对两种疫苗免疫效果的影响。根据注射的疫苗性质不同将BALB/C小鼠随机分成两大组,采取0、2、4周的免疫程序,三次免疫剂量与注射部位均相同。核酸疫苗组:共分...
- 吴晓娟冷梅
- 关键词：CPG乙肝核酸疫苗基因重组疫苗免疫效果
- 文献传递
- 百日咳毒素S1亚基片段在大肠杆菌中的表达
- 2009年
- 目的构建百日咳毒素(PT)S1亚基片段原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达重组蛋白。方法根据GenBank中登录的百日咳毒素S1亚基基因序列,人工合成密码子优化的S1基因,利用重叠PCR技术将S1基因上的两段DNA序列拼接在一起,形成一个新的基因序列S1′。将该序列与7ZTS表达载体连接,构建重组原核表达质粒7ZTS-S1′,转化大肠杆菌JM109(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果S1′基因经PCR鉴定及测序证明与预期相符;重组表达质粒经双酶切鉴定证明构建正确;表达蛋白的相对分子质量约17400,表达量约占菌体总蛋白的8%,且具有良好的反应原性。结论已成功构建百日咳毒素S1亚基片段重组原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达了重组蛋白,为PT单抗及其检测试剂盒的研制奠定了基础。
- 时成波曹玉锋张秀霞吴晓娟李雨桐徐光磊尹晓东
- 关键词：百日咳毒素原核表达重叠PCR
