吴育鹏
- 作品数：7 被引量：23H指数：3
- 供职机构：中国热带农业科学院热带生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家教育部“211”工程更多>>
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- 坡柳(Dodonaea viscosa L.)丛枝植原体新病原的分子鉴定
- 从四川攀枝花杧果园中表现为丛枝、小叶和黄花等症状的坡柳植株发病样品中,利用植原体16S rDNA基因的通用引物R16mF2/R16mR1和R16F2n/R16R2,对发病植株总DNA进行巢式PCR检测,同时设计植原体抗原...
- 笈小龙吴育鹏谢慧敏余乃通王健华张秀春刘志昕
- 关键词：植原体分子鉴定系统进化树
- 文献传递
- 辣椒脉斑驳病毒CP基因的原核表达及其抗血清的制备被引量：11
- 2010年
- 采用RT-PCR方法克隆了辣椒脉斑驳病毒文昌分离物(ChiVMV-WC)的CP基因,并将其连接到原核表达载体pET-30b(+)上,克隆测序以确定其阅读编码框的正确性,然后将获得的重组质粒pET30b-ChiVMVCP转化大肠杆菌Rosetta(DE3)后,用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析结果表明,CP基因在大肠杆菌中获得了高效表达,获得的融合蛋白分子量约为38kD。用Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析纯化的融合蛋白免疫兔子并获得抗血清。Western blot检测结果表明,抗血清与诱导表达的ChiVMV-WC编码CP蛋白发生特异性反应。间接酶联免疫吸附法(ID-ELISA)检测抗血清效价为1/106。通过对田间20个样品的ID-ELISA检测,证实了所制备的抗血清与ChiVMV病叶具有良好的反应特异性。
- 吴育鹏王健华冯团诚张雨良王小明刘志昕
- 关键词：辣椒外壳蛋白原核表达抗血清
- 黄瓜花叶病毒NASBA检测技术的建立被引量：5
- 2011年
- 以香蕉花叶病病样为材料,初步建立了黄瓜花叶病毒核酸序列依赖性扩增(Nucleic acid sequence based amplifica-tion,NASBA)的检测技术。通过以香蕉叶片总RNA为模板,在黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)亚组ⅠRNA 2高保守区设计特异引物,进行NASBA反应,经5%琼脂糖凝胶电泳检测,阳性样品中出现了预期大小为310 bp的条带,而阴性和空白对照中均未出现。并对11份香蕉样品分别进行NASBA反应,并经过斑点杂交验证与RT-PCR检测比较,两者的检测结果一致,灵敏度相当,检出限量可达100 pg。
- 王小明王健华冯团诚张雨良吴育鹏刘志昕
- 关键词：香蕉黄瓜花叶病毒斑点杂交
- 辣椒脉斑驳病毒文昌分离物全基因组序列分析和抗血清的制备
- 辣椒是一种重要的茄科类蔬菜作物,因其果实营养丰富,特别是维生素C的含量在蔬菜中居第一位而深受人们喜爱。然而,近年来,辣椒病毒病已成为辣椒生产发展的主要限制因素之一。辣椒脉斑驳病毒/(Chilli veinal mottl...
- 吴育鹏
- 关键词：原核表达抗血清制备
- 文献传递
- 辣椒脉斑驳病毒文昌分离物基因组测序及分析被引量：5
- 2011年
- 辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus,ChiVMV)近年来严重危害海南黄灯笼辣椒的产量,开展针对该病毒的研究以求达到对其有效防控迫在眉睫。本研究分7段克隆了ChiVMV文昌分离物(ChiVMV Wenchang isolate,ChiVMV-WC)的基因组。分段克隆的测序结果通过拼接,共获得ChiVMV-WC基因组9717个核苷酸(nt)序列(GenBank登录号:GQ981316)。在核苷酸序列的第164位～第9270位存在一个大的开放阅读框(ORF),编码一个多聚蛋白(分子量为350.44kD)。近年来被证实的马铃薯Y病毒科的一个新的ORF(pretty interesting potyviridae ORF,PIPO)存在于ChiVMV-WC基因组核苷酸序列的第2892位～第3110位,编码一个由72个氨基酸聚合而成的多肽(分子量为8.26kD)。ChiVMV-WC与ChiVMV其它分离物的基因组核苷酸序列比较发现该病毒存在着较高的变异率。本研究通过与同属内病毒的同源性分析以及系统进化树分析,确定了ChiVMV-WC在生物进化史上的地位。
- 龚殿王健华吴育鹏张雨良王洪星孙玉娟刘志昕
- 关键词：马铃薯Y病毒属基因组系统进化树
- 黄瓜花叶病毒2b基因在大肠杆菌中的表达及其自激活特性检测
- 2010年
- 2b蛋白是黄瓜花叶病毒与植物寄主相互作用的一种重要多功能蛋白。用PCR方法扩增目的基因2b,经酶切、连接将其克隆至带有λcI基因的pBT载体上,构建与λcI基因融合的表达载体pBT-CMV 2b,转化大肠杆菌XL1-Blue MRF′报告菌株,用IPTG诱导表达黄瓜花叶病毒2b基因。Western blot分析结果表明,2b-λcI融合蛋白已成功表达,大小约为38 ku,与预期大小一致。pBT-CMV 2b与空质粒pTRG共转化XL1-Blue MRF′报告菌株,同时以pBT空质粒和pTRG-Gal11p共转化作为对照。结果显示,CMV 2b蛋白未产生自激活作用,从而为利用大肠杆菌双杂交系统筛选与2b蛋白相互作用的蛋白质研究奠定基础。
- 王小明王健华冯团诚张雨良吴育鹏刘志昕
- 关键词：黄瓜花叶病毒自激活
- 坡柳(Dodonaea viscosa L.)丛枝植原体新病原的分子鉴定被引量：1
- 2018年
- 从四川攀枝花芒果园中表现为丛枝、小叶和黄花等症状的坡柳植株发病样品中,利用植原体16S rDNA基因的通用引物R16m F2/R16m R1和R16F2n/R16R2,对发病植株总DNA进行巢式PCR检测,同时设计植原体抗原膜蛋白基因（AntMP）的保守引物AntMP-F/AntMP-R进行PCR验证。结果显示,坡柳样品巢式PCR的第一轮、第二轮DNA条带大小分别为1 400 bp和1 200 bp左右,经NCBI序列相似性比较均为植原体16S rDNA序列,Gen Bank登录号为KT957205和KT957206;PCR结果显示抗原膜蛋白基因大小约600 bp,与目标基因大小一致。将测得的16S rDNA基因序列与Gen Bank数据库中登录的16SrⅠ～ⅩⅤ组植原体16S rDNA序列进行同源性比对,构建系统进化树,结果显示四川坡柳丛枝植原体（DOVI-SC）属于16SrⅠ组（即翠菊黄花组）,与已报道的5个16SrⅠ组（AY101386,AY566302,AY389822,L33760和KP662119）同属一个组。利用植原体亚组分类鉴定软件iPhy Classfier对获得的2条植原体16S rDNA序列进行虚拟RFLP分析,结果显示KT957205,KT957206与16SrⅠ-B亚组洋葱黄化植原体（NC-005303）相似度分为1.0、0.97,归属于16SrⅠ-B亚组。本研究对引起四川坡柳丛枝的植原体病原进行检测,为坡柳植原体病害的早期诊断、快速检测以及预防措施制定提供科学线索。
- 笈小龙吴育鹏谢慧敏余乃通余乃通王健华张秀春
- 关键词：植原体分子鉴定系统进化树
