唐富琴
- 作品数：16 被引量：59H指数：4
- 供职机构：第三军医大学新桥医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生天文地球更多>>
- NEDD4调控AMPK活性参与心肌细胞慢性缺氧适应的研究被引量：3
- 2015年
- 目的探讨NEDD4在心肌细胞慢性缺氧适应过程中的作用及其可能的机制。方法1收集手术矫正的先心病患儿32例,其中紫绀型先心病18例,非紫绀型先心病14例。取术中切除的右室流出道心肌组织作为标本,用免疫组化染色检测NEDD4在心肌细胞中表达的分布,Western blot检测NEDD4在心肌组织中的表达情况;2将H9c2心肌细胞分为常氧组、慢性缺氧组和阳性对照组,其中慢性缺氧组又分为对照组、空白转染组和干扰转染组,设计合成以心肌细胞NEDD4基因为靶标的siRNA,通过阳离子脂质体将合成的siRNA转染至H9c2心肌细胞中,常氧培养(74%N2,5%CO2,21%O2)48 h后开始对慢性缺氧组心肌细胞进行缺氧刺激(94%N2,5%CO2,1%O2),缺氧刺激72 h后Western blot检测NEDD4、p-AMPK表达水平变化,流式细胞术检测缺氧刺激所致心肌细胞损伤情况。结果 1紫绀组患儿术前血氧饱和度明显低于非紫绀组(P<0.05);免疫组化染色结果显示NEDD4主要分布于心肌细胞质中;与非紫绀组相比,紫绀组患儿心肌组织中NEDD4表达水平显著下降[NEDD4/β-actin条带灰度比值:非紫绀组(0.72±0.07);紫绀组(0.42±0.06),P<0.05];2与常氧组相比,对照组心肌细胞死亡比例显著增加(P<0.05);但干扰NEDD4表达后,缺氧所致心肌细胞损伤比例降低(P<0.05)。Western blot检测结果显示,与空白转染组相比,干扰转染组AMPK磷酸化水平显著增加[p-AMPK/AMPK条带灰度比值:空白转染组(0.21±0.01),干扰转染组(0.88±0.04),P<0.05]。结论 NEDD4可能通过调控AMPK活性参与慢性缺氧情况下心肌细胞代谢的适应调节。
- 鞠胜杰李畑波蹇朝马瑞彦李经纬贾维坤唐富琴肖颖彬
- 关键词：AMPK
- 芒果苷联合卸负荷改善压力超负荷大鼠心室肥厚被引量：3
- 2015年
- 目的通过卸负荷及药物干预相结合建立大鼠胸骨上小切口缩窄及松解模型,探讨芒果苷对大鼠压力超负荷后卸负荷的心室肥厚转归的影响。方法选用5周龄、体质量150~180 g雄性SD大鼠48只,行非人工通气下胸骨上小切口升主动脉缩窄术致大鼠左心室肥厚,利用单一去缩窄以及去缩窄联合应用芒果苷干预方法,将所有存活动物随机分为假手术组、超负荷组（升主动脉缩窄6周）、卸负荷组（升主动脉缩窄术后6周后松解4周）以及芒果苷组[缩窄术后6周后松解,松解术后以芒果苷干预4周,20 mg/（kg·d）.i.g],通过心肌大体标本、动物超声心动图,病理学染色比较大鼠在此过程中的心脏形态、质量,左室壁厚度及心肌病理学改变。结果与假手术组相比,超负荷组心肌左室后壁收缩期厚度（4.25±0.43）mm、舒张期厚度（2.89±0.42）mm及室间隔收缩期厚度（3.92±0.71）mm、舒张期厚度（2.59±0.49）mm显著增厚（P〈0.01）,心脏体积增大、心脏质量体质量比（4.44±0.77）mg/g明显升高（P〈0.01）、心肌细胞排列紊乱,胞质增多,间质纤维化明显。卸负荷后左室后壁收缩期厚度（3.85±0.56）mm、舒张期厚度（2.47±0.52）mm及室间隔收缩期厚度（3.81±0.53）mm、舒张期厚度（2.51±0.54）mm有一定程度的改善,但不明显。心脏体积减小、心脏质量体质量比（3.03±0.18）mg/g降低（P〈0.01）、心肌细胞体积缩小但排列紊乱,间质纤维化程度无明显减轻。芒果苷联合卸负荷干预后较单一卸负荷组左室后壁收缩期厚度（2.80±0.37）mm、舒张期厚度（1.94±0.27）mm,室间隔收缩期厚度（2.90±0.51）mm、舒张期厚度（1.89±0.38）mm及心脏质量体质量比（2.32±0.33）mg/g改善明显（P〈0.01）,心脏体积进一步减小,心肌细胞体积缩小且排列规则,间质纤维化程度有一定改善。结论芒果苷联合卸负荷可显著改善超负荷大鼠心室肥厚�
- 邹书帆焦蔡领蹇朝肖颖彬唐富琴陈林
- 关键词：芒果苷左心室肥厚
- 氧化应激标志物在房颤患者心房结构重构中的变化及意义被引量：19
- 2015年
- 目的通过分析多种氧化应激标志物在血清及组织中的动态变化,观察其在心房结构重构中的表达,探讨房颤(atrial fibrillation,AF)的发生机制。方法选择我中心44例2014年2-5月行单纯二尖瓣置换手术的风湿性心脏病患者,根据病史及术前动态心电图记录分为2组:持续性房颤(AF)组26例,窦性心律(SR)组18例。术中取部分右心耳组织,行Masson染色观察纤维化情况,采用免疫组化、免疫荧光染色法观察右心耳组织NOX2蛋白表达,用ELISA法测定右心耳组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、晚期氧化蛋白产物(advanced oxidative protein products,AOPP)浓度以及血清中ROS、AOPP含量。结果 AF组心房组织中MDA[(15.41±1.69)μmol/mg]、SOD[(13.32±1.25)μmol/mg]、ROS[(18.53±3.47)μmol/mg]、AOPP[(29.69±2.09)μmol/mg]含量与SR组MDA[(11.46±1.83)μmol/mg]、SOD[(10.65±1.15)μmol/mg]、ROS[(13.65±3.29)μmol/mg]、AOPP[(21.94±1.94)μmol/mg]比较差异有统计学意义(P<0.05),AF组血清中ROS含量[(34.6±2.61)μmol/L]明显高于SR组[(17.8±1.03)μmol/L],2组患者血清中AOPP含量差异无统计学意义(P>0.05)。与SR组相比,AF组右心耳组织胶原纤维增生明显,NOX2蛋白表达呈强阳性。结论房颤时发生以间质纤维化改变的心房结构重构,氧化应激参与了房颤发生和结构重构过程。
- 易茜蹇朝李勇肖颖彬陈林唐富琴马瑞彦
- 关键词：房颤心房重构NADPH氧化酶晚期氧化蛋白产物
- 腺苷酸激活蛋白激酶激活参与促进慢性缺氧时心肌细胞存活被引量：4
- 2015年
- 目的检测腺苷酸激活蛋白激酶（adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK）在慢性缺氧心肌组织中的激活水平,探讨AMPK激活对慢性缺氧心肌细胞存活的影响及其意义。方法选择本科2013年行手术矫治的先心病患儿24例,其中紫绀型先心病患儿12例,非紫绀型先心病患儿12例,取手术中切除的右室流出道心肌组织作为标本;选用4-6周龄清洁级雄性SD大鼠24只,分为常氧组和缺氧组（n=12）。将缺氧组置入低压舱（模拟海拔5 000 m,气压405 mm Hg）,常氧组正常饲养。同时喂养28 d后,处死大鼠后迅速取出心脏并分离出右心室部分作为标本。采用Western blot分别检测p-AMPK在人体、大鼠缺氧心肌组织中的激活水平。选用H9c2心肌细胞株,并将其分为常氧组、低氧组、阻断组、激活组。将后3组细胞置入缺氧培养箱3 d（94%N2,5%CO2,1%O2）,建立H9c2心肌细胞株慢性缺氧模型;常氧组置入细胞培养箱3 d,对照培养。分别向阻断组和激活组中加入AMPK特异性阻断剂Compound C和激活剂AICAR,采用Western blot检测p-AMPK的表达,流式细胞仪、TUNEL法检测心肌细胞凋亡,Hoechst33528染色观察细胞核形态、LDH测定心肌细胞死亡率。结果 Western blot结果显示与常氧组相比,缺氧心肌组织中p-AMPK/AMPK比值明显增高。与低氧组比较,AMPK阻断组凋亡细胞比例升高,TUNEL-阳性细胞比例、不正常核比例、细胞死亡率均明显升高（P〈0.05,P〈0.01）;AMPK激活组与低氧组比较,凋亡细胞比例、TUNEL-阳性细胞比例、不正常核比例、细胞死亡率均有降低（P〈0.05）。结论在慢性缺氧条件下,AMPK蛋白磷酸化水平增强,p-AMPK对心肌细胞慢性缺氧适应具有一定保护作用。
- 李畑波鞠胜杰蹇朝李经纬唐富琴肖颖彬
- 关键词：慢性缺氧心肌细胞
- Sirt1在缺氧条件下对心肌细胞线粒体融合与分裂中的作用被引量：5
- 2016年
- 目的探讨缺氧条件下线粒体动态学变化及Sirt1在其中的作用。方法 1收集2014年于新桥医院心血管外科行手术治疗的先心病患儿29例,其中非紫绀型先心病14例,紫绀型先心病15例,取术中所切除的右室流出道心肌组织为心肌标本,Western blot检测促线粒体分裂蛋白Drp1与Fis1表达情况。2将H9c2心肌细胞置入缺氧培养箱(94%N2,5%CO2,1%O2)中进行培养,检测缺氧0、2、4、8、12 h后促线粒体分裂蛋白Drp1与Fis1的表达水平。3将线粒体靶向质粒分别同空载质粒、Sirt1过表达质粒和Sirt1干扰质粒共转染H9c2细胞,常氧或缺氧培养箱中培养12 h后,激光共聚焦显微镜下观察线粒体融合、分裂情况;4运用腺病毒Ad-Sirt1和慢病毒Lv-Sh-Sirt1分别在H9c2细胞中过表达或干扰Sirt1后,将细胞置于缺氧培养箱中培养12 h,检测Drp1与Fis1表达水平;5分别转染空载质粒、Sirt1过表达质粒和Sirt1干扰质粒至H9c2细胞后,缺氧培养12 h,LDH试剂盒检测细胞毒性。结果 1同非紫绀组相比,紫绀组心肌中Drp1与Fis1表达显著增高,Drp1相对灰度值:[(0.47±0.11)vs(0.76±0.12)、Fis1相对灰度值(0.53±0.02)vs(0.83±0.03),P<0.05];2细胞水平研究结果显示Drp1与Fis1的蛋白表达随缺氧的时间的延长呈递增趋势;3激光共聚焦结果表明,Sirt1过表达后能够一定程度地缓解缺氧诱导的线粒体分裂(P<0.05),而当Sirt1受到干扰后,缺氧所诱导的线粒体分裂水平明显提高(P<0.05);4在缺氧条件下,过表达Sirt1能够抑制Drp1与Fis1蛋白表达水平(P<0.05),而Sirt1被抑制后,Drp1与Fis1蛋白表达水平增加(对照组,过表达组,低表达组Drp1相对灰度值依次为[(0.47±0.02)vs(0.36±0.02)vs(0.78±0.04);Fis1相对灰度值依次为(0.64±0.02)vs(0.42±0.02)vs(0.80±0.04),P<0.05];5Sirt1过表达能够降低缺氧刺激后H9c2心肌细胞的死亡率。结论 Sirt1可能通过调控促线粒体分裂蛋白Drp1与Fis1表达水平促进心肌细胞在缺氧条件下的适应。
- 罗桂平蹇朝张华刚赵鹏南刘波朱昀姜云瀚唐富琴肖颖彬
- 关键词：SIRT1心肌细胞线粒体缺氧
- 体外膜肺氧合联合超滤复苏严重失血性休克兔减轻肾损伤被引量：2
- 2014年
- 目的 探讨体外膜肺氧合（extracorporeal membrane oxygenation,ECMO）联合超滤技术在严重失血性休克兔肾脏损伤中的意义. 方法 新西兰大白兔24只,建立压力控制型失血性休克模型,按随机数字表法分为休克未复苏组（未复苏组）、ECMO联合超滤技术复苏组（联合复苏组）、延迟液体复苏组（液体复苏组）,每组8只.心电监护检测心率,股动脉置管检测动脉血压.分别于休克前、休克后及复苏后采集血液标本,检测乳酸、血肌酐、IL-6及TNF-α水平.采集各组肾脏标本行HE染色,观察各组肾脏组织病理学改变;免疫组织化学染色,比较各组热休克蛋白70（heat shock protein 70,HSP70）在肾脏组织中的表达程度. 结果 联合复苏组的平均动脉压（53.1±1l.4）mmHg,较液体复苏组（41.3 ±11.1） mmHg和未复苏组（25.9±10.5） mmHg明显升高（F =41.425,P＜0.05）.乳酸、血肌酐、IL-6和TNF-α的水平,各组休克后较休克前均明显升高（P＜0.05）,液体复苏组较未复苏组均明显降低（P＜0.05）,联合复苏组较液体复苏组均明显降低（P＜0.05）.HE染色显示,联合复苏组肾脏组织坏死程度及炎症因子浸润程度均较液体复苏组明显减轻.HSP70的表达未复苏组中位数（四分位数）为17 828.960 0 （15 779.865 0～21 751.980 0）,液体复苏组为2 714.270 0（1 339.215 0 ～7 616.950 0）,联合复苏组为262.930 0（198.820 0～538.195 0）,三组间差异有统计学意义（P＜0.05）. 结论 与传统液体复苏比较,ECMO联合超滤技术在复苏严重失血性休克、改善组织缺氧性损害、减轻炎性反应等方面具有优势,并且能显著减轻肾脏组织的损伤.
- 田耕赵亮罗林肖娟刘梅唐富琴肖颖彬
- 关键词：体外膜氧合作用超滤
- 紫绀型先心病患儿心肌组织SOCS3基因启动子甲基化分析及机制研究被引量：2
- 2014年
- 目的探讨紫绀型先心病患儿右心室心肌组织中细胞信号抑制因子3(suppressor of cell signaling 3,SOCS3)基因启动子甲基化水平及其可能机制。方法选取先心病患儿34例,其中紫绀组18例,非紫绀组16例。取手术中切除的右心室流出道心肌组织作为标本,采用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)及重亚硫酸盐测序(bisulfite sequencing PCR,BSP)检测心肌细胞中SOCS3启动子CpG岛甲基化程度。Western blot检测DNA甲基化转移酶3A(DNA methyltransferase,DNMT3A)、DNA甲基化转移酶3B(DNMT3B)蛋白在心肌细胞中的表达情况。结果与非紫绀组相比,紫绀组SOCS3启动子CpG岛甲基化程度较高,DNMT3A蛋白较高[(0.407±0.469)vs(0.160±0.034),P<0.05],DNMT3B蛋白无明显差异[(0.054±0.012)vs(0.052±0.093),P>0.05]。结论紫绀型先心病患儿心肌组织中,SOCS3启动子CpG岛呈高甲基化。高表达的DNMT3A蛋白很可能参与了SOCS3启动子CpG岛高甲基化。高甲基化的SOCS3启动子CpG岛,可能不是调控慢性缺氧适应心肌中SOCS3转录的主要因素。高表达的SOCS3启动子CpG岛以及高表达的DNA甲基化转移酶3A蛋白可能是心肌慢性缺氧适应的一种体现。
- 冯泽洲王学锋朱昀何思毅方骏唐富琴顾强肖颖彬
- 关键词：紫绀型先心病SOCS3甲基化
- 压力诱导的心力衰竭演变过程中的心脏结构、血流动力学和肺部大体观的动态改变被引量：1
- 2018年
- 目的通过小鼠主动脉弓缩窄诱导心力衰竭,观察心衰进展过程的心脏结构和血流动力学动态变化,为进一步相关机制研究提供模型平台。方法 6~8周雄性C57小鼠50只,随机分为正常对照组(10只)和主动脉弓缩窄术组(40只)。经胸部正中切口暴露主动脉弓,并于右侧头臂干动脉和左侧颈总动脉之间缩窄主动脉弓建立心肌肥厚致心力衰竭模型。于术后当日经胸部多普勒评价缩窄效果;将缩窄效果好且存活的小鼠38只分为术后第一周(n=9)、第二周(n=9)、第四周(n=10)、第八周(n=10)分别复查心脏彩超测量左心室后壁舒张末厚度(LVPWd)、左心室后壁收缩末厚度(LVPWs)、射血分数(EF)和缩短分数(FS),进行血流动力学检查、测量左室收缩末压(LVESP)、左室舒张末压(LVEDP)和左室内压力上升最大速率(dp/dt max),并取材行病理学检测心脏、肺脏重量和心肌纤维病理变化程度。结果主动脉弓缩窄手术成功率为95%;与正常对照组比较,缩窄1周后,LVEDP和LVESP明显升高(P<0.05),纤维化程度明显增加(P<0.05)。缩窄2周后,缩窄组小鼠EF、FS显著降低(P<0.05),LVPWd明显增加(P<0.05),dp/dt max明显增加(P<0.05),心脏体重比和肺脏体重比明显增加(P<0.05),肺水肿明显加重。而在缩窄8周时LVPWd、LVPWs、LVEDP和dp/dt max均较前明显降低(P<0.05)。缩窄8周时,在光镜下心肌细胞肥大、排列紊乱,小血管壁增厚,间质纤维增生明显。结论通过多时间点观察小鼠主动脉弓缩窄模型的心脏结构和血流动力学动态改变,有效模拟了心力衰竭发生和进展的动态变化过程,为进一步相关机制研究提供了模型平台。
- 唐富琴姜云瀚朱雨孟永胜蹇朝肖颖彬
- 关键词：心肌肥厚主动脉弓缩窄血流动力学
- KLF15基因对心肌纤维化的抑制作用被引量：3
- 2014年
- 目的探讨心肌成纤维细胞Krüppel样因子15(krüppel-like factor 15,KLF15)在心肌间质纤维化及转归中的作用和分子机制。方法体外培养大鼠心肌成纤维细胞,建立促心肌成纤维细胞肥大模型,构建干涉和过表达KLF15腺病毒载体并转染,分别进行腺病毒组、空病毒组、对照组、阴性干涉组及干涉组细胞玻片染色观察,Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维含量及KLF15、TGF-β(transforming growth factor-β)、CTGF(connective tissue growth factor)、MRTF-A(myocardin-related transcription factor A)细胞因子蛋白表达水平检测。结果在该细胞模型实验中,腺病毒组KLF15表达水平明显高于其余各组(P<0.05),相应的TGF-β、CTGF、MRTF-A表达水平及Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维含量却最低(P<0.05),心肌细胞肥大、纤维化表现显著减轻,而干涉组上述各检测值变化恰与之相反(P<0.05),有更重的心肌细胞肥大、纤维化表现。结论 KLF15可通过反馈调节TGF-β,抑制CTGF及MRTF-A的作用,减轻心肌间质纤维化及心肌成纤维细胞表型转变,从而改善心功能。
- 余杨邹书帆马杰蹇朝唐富琴陈林
- 关键词：心肌纤维化心肌成纤维细胞细胞培养腺病毒载体转染
- MiR-17-5p调控STAT3信号通路在心肌慢性缺氧适应中意义的研究被引量：4
- 2016年
- 目的探讨心肌慢性缺氧环境下,miR-17-5p的表达变化以及miR-17-5p对STAT3信号通路的调控对于缺氧心肌细胞的影响。方法 1选取新桥医院心外科2014年8月至2015年4月期间先心病患儿20例,其中紫绀型(年龄61.5±46.5月,术后诊断为法洛氏四联症)与非紫绀型(年龄43.2±32.1月,术后诊断为室缺伴右心室流出道狭窄)各10例。术中取右室流出道心肌组织作为标本,采用RT-PCR检测两组先心病患儿心肌组织miR-17-5p的表达情况。2建立大鼠源H9c2心肌细胞慢性缺氧适应模型,分为缺氧0、12、24、48、72 h组(n=5),RT-PCR分别检测各组miR-17-5p的表达。3脂质体转染antagomir miR-17-5p和agomir miR-17-5p至H9c2心肌细胞,建立过表达miR-17-5p和沉默miR-17-5p的H9c2心肌细胞系,慢性缺氧培养48 h,CCK8实验检测细胞增殖情况,TUNNEL实验检测细胞凋亡情况,Western blot检测STAT3,p-Tyr-705-STAT3及其下游调控蛋白c-myc蛋白表达。结果 1与非紫绀组(0.482±0.163)相比,紫绀组(1.450±0.705)患儿miR-17-5p表达明显升高(P<0.01)。2慢性缺氧细胞模型研究结果显示慢性缺氧时H9c2细胞miR-17-5p表达逐渐增高(P<0.01)。3缺氧环境下miR-17-5p过表达明显抑制p-Tyr-705-STAT3、STAT3、c-myc表达,引起心肌心肌细胞增殖受抑制,凋亡增加(P<0.01);而抑制miR-17-5p对p-Tyr-705-STAT3、STAT3、c-myc表达改变不明显,且对于心肌细胞的增殖和凋亡改变也不明显(P>0.05)。结论在心肌慢性缺氧过程中,miR-17-5p可能参与调控STAT3-c-myc信号通路,对于心肌细胞的存活和功能调节有重要意义。
- 赵鹏南罗桂平姜云瀚李经纬唐富琴顾强肖颖彬
- 关键词：STAT3缺氧心肌细胞
