孙新民
- 作品数：4 被引量：43H指数：3
- 供职机构：第三军医大学基础部更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 睾丸内注射pEGFP-N_1体内转染精子并在山羊早期胚胎成功表达被引量：23
- 2005年
- 目的探讨睾丸内注射法pEGFP-N1在精细胞的整合和在早期胚胎中表达。方法选择4头本地山羊,双侧睾丸注射不同剂量质粒DNApEGFP-N1,注射后PCR和Southern杂交检测pEGFP-N1在精子中的整合。结果pEGFP-N1整合到精子基因组中,转染效率最高发生在注射后第40天,转染阳性率最高为81%;绿色荧光蛋白在精子及其体外受精的部分胚胎中表达,胚胎阳性率最高的达66.7%。结论通过睾丸内注射pEGFP-N1能整合进入精子基因组,并能通过体外受精在山羊早期胚胎中表达;睾丸内注射法可能是一种可行、简单并利于推广的制备转基因山羊的方法。
- 李福兵魏泓孙新民赵永聚
- 关键词：早期胚胎精子转基因山羊本地山羊杂交检测
- 表皮生长因子、巯基乙醇和亚硫磺酸对山羊体外胚胎生产的影响研究被引量：10
- 2005年
- 采用抽吸法收集卵巢上的卵丘 -卵母细胞复合体 (COCs) ,微滴培养法于不同成熟培养液 (n =8)中培养 2 4～ 2 7小时后体外受精 ,然后移入不同胚胎培养液 (n =7)中培养 7天。应用胞核染色、胚胎移植等技术判定并统计成熟率、卵裂率和胚胎发育潜能。结果 :含 5 0ng/mlEGF(表皮生长因子 )组COCs成熟率 (75 4 5 %～ 75 8%)和卵裂率 (72 4 %～ 74.1%)均显著高于其它组 ,含 0 5mmol/LHTAU(亚硫磺酸 )组和或 10 0 μmol/LCYS(β -巯基乙醇 )成熟液组的≥ 8细胞率 (3 2 3 %～ 3 9 0 %)和桑胚率 (2 8 4 %～ 3 3 .8%)均显著高于其它组 (P <0 0 5 )。两只试管羊健康出生。结论 :EGF对COCs体外成熟和卵裂发育具有明显的促进作用 ;CYS对COCs体外成熟和受精卵裂无明显正作用 ,但成熟液含适量CYS有助于改善胚胎的体外发育 ,过量可能对细胞有毒 ;HTAU有益于早期胚胎的体外发育。成熟液中EGF和CYS的优选浓度分别为 5 0ng/ml和 10 0 μmol/L ;胚胎培养液中HTAU的优选浓度为 0 5mmol/L。优化体系所得胚胎具有正常的发育潜能。
- 王艾平魏泓孙新民王勇
- 关键词：卵母细胞胚胎发育表皮生长因子巯基乙醇山羊
- 通过双原核显微注射提高转基因小鼠研制效率的实验研究被引量：10
- 2005年
- 目的建立高效的转基因小鼠制备技术,为开展遗传工程动物模型研究奠定技术基础。方法通过向小鼠受精卵原核中注入不同浓度的DNA分子,筛选最适注射用DNA浓度;将K14/hCTLA4-Ig基因表达载体分子通过显微注射分别导入小鼠受精卵雌、雄原核,并设立单原核注射对照组;利用输卵管腹壶部穿刺移植法将注射后的小鼠受精卵移植于同期发情的受体母鼠;利用PCR对出生的转基因首建小鼠进行筛选。结果最适DNA分子浓度为10ng/μl;在单、双原核注射组胚胎2细胞卵裂率分别为52.3%(132/253)和45.0%(108/240),差异有显著性(P<0.05);注射胚胎移植后体内存活率分别为18.1%(24/132)和16.7%(18/108),差异无显著性;转基因首建小鼠阳性率分别为3/24和5/18,转基因阳性小鼠占总注射胚胎的比例为1.2%(3/253)和2.08%(5/240),差异有极显著性(P<0.01)。结论尽管双原核注射对胚胎的2细胞卵裂率有一定影响,但通过双原核注射可有效提高转基因小鼠的制备效率。
- 王勇刘勤倪勇魏泓孙新民赵永聚
- 关键词：转基因技术小鼠动物模型胚胎发育
- 不同山羊个体的精子结合和内化外源DNA能力的差异性研究被引量：1
- 2005年
- 目的探讨不同山羊个体的精子结合和内化外源DNA能力差异性,以及精子内化能力对制备转基因山羊胚胎阳性率的影响.方法用地高辛标记与检测试剂盒检测12只山羊的精子分别结合、内化质粒DNApEGFP-N1的效率;体外受精实验检测胚胎阳性率与精子内化pEGFP-N1能力的关系.结果不同山羊个体的精子结合和内化pEGFP-N1的效率存在差异,内化效率最高为53.7%,最低为3.1%;3号公羊的精子体外转染外源基因后行体外受精,所得的2～8细胞胚胎表达外源基因pEGFP-N1的阳性率最高,7、8、10、11号公羊的精子体外转染外源基因后行体外受精,所得的2～8细胞胚胎均未表达GFP蛋白.结论不同山羊个体的精子自发结合、内化外源DNA的能力存在差异;不同山羊个体的精子体外转染外源基因后行体外受精,所得的2～8细胞胚胎表达外源基因的比例不同.
- 李福兵赵永聚周建华孙新民魏泓
- 关键词：精子内化外源DNA
