宁波
- 作品数：48 被引量：187H指数：8
- 供职机构：中山大学中山医学院免疫学教研室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省卫生厅资助课题江苏省教育厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 沙眼衣原体L2型MOMP基因真核表达载体的构建及序列分析被引量：3
- 2001年
- 目的 构建携带沙眼衣原体L2型主要外膜蛋白 (MOMP)基因的真核表达载体 ,为沙眼衣原体的DNA疫苗的研究提供材料。方法 用PCR技术扩增L2型沙眼衣原体MOMP基因片段 ,再将其定向插入到真核表达载体 pcDNA3多克隆位点中 ,构建成重组表达质粒。并用酶切分析、PCR扩增及部分序列测定等方法对重组质粒进行了鉴定。结果 MOMP基因被正确地克隆到真核表达载体 pcDNA3中。测序结果同文献报道的序列一致。 结论 真核细胞表达载体 pcDNA3 -MOMP的成功构建 ,为进一步开展沙眼衣原体的DNA疫苗的研究奠定了基础。
- 彭辉宁波冯炼强张春艳徐霖
- 关键词：沙眼衣原体主要外膜蛋白克隆DNA疫苗真核表达载体
- 抗前列腺特异膜抗原单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2000年
- 目的 制备具有良好器官特异性的抗前列腺特异膜抗原（ＰＳＭ）单克隆抗体。 方法 以前列腺癌细胞株ＬＮＣａｐ 为免疫原，采用环磷酰胺免疫抑制法免疫小鼠，经细胞融合、选择性培养、筛选、克隆化等过程建立了抗ＰＳＭ 的杂交瘤细胞株，并采用活细胞间接免疫荧光染色、ＥｎＶｉｓｉｏｎＴＭ两步法免疫组化染色、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 对其特异性进行鉴定；双向琼脂扩散法鉴定单抗的亚类。结果 该单抗仅与ＬＮＣａｐ 及前列腺细胞膜结合，与ＰＣ３ 前列腺癌细胞株及随机抽取的３０ 例人外周血白细胞标本、２０ 例膀胱癌标本及１０ 例肾癌标本不起反应，显示其良好的器官特异性；Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 显示该单抗所结合的抗原相对分子质量为１０ ０００ ，与ＰＳＭ 相对分子质量吻合；该单抗属ＩｇＧ１ 亚类，轻链为κ链。 结论 制备了亲和性和器官特异性良好的抗ＰＳＭ 单克隆抗体，为进一步进行前列腺癌的导向诊断及治疗研究提供了新的手段。
- 王晓波宁波曾文涛陈凌武李燕梅骅
- 关键词：前列腺肿瘤PSM单克隆抗体
- 抗人CD154单克隆抗体抑制免疫应答的实验研究被引量：5
- 2002年
- 目的 :探讨抗人CD1 54单克隆抗体对免疫应答的抑制作用。方法 :①在体外进行混合淋巴细胞反应 ,研究抗人CD1 54单克隆抗体对淋巴细胞增殖反应的影响 ;②在严重免疫联合缺陷 (SCID)鼠体内重建人的免疫功能后 ,研究抗人CD1 54单克隆抗体在SCID小鼠体内对T细胞增殖的影响和对B细胞功能的影响。结果 :①双向混合淋巴细胞反应结果显示 ,抗体的 5个剂量组的 [3H] -TdR的掺入率均显著低于对照组 (均P <0 .0 1 ) ;②在输注人外周血单个核细胞第 6d、第 1 2d、第 2 1d ,实验组SCID鼠体内人T细胞占SCID鼠淋巴细胞的百分率均明显低于对照组(均P <0 .0 5) ;在输注人外周血单个核细胞后的第 1 2d、第 2 1d、第 31d ,实验组SCID鼠体内人IgG的含量明显低于对照组 (均P <0 .0 5)。结论 :抗人CD1 54单克隆抗体能够在体外抑制淋巴细胞的增殖 。
- 张春艳张志方李树浓宁波陈凤英黄文革
- 关键词：CD40配体单克隆抗体免疫应答
- 慢性丙型肝炎病人血清ENA抗体的定量检测被引量：1
- 2003年
- 目的:定量检测慢性丙型肝炎(chronic hepatitis C virus infection,CHC)病人血清中各种抗可提取核抗原(extracted nuclear antigens,ENA)自身抗体的滴度,并探讨其临床意义。方法:用自制的抗各种ENA(包括:Sm、RNP、ssA、ssB、scl-70、和Jo-1)的单克隆抗体包被ELISA板和小牛胸腺丙酮粉作为ENA抗原以夹心ELISA法定量检测88例CHC病人、65例非慢性丙型肝炎肝病(non-CHC)病人和60例健康人血清中的各种抗ENA自身抗体的滴度。并以健康人血清中各ENA抗体的滴度的均数加上3倍标准差(x+3s)的滴度为转折点,以判定各种ENA抗体的检出阴、阳性。结果:各种ENA抗体在CHC病人中的滴度和阳性率分剐是:Anti-Sm为507±270单位(arbitraryunits,AU)和22.7％、Anti-ul-RNP为548±278 Au和17％、Anti-ssA为612±213 Au和27.3％、Anti-ssB为678 ±186 Au和25％、Anti-Scl-70为194±67 Au和6.8％、Anti-Jo-1为181±60 Au和5.7％。其中,Anti-Sm、ul-RNP、ssA和ssB四种抗体在CHC病人中的血清滴度和阳性率都明显高于non-CHC和健康人(P<0.05)。CHC病人血清中各种ENA抗体的总阳性率为59.1％,明显高于non-CHC患者和健康对照组(P<0.05)。有8例CHC病人同时患有结缔组织病(干燥综合征3例、多发性皮/肌炎2例、混合性结缔组织病2例。
- 顾广梅肖庆忠宁波
- 关键词：慢性丙型肝炎ENA抗体ELISA
- 一种单纯疱疹病毒共有型单克隆抗体的制备及初步鉴定被引量：3
- 2001年
- 目的：建立能稳定分泌单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）共有型单克隆抗体（Ｍａｂ）的细胞株并进行初步鉴定。方法：本研究利用杂交瘤技术建立了 １３株能稳定分泌抗 ＨＳＶ 特异性 Ｍａｂ的杂交瘤细胞株，其中 ５株能稳定分泌抗 ＨＳＶ型共有单克隆抗体（５Ｂ４－２、５Ｂ４－６、６Ｂ３－２－３、Ｄｂ４、Ｅｂ４），并对５Ｂ４－６株进行了初步鉴定。结果：免疫双扩散法确定Ｍａｂ５Ｂ４－６的 Ｉｇ类型为 ＩｇＧ２ｂ。经微量免疫荧光法（Ｍｉｃｒｏ－ＩＦＡ）法测定杂交瘤培养上清及腹水中单抗效价，分别为 １∶１６及１∶２０４８０。杂交瘤细胞核型分析显示其染色体数目为９１．８±６．２。杂交瘤细胞经４次克隆，传代６个月仍能稳定地分泌抗体。用免疫印渍法进一步鉴定Ｍａｂ５Ｂ４－６所结合抗原的分子量约为７７ＫＤ。结论：细胞株５Ｂ４－６能稳定分泌一种新奇的针对具有ＨＳＶ型共有抗原表位的７７ＫＤ 蛋白的特异性单抗。
- 肖庆忠宁波陈柏铭
- 关键词：单纯疱疹病毒单克隆抗体
- 牛bFGF-pcDNA_3在人脐静脉内皮细胞中的表达及鉴定
- 2002年
- 目的 :研究牛bFGF -pcDNA3 在体外培养人脐静脉内皮细胞中的表达与活性 ,及对该细胞生物学特性的影响。方法 :脂质体法将bFGF -pcDNA3 真核表达载体转染体外培养的人脐静脉内皮细胞 ,经G4 18筛选阳性克隆。通过免疫细胞化学法检测bFGF的表达部位及Ⅷ因子相关抗原的表达。应用化学发光Westernblotting法检测bFGF在转染细胞与未转染细胞中的表达。绘制细胞的生长曲线并计算倍增时间 ,采用MTT法对bFGF的生物活性进行估计。结果 :bFGF -pcDNA3 转染人脐静脉内皮细胞后 ,细胞呈梭形者增多。免疫细胞化学证实转染前后细胞均为血管内皮来源细胞 ,转染与未转染细胞均在胞浆内表达bFGF。Westernblotting证实细胞转染前后均表达 17kDbFGF ,但转染后表达量增高 ,细胞生长曲线上移 ,倍增时间缩短。MTT法证实转染细胞产生的bFGF其生物学活性约相当于持续添加外源性bFGF 5 71 4ng/L。结论 :转染bFGFcDNA的人脐静脉内皮细胞能在体外增殖 ,并具有表达与分泌活性bFGF的功能。bFGF -pcDNA3 可引起内源性bFGF表达增高 ,对血管内皮细胞产生相应的生物学活性。
- 曹开源崔蕴霞徐霖郭琳洁张胜宁波
- 关键词：成纤维细胞生长因子脐静脉内皮细胞
- 抗人CD154单克隆抗体的构建及免疫学特性分析
- 2001年
- 为进一步研究人CD15 4单克隆抗体在抑制动脉粥样硬化发生和发展中的作用 ,采用重组人CD15 4分子免疫BALB c小鼠 ,用杂交瘤技术制备抗人CD15 4单克隆抗体 ,并分析其免疫学特性。结果发现 ,(1)有 6c5、1b6、5d3共三株杂交瘤细胞株的培养上清与GST hCD15 4融合蛋白反应 ,与GST不反应。 6c5、1b6和 5d3培养上清效价分别为 1∶12 8、1∶2 5 6和 1∶6 4。 (2 )经Western bolt鉴定 ,在分子质量为 5 6kDa处有一抗原抗体结合的条带 ,而分子质量为2 6kDa处无特异性条带。证明三株杂交瘤细胞株所分泌的单克隆抗体可以结合GST hCD15 4但不与GST反应 ,是特异性结合人CD15 4的单克隆抗体。 (3)流式细胞术发现 ,6c5细胞株分泌的单克隆抗体能与激活的人外周血T细胞结合。说明已构建的单克隆抗体是特异性针对人CD15 4的 ,为下一步用人CD15 4单克隆抗体抑制动脉粥样硬化的研究打下了基础。
- 张春艳张志方宁波李树浓朱兆玲
- 关键词：单克隆抗体T淋巴细胞动脉粥样硬化
- 人CD154基因真核细胞表达载体的构建、鉴定及序列分析被引量：4
- 2001年
- 目的构建人 CD15 4基因真核细胞表达载体。方法采用 RT- PCR方法 ,从激活的人外周血淋巴细胞的总c DNA中扩增得到 82 0 bp的人 CD15 4c DNA片段 ,再用 Bam H 和 Eco R 双酶切后定向克隆到真核细胞表达载体pc DNA3.1中 ,限制性内切酶酶切分析重组质粒和 DNA序列分析。结果人 CD15 4c DNA已经正确克隆到真核细胞表达载体pc DNA3.1中。结论本研究为探讨 CD15 4分子与淋巴细胞活化的关系及其信号传导机制 ,为进一步用于抗移植排斥反应的研究 ,或对由于 CD15
- 张春艳宁波李树浓张志方冯炼强
- 关键词：RT-PCR真核细胞质粒免疫缺陷病
- IL-1β对培养的人牙龈成纤维细胞间sICAM-1表达的影响被引量：6
- 1999年
- 目的：探讨白细胞介素１β（ＩＬ１β） 对人牙龈成纤维细胞（ＨＧＦ） 培养液中可溶性细胞间粘附分子１（ｓＩＣＡＭ１） 表达的影响。方法：运用细胞培养技术，观察不同浓度的ＩＬ１β诱发ｓＩＣＡＭ１ 表达的情况，并采用ＥＬＩＳＡ 法检测培养上清液中ｓＩＣＡＭ１ 的含量。结果：正常ＨＧＦ培养液中有微量ｓＩＣＡＭ１ 的表达，随着ＩＬ１β浓度的增加，ｓＩＣＡＭ１ 的表达量亦显著增加。结论：ＨＧＦ培养液中，ｓＩＣＡＭ１ 的表达与ＩＬ１β浓度呈等级相关，其含量的改变可能在牙周炎症的病理过程中起着重要作用。
- 唐倩梁焕友刁惠波宁波刘国萍钟梓川
- 关键词：牙龈成纤维细胞
- 家兔实验性动脉粥样硬化病变中的自身免疫现象及与病变的可能关系
- 宁波
- 关键词：家兔动脉粥样硬化病变
