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宋慧娟: 作品数：25 被引量：56H指数：5; 供职机构：辽宁医学院更多>>; 发文基金：辽宁省科技厅基金辽宁省教育厅基金辽宁省科技厅博士启动基金更多>>; 相关领域：生物学医药卫生农业科学轻工技术与工程更多>>

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猪MAPK12基因cDNA的克隆及序列分析被引量：1: 2006年; 目的克隆新的猪MAPK12基因全长ORF,分析其生物特性,为进一步研究该酶的功能提供信息资料。方法:以已报道的人及小鼠MAPK12基因cDNA序列为依据,利用电脑克隆策略获得的ESTs设计引物,RT-PCR技术扩增新的猪MAPK12基因ORF序列,将PCR产物直接进行序列测定。分析此蛋白的特性并预测其结构。结果分离的ORF全长1101bp,编码367个氨基酸,与人鼠氨基酸序列92%同源;利用生物信息学软件分析出此蛋白的理化特性并预测了其一级、二级和高级结构。结论研究分离的基因片段可命名为猪ERK6,通过分析,获取了该酶的基本信息特征,并与现有的报道结果进行对比分析,为进一步开展猪MAPK12基因的结构功能、表达调控的相关研究奠定了基础。; 曾瑞霞苏玉虹巴彩凤朱宝芹宋慧娟刘东鑫; 关键词：ORF

猪CFL2b基因cDNA克隆初步分析被引量：4: 2009年; 利用基因表达谱芯片分析法筛选出与大白猪高肌肉产量-肌纤维形成有关的CFL2b基因.参考人和小鼠CFL2b基因序列,采用SMART-RACE技术结合EST序列拼接技术,从猪骨骼肌肌肉中首次克隆了猪CFL2b的全长cDNA序列(GenBank登录号EU561660,EU561661),Northern杂交检测CFL2b基因mRNA.结果表明,猪CFL2b基因含有2个转录本,长转录本3012bp,短转录本1466bp.CFL2b基因在多种真核生物中都有表达,且编码区序列非常保守,开放式读码框501bp编码了166个氨基酸的蛋白质.氨基酸序列分析表明,猪CFL2b基因与人和小鼠氨基酸同源性分别为100%和99.1%.核苷酸序列相似性分别为88.1%和74.9%.; 赵微曾瑞霞巴彩凤宋慧娟苏玉虹; 关键词：CDNA SMART RACE NORTHERN杂交

肝细胞生长因子对肝细胞癌细胞系SMMC-7721黏着斑激酶的影响被引量：2: 2009年; 目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)对黏着斑激酶(FAK)、Src表达及活性的影响以及PI3K在该过程中的作用.方法:LY294002预处理阻断PI3K的活性、HGF处理SMMC-7721后检测FAK和Src的表达、磷酸化及在细胞内的分布.应用免疫印迹技术检测FAK、Src的表达及磷酸化,免疫荧光技术检测FAK在SMMC-7721细胞中的分布.结果:HGF(50μg/L)可以促进FAKY397位点的磷酸化,对FAK的表达没有影响.应用PI3K抑制物LY294002处理后,FAKY397的磷酸化水平显著降低.HGF处理后,FAK主要位于细胞边缘,呈簇状分布,应用PI3K抑制物,FAK在细胞内弥散分布.HGF处理后,Src激酶和SrcY416的磷酸化水平明显增加,而经LY294002处理后,Src激酶与SrcY416的磷酸化水平明显降低.结论:肝细胞癌中,HGF以PI3K依赖性的方式促进FAK和Src的活化.; 苏荣健李贞李宏丹宋慧娟程留芳; 关键词：肝细胞癌肝细胞生长因子黏着斑激酶 PI3K

犬黑皮质素受体4真核表达载体的构建及表达被引量：3: 2008年; [目的]构建带myc和His标签的犬黑皮质素受体4真核表达载体并在MDCK细胞中进行表达。[方法]以犬MC4R基因组DNA为模板PCR扩增目的基因编码区,将扩增产物进行T-A克隆;酶切、测序鉴定成功后将目的基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1-myc-His/A。重组体pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R经酶切和测序鉴定;采用FuGENE HD介导转染技术将重组体导入MDCK细胞;转染后继续培养72 h,提取细胞内总RNA,RT-PCR鉴定目的基因的表达;提取细胞总蛋白,Western Blot检测蛋白表达。[结果]构建带标签的pcDNA3.1-myc-His/A-cMC4R重组真核表达载体,测序结果与GenBank公布的序列相似性为99%。RT-PCR和Western Blot检测到目的基因表达。[结论]成功构建犬真核表达载体pcDNA3.1-myc-His/A-MC4R,重组体能在MDCK细胞中表达。; 王光川巴彩凤苏荣健张轶博赵微宋慧娟武洁; 关键词：真核表达载体 MDCK细胞

猪新基因CFL2真核表达载体的构建及在C2C12细胞中的瞬时表达被引量：1: 2008年; 从猪的股二头肌中提取总RNA,利用RT-PCR技术从猪骨骼肌中获得CFL2基因的编码区序列,T-A克隆至PMD-18T载体,经HindⅢ和XhoⅠ酶切后定向克隆至真核表达载体pCDNA3.1(+)中。获得的重组质粒pCDNA3.1(+)/CFL2用限制性内切酶酶切分析和DNA测序分析鉴定,并经脂质体瞬时转染C2C12细胞,最后利用PCR检测转基因细胞中CFL2基因的存在及其表达情况。结果显示:猪CFL2基因已克隆到真核表达载体pCDNA3.1(+)中,转染的C2C12细胞中检测到细胞内较高量CFL2的表达。pCDNA3.1(+)/CFL2真核表达载体的成功构建,为深入研究CFL2基因在猪肌肉细胞中的功能奠定基础,为猪肉质品质的改良提供了新的思路。; 赵微苏玉虹巴彩凤苏荣健宋慧娟; 关键词：真核表达载体 PCDNA3.1(+)C2C12

西藏藏族人群白细胞介素1β基因-511C／T多态性被引量：1: 2014年; 目的：研究白细胞介素1β（IL-1β）启动子-511位点C／T单核苷酸多态性（SNP）在西藏藏族健康人群中的分布特点。方法：采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）的方法，对144名西藏拉萨市藏族人群IL-1β-511位点SNP进行检测，计算其基因型频率和等位基因频率。结果：西藏拉萨市藏族人群IL-1β-511点基因型以CT杂合子型最为多见（52．72％），TT纯合子型次之（36．11％），CC纯合子型较少（11．11％）；其等位基因分布也是以T等位基因最为多见（62．50％），其次为C等位基因（37．50％）。西藏藏族人群的等位基因频率分布与奥地利人、非洲黑人、非洲白人、日本人差异均有统计学意义。结论：西藏拉萨市藏族人群中IL-1^-511位点基因型以CT和TT型为主，等位基因以T为主，其SNP分布与其他种族之间存在差异。; 李文娜李克研宋慧娟苏荣健温有峰任甫李宁; 关键词：白细胞介素多态性

葡萄糖调节蛋白78反义核酸对HEK293细胞粘附和迁移的影响被引量：2: 2009年; 为了研究葡萄糖调节蛋白78(Grp78)对细胞迁移和粘附的影响,应用Grp78反义寡核苷酸(Grp78AS-ODN)处理人胚肾细胞HEK293,对细胞的迁移和粘附特性进行分析。结果发现应用Grp78反义核酸处理细胞可以抑制HEK293细胞的迁移,促进细胞与底物间的粘附。进一步研究发现,应用Grp78反义核酸处理细胞可以促进粘着斑的形成,并引起小GTPaseRhoA在细胞膜和细胞浆中的重新分布。上述结果表明,特异性下调Grp78的表达可以抑制细胞迁移,促进细胞与底物间的粘附。; 苏荣健李宏丹宋慧娟魏嘉; 关键词：葡萄糖调节蛋白78 HEK293 细胞粘附

特异性下调葡萄糖调节蛋白78对肝细胞癌粘附特性和细胞外基质降解的影响被引量：2: 2009年; 我们以前的研究表明特异性下调葡萄糖调节蛋白78(Grp78)可以抑制肝细胞癌细胞系BEL7402的侵袭和转移。为了进一步研究该抑制作用的分子机制,我们应用小干扰RNA(siRNA)技术特异性下调肝细胞癌细胞系BEL7402中Grp78的表达,并对细胞的粘附、伸展和细胞外基质降解情况进行研究,结果发现特异性下调Grp78可以促进细胞与细胞外基质的粘附,抑制细胞伸展。我们的研究还显示特异性下调Grp78的表达可以抑制基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9的表达及分泌,这些说明特异性下调Grp78可以抑制细胞外基质的降解。对机制的研究发现特异性下调Grp78表达可以抑制c-jun的磷酸化。这些结果表明特异性下调Grp78可以抑制肝细胞癌细胞系BEL7402的侵袭和转移,这种抑制作用可能是通过促进细胞与细胞外基质的粘附,抑制细胞伸展和细胞外基质的降解实现的。; 苏荣健李贞李宏丹宋慧娟程留芳; 关键词：葡萄糖调节蛋白78 肝细胞癌细胞粘附细胞外基质降解

大鼠脂肪干细胞体外诱导分化为胰岛样细胞被引量：1: 2011年; 目的：探索大鼠脂肪干细胞（ADSCs）向胰岛样细胞诱导分化的诱导方案。方法：取SD大鼠腹股沟区脂肪组织，酶消化法分离培养ADSCs，观察细胞形态，流式细胞仪检测表面抗原；应用4种方案［NA、 NG、 AG、 NAG， N：尼克酰胺；A：活化素A； G：胰高血糖素样肽-1 （GLP-1）］进行诱导，观察形态变化，ELISA法检测胰岛素及C肽分泌量，行双硫腙染色，RT-PCR检测胰岛β细胞相关基因。结果：ADSCs长梭形，CD44高表达，CD49d低表达，CD31、 CD106阴性；诱导7d细胞突起变短呈鹅卵石样，14d AG、 NAG组细胞近圆形，折光性增强，21d NAG组出现明显的胰岛样细胞团。ELISA显示21d NAG组胰岛素及C肽释放量明显高于其他组。双硫腙染色21d NAG组细胞团呈砖红色阳性表达。RT-PCR 14d仅AG和NAG组检测到胰十二指肠同源盒-1基因（PDX1）， 21d AG和NAG组均可检测到葡萄糖转运蛋白2（GLUT2）、 insulin 2、 insulin 1、 PDX1，但表达水平有差异，NAG组接近正常鼠胰岛β细胞，明显高于AG组。结论：ADSCs具有干细胞特性，在NAG诱导条件下可分化为有功能的胰岛样细胞。; 房艳刘雷宋慧娟单伟曾瑞霞李德华; 关键词：脂肪干细胞分化胰岛样细胞

人葡萄糖调节蛋白78基因磷酸化位点的真核突变载体的构建及表达: 2014年; 目的构建人葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)基因编码区磷酸化位点的真核突变载体,并在肝癌SMMC-7721细胞中进行表达。方法利用定点诱变技术将GRP78基因的两个磷酸化位点进行突变,即203位苏氨酸(T)用丙氨酸(A)替换,466位酪氨酸(Y)用苯丙氨酸(F)替换,以质粒pEGFP-N1-GRP78为模板,进行PCR扩增后,构建突变质粒pEGFP-N1-GRP78(T203A)、pEGFP-N1-GRP78(Y466F)和pEGFP-N1-GRP78(T203A/Y466F),并进行DNA测序分析。将测序正确的突变质粒转染肝癌SMMC-7721细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,Western blot法检测融合蛋白在细胞中的表达。结果突变质粒pEGFP-N1-GRP78(T203A)、pEGFP-N1-GRP78(Y466F)和pEGFP-N1-GRP78(T203A/Y466F)经双酶切及测序鉴定,证明构建正确;突变质粒组荧光蛋白表达分布于细胞质内,细胞核内无表达产物分布;3个突变质粒转染组在相对分子质量约105 000处均可见目的蛋白条带,大小与预期相符。结论成功构建了人GRP78单突变T203A、Y466F和双突变T203A/Y466F真核表达载体,并可在肝癌SMMC-7721细胞中表达,为进一步研究GRP78基因磷酸化位点T203、Y466在肝肿瘤侵袭和转移中的作用奠定了基础。; 宋慧娟赵颂苏荣健; 关键词：葡萄糖调节蛋白78 磷酸化位点定点诱变真核细胞基因表达

宋慧娟

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