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水稻乙酰乳酸合成酶基因的克隆和功能分析被引量：14: 2007年; 乙酰乳酸合成酶(ALS)是植物和微生物中亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸合成途径的一个关键酶,该基因在植物抗除草剂基因工程中具有重要的应用价值。利用生物信息学分析,自水稻中分离了ALS基因的cDNA和基因组DNA序列。序列分析表明,ALS基因没有内含子,GC碱基含量高并不对称分布。软件预测ALS基因是单拷贝基因位于第4号染色体上,Southern杂交验证了此结果。构建ALS基因的植物表达载体并转化烟草,转基因烟草通过PCR-Southern验证。EXACT-RT-PCR结果表明,水稻ALS基因在转基因烟草的叶片和根部均有转录发生。利用甲嘧磺隆进行除草剂抗性测试,和对照烟草相比转基因烟草除草剂抗性高达50mg.L-1。; 宋贵生冯德江魏晓丽唐家斌朱祯; 关键词：抗除草剂

水稻EPSP合酶第一内含子增强外源基因的表达被引量：14: 2003年; 分离并克隆了水稻5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因的第一内含子(EPI)。序列分析表明,EPI长704bp,GC含量为36.2％。为进一步研究EPI序列在转基因植物中对外源基因表达水平的影响,将EPI序列插入CaMV35S启动子和报导基因β-葡糖醛酸酶(β-glucuronidase,GUS)基因(gus)之间。采用基因枪法转化烟草叶片,gus基因瞬时表达表明,EPI序列的存在可以使GUS的表达水平提高。利用农杆菌法转化烟草,获得了gus基因稳定表达的植株。GUS活性检测表明EPI内含子的存在可以显著提高GUS基因的表达(P<0.01)。Northern blot分析表明,在转录水平上gus基因在含EPI内含子的转基因植株中的表达高于不含EPIgus基因的表达,并且成熟的gus mRNA中EPI被正确剪取掉了,表明是一种非转译的内含子。GUS定量检测表明,EPI存在可以使GUS的平均表达水平提高3倍,最高单株可提高6倍。; 徐军望冯德江宋贵生魏晓丽陈蕾伍晓丽李旭刚朱祯; 关键词：水稻 EPSP合酶第一内含子

Ⅰ杂交稻及其父母本转录组图谱的比较;Ⅱ水稻乙酰乳酸合成酶基因的克隆和功能分析: F1杂交稻杂种优势，尤其是产量优势具有重要的经济价值。然而其分子基础到目前为止仍旧不是很清楚。为了在一定程度上揭示水稻杂交优势的分子机理，本研究利用基因表达系列分析技术(SAGE)构建了超级杂交稻(2186)及其恢复系(...; 宋贵生; 关键词：超级杂交稻转基因烟草合成酶水稻乙酰乳酸合成酶; 文献传递

通过细胞内的靶向定位大幅度提高外源蛋白在转基因植株的积累水平(英文)被引量：9: 2003年; 通过体外操作,对豇豆胰蛋白酶抑制剂(cpti)基因进行修饰,获得了一个融合蛋白基因(sck)。该基因是在cpti基因的基础上,在其5'端添加了信号肽编码序列,在3'端添加了内质网滞留信号编码序列,旨在引导基因转译产物进入细胞内质网,并最终滞留在内质网及其衍生的蛋白体内。用sck基因转化烟草(Nicotiana tabacum L.),对获得的转基因植株进行ELISA检测。结果表明,含有修饰基因的转基因烟草CpTI蛋白含量有明显提高,比转未修饰cpti基因烟草平均高出2倍,最高单株可达4倍以上,同时转基因植株的抗虫性也有了显著的提高。结果表明,采用外源蛋白靶向定位的策略,可大幅度提高外源蛋白在转基因植物细胞内的积累量,在植物基因工程研究中具有广泛的借鉴意义。; 邓朝阳宋贵生徐军望朱祯; 关键词：转基因植物转基因烟草抗虫性

一种简单经济的提取水稻未成熟种子RNA的方法(英文)被引量：3: 2007年; 多糖污染是从田间水稻叶片和未成熟种子等高含糖组织中提取高质量RNA的主要限制因素。我们介绍一种简单经济的RNA提取方法,它适合从水稻叶片和未成熟种子这些富含多糖的组织中提取总RNA。这种方法可以克服产率低和质量低的问题。RNA提取后经过电泳和分光光度计分析结果表明,每克水稻组织总RNA产率在520μg到800μg之间,OD260/230比值大于2.0,OD260/280比值大于1.9。提取的RNA可以用于体外反转录cDNA、mRNA分离和基因表达系列分析(serial analysis of gene expression,SAGE)库的构建。; 宋贵生翟红利魏刚朱祯; 关键词：多糖 RNA提取

病毒诱导的PVX cp转基因沉默及其DNA甲基化被引量：1: 2004年; 利用PCR方法获得了马铃薯X病毒(PVX)外壳蛋白(CP)基因(cp)，并将其构建到植物表达载体中，利用农杆菌介导的叶盘法转化烟草(Nicotiana tabacum L.)。Northern杂交及Run on实验表明有3株转基因烟草发生了转录后基因沉默。发生沉默的cp基因的甲基化分析结果表明，发生转录后基因沉默的cp基因发生了不同程度的甲基化，说明DNA甲基化并没有完全抑制cp基因的转录。利用PVX病毒对外壳蛋白正常表达的转基因烟草进行接毒，Northern杂交检测结果表明，病毒诱导cp发生了基因沉默。进一步的Run on结果表明，转基因烟草中cp基因在沉默前后转录速率并没有发生变化，说明病毒诱导的沉默是一种转录后沉默。对cp基因沉默前后的甲基化分析表明，病毒的侵染导致了cp基因甲基化程度的增加。; 冯德江刘翔宋贵生徐鸿林魏晓丽徐军望朱祯; 关键词：马铃薯X病毒外壳蛋白 DNA甲基化基因沉默

一种简单易行的重组方法——三引物PCR法被引量：6: 2002年; 报道了一种不需要限制性内切酶和连接酶的重组DNA方法——三引物PCR法（TP-PCR）.TP-PCR反应体系中有2种模板和3种引物,从而在同一个反应体系中产生一个重组DNA分子.这种方法的主要优点是快速、高效且不依赖连接片段的限制酶位点.用这种方法已成功构建了融合蛋白基因——sck基因.; 邓朝阳宋贵生徐军望朱祯; 关键词：DNA重组融合蛋白基因

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宋贵生