尹宝慧
- 作品数：7 被引量：12H指数：2
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- RNA干扰抑制HOXA7表达能逆转白血病U937细胞多药耐药被引量：4
- 2013年
- 目的:运用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术抑制同源盒基因A7(homeobox geneA7,HOXA7)表达,并探讨其对白血病U937细胞多药耐药的逆转作用。方法:将靶向HOXA7基因的特异性真核表达载体(pGPU6/GFP/Neo-shHOXA7)及阴性对照载体(pGPU6/GFP/Neo-shNC)分别转染U937细胞,G418稳定筛选。实验分3组:实验组(稳定表达pGPU6/GFP/Neo-shHOXA7的U937细胞)、阴性对照组(稳定表达pGPU6/GFP/Neo-shNC的U937细胞)和空白对照组(U937细胞)。RT-PCR和蛋白质印迹法分别在mRNA和蛋白质水平检测各组细胞中HOXA7的表达情况。MTT法检测各组细胞对阿糖胞苷(cytarabine,Ara-C)和高三尖杉酯碱(homo harringtonine,HHT)的敏感性。FCM法分别检测Ara-C(10μg/mL)和HHT(0.5μg/mL)作用下各组细胞的凋亡情况。结果:实验组HOXA7在mRNA和蛋白质水平的相对表达量明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。实验组Ara-C和HHT的半数抑制浓度(half-inhibitory concentration,IC50)较阴性对照组和空白对照组的IC50分别降低了3.5倍和8.5倍(P<0.05),提示实验组细胞对Ara-C和HHT的敏感性增加。实验组细胞分别经Ara-C(10μg/mL)和HHT(0.5μg/mL)诱导后,细胞凋亡率明显高于相同药物作用下阴性对照组和空白对照组的细胞凋亡率(P<0.05)。结论:RNAi抑制HOXA7表达能增强Ara-C和HHT对U937细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用,在一定程度上可逆转白血病细胞的多药耐药性。
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- 关键词：白血病同源盒RNA干扰多药U937细胞
- 黄芪注射液对U937细胞增殖与凋亡的影响及相关机制的探讨被引量：7
- 2013年
- 目的研究不同浓度黄芪注射液对白血病细胞株U937增殖、凋亡的影响,并初步探讨其相关分子机制。方法白血病细胞株U937随机分为实验组(分别采用不同浓度黄芪注射液62.5、125、250、500、1000μg/mL处理U937细胞)和对照组(不加黄芪注射液)。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖能力,FITC-PI双染法流式细胞术检测各组细胞的凋亡,Hoechst33258染色后荧光显微镜下观察各组细胞形态学变化;U937细胞加入1000μg/mL黄芪注射液后0 h、12 h、24 h、48 h,采用RT-PCR法检测c-myc、p27 mRNA的表达。结果与对照组相比,不同浓度黄芪注射液均能抑制U937细胞增殖,差异均具有统计学意义(P<0.05);不同浓度黄芪注射液均能诱导U937细胞凋亡,较对照组显著增多(P<0.05),黄芪注射液浓度为1000μg/mL时凋亡率可达(63±4)%;黄芪注射液作用于U937细胞,随时间延长,c-myc mRNA表达逐渐下降,p27 mRNA表达逐渐增强,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论黄芪注射液体外可有效抑制白血病细胞株U937增殖,并诱导其凋亡,其相关分子机制可能与下调c-myc基因和上调p27基因表达有关。
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- 关键词：黄芪注射液白血病细胞增殖细胞凋亡白血病细胞株
- RNA干扰HOXA7联合甲氨蝶呤对U937细胞增殖、凋亡的影响被引量：2
- 2013年
- 目的:研究RNA干扰(RNA interference,RNAi)抑制HOXA7表达联合甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)对白血病U937细胞增殖、凋亡的影响。方法:将靶向HOXA7特异性表达载体(pGPU6/GFP/NeoshHOXA7)转染U937细胞,RT-PCR和Western blot法鉴定其对HOXA7表达的抑制作用。实验分5组:空白对照组、阴性对照组、RNAi组、MTX组、RNAi+MTX组,MTT法和流式细胞术分别检测各组细胞增殖抑制和凋亡情况。结果:RNAi组HOXA7在mRNA和蛋白水平相对表达量分别为(23.910±1.662)%、(23.980±1.651)%,均显著低于对照组(P<0.05);RNAi+MTX组细胞增殖抑制率明显高于RNAi组和MTX组(P<0.05);RNAi+MTX组细胞凋亡率为(32.941±2.565)%,明显高于RNAi组和MTX组(P<0.05)。结论:RNAi抑制HOXA7表达能增强MTX对U937细胞增殖抑制、凋亡诱导作用,RNAi抑制HOXA7联合MTX有望成为白血病治疗的新方法。
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- 关键词：甲氨蝶呤U937细胞
- 尾型同源盒基因与肿瘤
- 2012年
- 尾型同源盒基因（CDX）家族主要包括CDX1、CDX2、CDX4，是同源盒基因（HOX）Para-HOX家族中的一员，作为转录调节因子在胚胎发育造血系统形成、肠上皮组织发育等过程中起了重要的作用。CDX异常表达常与肿瘤发生密切相关。研究CDX与肿瘤发生的关系，对肿瘤诊断、治疗等有重要意义。
- 尹宝慧贾秀红
- 关键词：肿瘤
- 靶向同源盒基因A7的小干扰RNA筛选及功能鉴定
- 2013年
- 目的体外设计、合成及筛选高效沉默同源盒基因A7（HOXA7）表达的小干扰RNA（siRNA），并研究沉默HOXA7对人类肺腺癌细胞株LETP-a-2增殖、凋亡的影响。方法设计、合成三对针对HOXA7基因的siRNA（siRNAl、siRNA2、siRNA3）和一对阴性对照（siRNAnc），分别用阳离子脂质体介导转染LETPIa-2细胞。实验分6组：细胞对照组、脂质体对照组、siRNAnc组、siRNAl组、siRNA2组、siRNA3组，反转录聚合酶链反应（RT．PCR）和Westernblot分别检测各组HOXA7mRNA和蛋白表达情况，四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法和流式细胞术分别检测沉默HOXA7后LETP—a-2细胞增殖、凋亡情况。结果siRNA成功转染LETP-a-2细胞，三对siRNA均能有效沉默HOXA7表达，其中以siRNA2沉默HOXA7的效果最佳，在mRNA和蛋白水平沉默率分别为（57．344±4．743）％和（52．219±0．550）％；三对siRNA沉默HOXA7后均能抑制LETP-a-2细胞增殖并促进其凋亡，其中以siRNA2组效果最明显，48h细胞增殖抑制率可达（48．144±4．992）％，凋亡率达（26．613±0．612）％。结论筛选出高效沉默HOXA7的siRNA2能有效抑制LETP—a-2细胞增殖并促进其凋亡，提示HOXA7可能成为肿瘤基因治疗的新靶点。
- 尹宝慧贾秀红李建厂李有杰
- 关键词：RNA干扰
- 靶向RNA干扰HOXA7对U937细胞增殖及凋亡的影响
- 2014年
- 目的运用RNA干扰技术抑制HOXA7表达,研究其对白血病细胞株U937增殖、凋亡的影响,为白血病基因治疗寻找新靶点。方法实验分3组:实验组、空白对照组、阴性对照组。构建靶向HOXA7特异性真核表达载体及阴性对照载体并转染U937细胞,利用RT-PCR和Western blot法分别检测各组细胞中HOXA7 mRNA和蛋白水平的表达情况;MTT法检测转染24、48、72 h后各组细胞增殖能力;流式细胞术检测转染48 h后各组细胞凋亡情况。结果实验组HOXA7表达明显受抑制,在mRNA和蛋白水平抑制率分别为:(47.314±7.394)%和(52.371±9.258)%;MTT结果显示:实验组24、48、72 h细胞增殖抑制率分别为(15.062±5.086)%、(30.052±4.016)%、(52.617±9.292)%,与同时间点空白对照组和阴性对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),且呈时间依赖性;流式结果显示:实验组细胞凋亡率为(24.677±4.161)%,明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。结论靶向HOXA7特异性真核表达载体抑制HOXA7表达后,能有效抑制U937细胞增殖并促进其凋亡,HOXA7有望成为白血病基因治疗的新靶点。
- 尹宝慧贾秀红李建厂
- 关键词：同源盒细胞增殖细胞凋亡
- RNA干扰抑制HOXA7表达能逆转白血病U937细胞多药耐药
- 目的:运用RNA干扰(RNAinterference,RNAi)技术抑制HOXA7基因表达,并探讨其对白血病U937细胞多药耐药的逆转作用.方法:将靶向HOXA7基因的特异性真核表达载体(pGPU6/GFP/Neo-sh...
- 尹宝慧贾秀红李建厂
- 关键词：白血病U937细胞逆转作用
