徐黎明
- 作品数：134 被引量：120H指数：7
- 供职机构：中国水产科学研究院黑龙江水产研究所更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学文化科学更多>>
- 一种用于促进哲罗鲑性腺成熟的多肽及其应用
- 本发明公开了一种用于促进哲罗鲑性腺成熟的多肽及其应用。本发明公开的多肽为HT‑39，HT‑39为如下A1)或A2)：A1)氨基酸序列是序列1的多肽；A2)将序列表中序列1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/...
- 任广明尹家胜徐黎明卢彤岩
- 文献传递
- 鱼类传染性造血器官坏死病毒RT-LAMP检测方法的建立及应用被引量：7
- 2014年
- 将逆转录环介导的等温扩增技术(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)引入到鱼类的传染性造血器官坏死病病毒(infectious haematopoietic necrosis virus,IHNV)检测中,建立了简单、快速、灵敏的IHNV检测方法。针对IHNV的聚合酶蛋白基因(polymerase protein,L)设计特异性引物,以IHNV基因组RNA为模板,在反转录酶和Bst DNA聚合酶的作用下进行RT-LAMP,反应产物添加SYBR Green I荧光染料后,肉眼观察阳性样本表现为荧光绿色,阴性样本表现为红棕色。2%琼脂糖凝胶电泳检测结果与可视化检测结果一致。该方法实现了检测结果的可视化。特异性分析显示该方法不与传染性胰脏坏死病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)及病毒性出血性败血症病毒(viral haemorrhagic septicaemia virus,VHSV)发生交叉反应,并且可检测不低于10 pfu的IHNV RNA。本研究所建立的IHNV RT-LAMP可视化检测方法具有灵敏度高、特异性好、成本低、不依赖任何专门的仪器设备的优点,其检测结果直观可视化,可实现现场高通量快速检测。
- 刘淼徐黎明卢彤岩赵景壮曹永生刘红柏尹家胜张金凤冯剑
- 关键词：RT-LAMP
- 鱼类传染性造血器官坏死病毒糖蛋白的酵母表面展示被引量：2
- 2016年
- 糖蛋白(glycoprotein,G)是鱼类传染性造血器官坏死病毒的主要表面抗原,是病毒检测及疫苗研制的主要靶基因。为了对其进行酵母表面展示,本研究利用本实验室保存的含有IHNV-Sn1203毒株G基因的质粒为模板,PCR扩增富含抗原表位的糖蛋白基因片段后,连接酵母表面展示载体p YD1,构建重组质粒p YD1-G。将p YD1-G转化酿酒酵母EBY100细胞后,利用半乳糖诱导G蛋白的表达。利用细胞免疫荧光、Western Blotting及流式细胞仪检测酵母表面G蛋白的表达情况。细胞免疫荧光结果显示,转化了p YD1-G重组质粒的酵母细胞表面呈现出特异性荧光;Western Blotting结果显示,经半乳糖诱导后G蛋白在酵母细胞表面获得了成功表达;流式细胞仪检测结果表明,随着半乳糖诱导时间的增加,G蛋白的表达量随之增加,并在诱导48 h时达到峰值。以上研究表明G蛋白在酵母细胞表面获得了成功表达,本研究为以酵母为活载体的新型口服疫苗的研制奠定了基础。
- 赵景壮徐黎明刘淼曹永生尹家胜刘红柏卢彤岩
- 关键词：糖蛋白真核表达酵母表面展示
- 一种细胞培养板
- 一种细胞培养板，涉及细胞培养装置，本实用新型为了解决现有细胞培养板制备的单层细胞在加入液体时容易被破坏，并且需要频繁更换枪头，否则极易导致细胞污染的问题，本实用新型包括细胞培养板，在细胞培养板的培养板孔内设置有加样台，加...
- 徐黎明赵景壮卢彤岩
- 文献传递
- 抗IPNV的海带提取物及其应用
- 本发明属于提取物领域，具体涉及抗IPNV海带提取物及其应用。本发明公开了海带提取物，所述海带提取物按照包括如下步骤的方法制备：1)海带粗提物的制备：包括去除海带浸提液中的蛋白质，得到海带粗提物；所述海带浸提液是对海带进行...
- 任广明徐黎明卢彤岩赵景壮邵轶智
- PARP抑制剂PJ34在制备抗鱼类弹状病毒产品中的应用
- 本发明公开了PARP抑制剂PJ34在制备抗鱼类弹状病毒产品中的应用。本发明提供了PARP抑制剂PJ34或其衍生物或其药学上可接受的盐或以PARP抑制剂PJ34或其衍生物或其药学上可接受的盐为活性成分的物质在制备抗鱼类弹状...
- 赵景壮徐黎明卢彤岩任广明邵轶智
- 文献传递
- 传染性胰脏坏死病酵母展示疫苗的免疫效果评价被引量：1
- 2020年
- 为了评价前期构建的传染性胰脏坏死病毒(Infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)VP2蛋白酵母展示疫苗(EBY100/pYD1-VP2)的免疫保护效果,以虹鳟Oncorhynchus mykiss为试验动物分析了口服免疫的保护效力,利用流式细胞仪和细胞免疫荧光检测方法确定疫苗株的最佳诱导时间为60 h,然后大量制备酵母口服疫苗,分别利用单次和多次口灌的方式对虹鳟进行免疫;单次免疫为连续免疫7 d,多次免疫为单次免疫一周后再以相同剂量免疫7 d,免疫剂量均为每天100μL疫苗菌(1×10^10 CFU/mL),同时设置空载体酵母菌免疫组和PBS模拟免疫组,通过免疫相关基因定量、中和抗体滴定及攻毒后IPNV病毒载量分析口服疫苗的保护效果。结果表明:疫苗株免疫组虹鳟头肾、后肠中的免疫相关基因IgM、IgT、CD4、CD8在各时间点的表达量均显著高于空载体酵母菌免疫组和PBS模拟免疫组(P<0.05),且与单次免疫组相比,多次免疫组免疫相关基因表达量显著升高(P<0.05);在疫苗株免疫组虹鳟血清中均发现了中和抗体,其中,多次免疫组各时间点血清中和抗体效价均高于单次免疫组,免疫后第49天时IPNV中和抗体效价达到最高(39.28);病毒载量分析显示,各时间点疫苗株免疫组VP1和VP2基因表达量显著低于空载体酵母免疫组(P<0.05),并且在第14天、第21天时,疫苗株单次免疫组VP1和VP2基因表达量分别为疫苗株多次免疫组基因表达量的2.25、3.33倍(VP1)和2.67、2.80倍(VP2)。研究表明,该口服疫苗可诱导虹鳟产生非特异性和特异性免疫应答,对虹鳟具有显著的免疫保护作用。
- 董莹贺文斌赵景壮任广明卢彤岩邵轶智徐黎明
- 关键词：虹鳟口服疫苗
- 虹鳟fabp10基因真核表达载体构建、生物信息学及组织表达分析
- 2023年
- 为探究虹鳟(Oncorhynchus mykiss)脂肪酸结合蛋白10(fatty acid binding protein 10,fabp10)基因序列信息及其所编码蛋白的结构和功能等,本试验根据Gen Bank数据库公布的河鳟(Salmo trutta)fabp10基因的CDS序列信息设计引物,通过RT-PCR获得fabp10基因片段,将目的片段与pMD-18-T载体连接转化DH5α感受态细胞,构建pMD-18-T-fabp10克隆载体,双酶切回收基因片段,构建pcDNA3.1-fabp10真核表达载体,分析fabp10基因在虹鳟不同组织中的表达,经双酶切、测序鉴定构建成功。将表达载体转染至EPC细胞,分别于24h、36 h、48 h后收集细胞进行荧光定量PCR检测。结果显示:虹鳟fabp10基因CDS区与Gen Bank数据库中Salmo trutta fabp10基因CDS区同源性高达100%。生物信息学分析发现,fabp10基因编码区全长378 bp,编码126个氨基酸。Fabp10蛋白主要分布在细胞质中,存在23个潜在磷酸化位点。转染pcDNA3.1-fabp10可显著提高EPC细胞中fabp10 m RNA的表达(P<0.05)。RT-q PCR结果显示:fabp10基因在肝脏中表达丰度最高,随之为肾脏、肌肉、肠、脾脏、心脏,在脑中表达量最低。本试验成功扩增出fabp10基因CDS区并构建了真核表达载体,成功预测分析了其结构和功能,为研究虹鳟机体脂质代谢过程提供了基础。
- 任广明林玉杰徐黎明赵景壮邵轶智卢彤岩
- 关键词：虹鳟真核表达载体脂质代谢
- 传染性造血器官坏死病病毒高效RT-PCR检测方法的建立被引量：5
- 2013年
- 传染性造血器官坏死病毒（Infectious haematopoietic necrosis virus，IHNV），属弹状病毒科（Rhabdoviridae），诺拉弹状病毒属（Novirhabdovirus），IHNV是该属代表种。IHNV病毒粒子含有一条全长约为11kb的线状、反义、单股RNA。
- 徐黎明刘红柏徐进卢彤岩
- 关键词：RT-PCR检测
- 传染性胰脏坏死病毒VP3抗血清的制备及应用被引量：1
- 2021年
- 为丰富传染性胰脏坏死病毒(infectious pancreas necrosis virus,IPNV)的检测方法,以GenogroupⅠ型的IPNV ChRtm213分离株基因组RNA为模板,利用一步法RT-PCR扩增获得了编码IPNV VP3基因序列(711 bp),将其克隆至pET-32a原核表达载体,利用大肠杆菌Rosetta进行VP3蛋白表达,以纯化的VP3蛋白为免疫原制备鼠抗血清,利用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)对抗血清效价进行测定,并利用间接免疫荧光抗体法(indirect immunofluorescent antibody test,IFAT)和中国不同地区的IPNV分离株,对抗血清识别中国现行IPNV分离株的能力进行免疫学鉴定。结果表明:SDS-PAGE分析显示,表达纯化的VP3蛋白条带单一,相对分子质量约为45000,与理论值相符;抗血清效价分析显示,所制备的鼠抗IPNV VP3血清与IPNV的反应效价为16000,与纯化的IPNV VP3蛋白的反应效价为32000;间接免疫荧光抗体法分析显示,制备的鼠抗血清能够特异性识别中国不同地区的GenogroupⅠ和GenogroupⅤIPNV分离株,且该血清不与传染性造血器官坏死病毒(IHNV)和病毒性出血性败血症病毒(VHSV)发生交叉反应,具备较好的特异性。研究表明,本研究中利用原核表达系统表达的IPNV VP3蛋白具有良好的免疫原性,所制备的IPNV VP3抗血清能够特异性识别中国不同地区的IPNV分离株。
- 陈桂花贺文斌徐黎明赵景壮任广明邵轶智段凯越卢彤岩
- 关键词：蛋白表达VP3蛋白免疫原性
