曾乐祥
- 作品数：34 被引量：71H指数：5
- 供职机构：中山大学孙逸仙纪念医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金东莞市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学文化科学更多>>
- 抑制SHARPIN激活Rip1促进LNCaP-AI细胞坏死性凋亡被引量：1
- 2016年
- 目的:探讨SHARPIN对去势抵抗性前列腺癌细胞LNCaP-AI坏死性凋亡关键因子Rip1的调控作用,以及对细胞坏死性凋亡的影响。方法:将LNCaP-AI细胞分为TNF-α+Z-VAD(caspase抑制剂)处理组与TNF-α+Z-VAD+Nec-1(Rip1抑制剂)处理组,应用MTS检测各组细胞的活力,研究坏死性凋亡机制在诱导LNCaP-AI细胞死亡中的作用。将LNCaP-AI细胞分为阴性对照组和SHARPIN干扰(si-SHARPIN)组,RT-qPCR验证抑制效率,通过免疫荧光等技术进一步探讨SHARPIN调控坏死性凋亡的具体分子机制。结果:与对照组相比,TNF-α+Z-VAD处理组的LNCaP-AI细胞活力下降28%(P<0.05),而TNF-α+Z-VAD+Nec-1处理组的细胞在Rip1被抑制后,细胞活力无明显改变。在LNCaP-AI细胞中,通过siRNA抑制SHARPIN表达后,Rip1表达水平上调,同时,LNCaP-AI细胞坏死性凋亡比例升高。结论:LNCaP-AI细胞可通过坏死性凋亡机制诱导死亡,下调SHARPIN可能通过激活Rip1增强LNCaP-AI细胞坏死性凋亡。
- 王淦平黄海陈贤举赖义明林春浩曾乐祥曹亿张一鸣余永晟郭正辉
- 人肝细胞核因子4α联合组蛋白去乙酰化酶和甲基化转移酶抑制剂诱导成纤维细胞转分化为肝细胞的研究
- 2017年
- 目的 利用人肝细胞核因子4α（HNF4A）与表观遗传修饰[组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACi）＋甲基化转移酶抑制剂（DNMTi）]联合诱导人成纤维细胞向肝细胞转分化，建立更为高效、新型的肝细胞转分化方法。
方法取第6～8代人皮肤成纤维细胞，置于5’氮杂胞苷（5-AzaC）与丙戊酸（VPA）中，并感染HNF4A重组慢病毒共同诱导20 d。用倒置相差显微镜动态观察诱导过程中的细胞形态变化，实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测并分析肝细胞特异性基因的表达，吲哚菁绿摄取实验、糖原过碘酸-无色品红（PAS）染色和尿素合成功能实验验证生物学功能。
结果 诱导过程中，细胞形态逐渐由长梭形转变为上皮样形态，并逐渐开始过表达肝特异基因及表现生物学功能。诱导第20天，细胞在形态学上有明显肝细胞上皮样变化，胞质丰富、核大而圆深染且核仁明显；Real-time PCR检测肝特异性基因均有不同程度的表达上调，以白蛋白（ALB）及转铁蛋白（TF）最显著，分别为118%及250%，差异有统计学意义（t＝7.418、5.131，P＝0.002、0.001）；吲哚菁绿摄取实验结果显示约35%呈阳性细胞；70%细胞呈糖原PAS染色阳性；尿素合成动态检测可见诱导细胞尿素分泌量呈逐增多趋势，到达肝样细胞（iHEPs）期（第20天），每106个细胞合成的尿素氮量达到了等量正常肝细胞合成的55%，即iHEPs从生物学功能上均显示转分化肝样细胞肝功能部分接近正常肝细胞水平。结论 HNF4A与表观遗传修饰（HDACi＋DNMTi）可以联合诱导人成纤维细胞转分化为肝细胞样细胞，肝样细胞在基因表达及生物学功能部分接近正常肝脏细胞。
- 邓洁敏伍耀豪曾乐祥蒋雯丽张杰周嘉嘉邱荣林陈子月邓小耿
- 关键词：肝细胞转分化组蛋白去乙酰化
- 112例改良腹腔镜脾切除术治疗儿童血液病的临床研究
- 目的 总结改良腹腔镜脾切除术治疗儿童血液病的经验和特点.方法 回顾性分析2005 年3 月至2014 年6 月112 例由同一主刀医师行腹腔镜脾切除术的血液病患儿的临床资料.其中,男性63 例,女性49 例,平均年龄8....
- 邓小耿伍耀豪曾乐祥周嘉嘉张杰邱荣林
- 腹腔镜下单孔法治疗小儿腹股沟斜疝的优势探讨被引量：7
- 2013年
- 目的通过比较腹腔镜下单孔法及双孔法治疗小儿腹股沟斜疝的临床应用,探讨腹腔镜下单孔法在治疗小儿腹股沟斜疝中的优势。方法通过回顾性分析我科自2006年1月至2011年3月收治的80例小儿腹股沟斜疝患儿,分别采用腹腔镜下双孔法及单孔法缝扎腹股沟斜疝单侧疝囊内环治疗,每组各收治40例,年龄在6个月到5岁范围。结果在缝合正常大小内环口的病例中,腹腔镜下单孔法缝扎单侧内环口操作时间平均为11.8min(手术用时范围10～13min),双孔法操作平均时间为12.3min(手术用时范围11～14min);而在缝合较大内环口的用时时间上,单孔法手术用时明显较双孔法手术时间短(11.3min,14.23min)。术后随访平均6个月(3个月～1年),手术患儿均无腹股沟斜疝复发。结论相比较腹腔镜下双孔法高位结扎腹股沟疝疝囊,采用腹腔镜下单孔法高位缝扎腹股沟斜疝疝囊,不仅具有美观、创伤小的优势,同时操作时间较短,更适合治疗较大内环口的腹股沟斜疝。
- 张杰邓小耿伍耀豪周嘉嘉曾乐祥丘荣林
- 关键词：腹股沟斜疝儿童
- 先天性巨结肠的腹腔镜治疗体会
- 2012年
- 目的探讨腹腔镜技术在小儿先天性巨结肠治疗中的应用。方法对12例先天性巨结肠患儿行腹腔镜Swenson手术,其中短段型3例,普通型8例,长段型1例。结果 12例患者均在腹腔镜下完成手术,无中转开腹病例。手术切除痉挛段和扩张段病变肠管送病理检查,其中最短者约15cm,最长者约60cm。术后病理均显示符合先天性巨结肠诊断。所有病例均未出现吻合口漏、尿潴留、肛周感染等并发症。术后随访3～12个月,所有病例排便功能恢复良好,而且无大便失禁和便秘症状。结论腹腔镜先天性巨结肠根治术创伤小、术后恢复快,手术安全,效果满意。
- 伍耀豪邓小耿曾乐祥张杰周嘉嘉邱荣林
- 关键词：腹腔镜先天性巨结肠手术
- miRNA-122促进小鼠胚胎干细胞源性肝前体细胞的分化与成熟被引量：4
- 2013年
- 目的:通过miRNA-122(miR-122)转染胚胎干细胞(ESCs)源性肝前体细胞,观察及评估其是否能推进ESCs向肝细胞的分化过程。方法:采用丁酸钠、成纤维细胞生长因子4(FGF-4)及地塞米松(Dex)联合序贯诱导小鼠ESCs使之初步分化为肝前体细胞,然后利用Gateway技术构建出pAV.Ex1d-CMV>miR122/IRES/eGFP重组腺病毒表达载体,使其转染贴壁诱导第9天的小鼠ESCs源性肝前体细胞,获得稳定高表达miR-122的细胞后继续培养。采用荧光显微镜观察转染后细胞形态的变化;使用real-time RT-PCR检测肝特异性基因的表达;免疫荧光检测肝特异性蛋白表达水平;吲哚氰绿摄取实验、糖原染色及尿素合成功能实验检测肝细胞功能。结果:丁酸钠、FGF-4及Dex联合序贯诱导可将小鼠ESCs成功地诱导为肝前体细胞。转染miR-122后,细胞在形态学上更接近成熟肝细胞;肝特异性基因白蛋白(ALB)、甲状腺素运载蛋白、α1抗胰蛋白酶、葡萄糖-6-磷酸酶、细胞角蛋白8、胆固醇7α-羟化酶及细胞色素P450 3A4的mRNA表达均增高;肝特异性蛋白ALB及细胞角蛋白18均表达增高,而甲胎蛋白表达降低;吲哚氰绿摄取实验、糖原染色及尿素合成功能实验结果均显示转染miR-122后肝细胞功能较对照组明显增强。结论:丁酸钠、FGF-4及Dex联合序贯诱导可将小鼠ESCs成功地诱导为肝前体细胞;miR-122能够有效地促进小鼠肝前体细胞的分化与成熟。
- 邓小耿邱荣林伍耀豪李治熹曾乐祥张杰周嘉嘉唐晶邓洁敏
- 关键词：胚胎干细胞肝细胞
- hsa_circ_0005777在肝母细胞瘤中的表达及对细胞增殖周期的影响研究
- 2022年
- 目的探索环状RNA hsa_circ_0005777在肝母细胞瘤中的表达及对肝母细胞瘤细胞增殖周期的影响。方法实验细胞包括人肝母细胞瘤细胞株HepG2和HUH6,将实验细胞培养在含10%胎牛血清及1%双抗的DMEM培养基中,置于37℃、5%CO2的恒温培养箱中。实验组织标本包括肝母细胞瘤肿瘤及癌旁组织标本,来源于中山大学孙逸仙纪念医院小儿外科住院患儿手术切除的组织。所有肿瘤组织标本和癌旁组织标本在手术切除后,均立即浸泡在RNA later保存液中防止RNA降解,随后放在-80℃冰箱保存。在肝母细胞瘤细胞株中转染hsa_circ_0005777过表达质粒,为过表达组;未转染过表达质粒的细胞株作为阴性对照,为对照组。检测内容包括:①鉴定hsa_circ_0005777在肝母细胞瘤细胞株中的性质及分布情况;②检测hsa_circ_0005777在肝母细胞瘤肿瘤、癌旁组织组织标本和肝母细胞瘤细胞株中的表达情况;③检测过表达组对肝母细胞瘤细胞株细胞增殖能力的影响;④检测过表达组对肝母细胞瘤细胞株细胞周期的影响及过表达组对细胞周期蛋白Cyclin D1表达水平的影响。结果①hsa_circ_0005777在肝母细胞瘤细胞株中成环并富集在细胞质中;②hsa_circ_0005777在肝母细胞瘤组织标本中的表达显著高于癌旁组织,在肝母细胞瘤肿瘤组织标本及细胞株中明显高表达;③过表达组可明显提高肝母细胞瘤细胞株的增殖能力;④过表达组可明显促进细胞周期蛋白Cyclin D1的表达,可促进肝母细胞瘤细胞株细胞G1/S期转化。结论hsa_circ_0005777可促进肝母细胞瘤肿瘤细胞增殖,有望成为治疗肝母细胞瘤的新靶点。
- 陈露平伍耀豪娄蕾邱荣林曾乐祥苏健航邓小耿
- 关键词：细胞增殖肝母细胞瘤
- MYCN-siRNA和神经生长因子联合诱导神经母细胞瘤细胞分化凋亡的实验研究被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨应用MYCN-siRNA和神经生长因子(NGF)联合诱导神经母细胞瘤细胞分化凋亡的分子机制。方法:实验分组包括MYCN-siRNA与NGF联合诱导组、NGF诱导组、siRNA诱导组和空白对照组。观察各实验组神经母细胞瘤细胞的形态学变化及细胞的增殖变化,通过Real-TimePCR检测MYCN-mRNA和NSE的表达、Western Blot检测MYCN基因沉默后MYCN蛋白的表达情况。结果:神经母细胞瘤MYCN基因沉默后,RT-PCR检测IMR-32细胞MYCN-mRNA表达的抑制率达到89%;Western Blot检测IMR-32转染MYCN-siRNA后的第3天MYCN蛋白的表达率达到最低,表达率下降至26.6%。在NGF和MYCN-siRNA的共同作用下,神经母细胞瘤细胞出现了较明显的细胞形态学分化,细胞的增殖能力明显下降,IMR-32细胞NSE的表达明显下降。结论:MYCN-siRNA和NGF联合诱导神经母细胞瘤细胞,可使MYCN-mRNA的表达和NSE的表达均明显下降,并促进神经母细胞瘤细胞分化凋亡。
- 曾乐祥邱荣林伍耀豪顾焱晖张杰周嘉嘉邓小耿
- 关键词：神经母细胞瘤神经生长因子
- RNAi抑制NANOG表达对肝癌细胞HepG2中MDR1表达及阿霉素敏感性的影响被引量：3
- 2014年
- 目的探讨抑制NANOG表达对肝癌细胞HepG2中多药耐药基因1(multidrug resistance gene 1,MDR1)表达及阿霉素敏感性的影响。方法将靶向NANOG基因的特异性siRNA转染肝癌细胞HepG2,Real-time PCR和Western blot检测siRNA沉默NANOG基因后NANOG、MDR1 mRNA和蛋白的表达,平板克隆形成实验检测沉默NANOG基因后对细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测沉默NANOG基因后对细胞周期的影响,CCK-8法检测沉默NANOG基因后HepG2细胞对阿霉素的敏感性情况。结果靶向NANOG基因特异性siRNA转染肝癌细胞HepG2后,能有效抑制NANOG mRNA和蛋白表达,与Mock组比值分别为(0.32±0.05)和(0.38±0.08);与Mock组比较,沉默NANOG基因后,细胞克隆形成率下降[(8.51±3.63)%vs(17.13±2.24)%,P<0.05],进入G0/G1期的细胞比例增多[(75.33±8.21)%vs(57.81±5.05)%,P<0.05],HepG2细胞对阿霉素的敏感性增强(P<0.05),HepG2细胞内MDR1 mRNA和蛋白表达下降,与Mock组比值分别为(0.35±0.06)和(0.41±0.08)。结论抑制NANOG表达可引起肝癌细胞HepG2中MDR1的表达下调并增强细胞对阿霉素的敏感性。
- 周嘉嘉陈汝福邓小耿周雨周泉波张杰伍耀豪曾乐祥邱荣林
- 关键词：肝癌NANOG阿霉素多药耐药基因1
- 小儿腹腔巨大肿瘤合并腹腔间隙综合征6例治疗措施分析
- 目的 探讨小儿腹腔巨大肿瘤合并腹腔间隙综合征的有效治疗措施。方法 2013年1月至2014年10月，我科收治了6例腹腔巨大肿瘤合并腹腔间隙综合征的患儿，回顾性分析其生命体征、血氧饱和度、腹围、膀胱压力、尿量等的变化及治疗...
- 邓小耿曾乐祥伍耀豪张杰周嘉嘉邱荣林
- 关键词：腹腔间隙综合征
