李克生
- 作品数：66 被引量：111H指数：6
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- 甲状旁腺素对人甲状腺髓样癌细胞调控作用的实验研究
- 2013年
- 目的探讨甲状旁腺素(parathyroid hormone,PTH)和甲状旁腺素受体单抗(Anti-Parathyroid Hormone Receptor1antibody,anti-PTHR1)对人甲状腺髓样癌细胞株(TT细胞株)体外生长及细胞增殖的影响。方法体外培养TT细胞株,药物作用分为PTH组,anti-PTHR1组,各组经药物处理后,先在倒置显微镜下观察细胞的生长状况,MTT法检测细胞生长抑制率,RT-PCR法检测PTHmRNA的表达变化情况。结果倒置显微镜下可较明显看到细胞的变化,MTT结果显示,PTH和anti-PTHR1能有效地抑制TT细胞的增殖,呈时间和剂量依赖关系,2.0μmol/L的PTH和1.0μmol/Lanti-PTHR1能明显提高细胞的生长抑制率(P<0.05),RT-PCR结果显示药物作用后PTHRmRNA的表达下调(P<0.05)。结论 2.0μmol/L的PTH和1.0μmol/L的anti-PTHR1可抑制TT细胞的增殖。阻止细胞周期进展,明显降低其增殖指数,在诱导凋亡中起重要作用。
- 陈瑞慧刘勤江马世红李克生廖世奇
- 关键词：甲状旁腺素细胞增殖
- 抗大肠杆菌O157单克隆抗体制备过程中杂交瘤细胞的观测
- 2008年
- 采用细胞活力测定、形态学观察和遗传学检测的方法,研究了在用常规方法制备大肠杆菌O157单克隆抗体过程中,融合前后的细胞在细胞活力、细胞形态以及染色体数量的差异.结果表明,与凯骨髓瘤细胞相比,杂交瘤细胞的细胞活力和细胞形态无明显变化;当脾细胞与凯骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞后,其染色体数目接近两亲本细胞染色体数目之和.
- 王燕琴李克生杜蕙芬胡永浩
- 关键词：大肠杆菌单克隆抗体杂交瘤细胞
- 肠炎沙门菌脂多糖抗原的制备及其生物学特性被引量：1
- 2011年
- 目的制备肠炎沙门菌(Salmonella enteritidis,SE)脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)抗原,并鉴定其生物学特性。方法分别用热酚水法和水饱和冷酚法提取SE LPS抗原,免疫BALB/c小鼠,制备LPS单克隆抗体。采用蒽酮-硫酸法测定LPS多糖含量,考马斯亮蓝染色法测定其蛋白含量,SDS-PAGE分析其分子结构,Western blot分析其反应原性,间接ELISA法分析其特异性。结果热酚水法水相LPS粗提物中的多糖和蛋白含量分别约为3.413 mg/ml和46μg/ml,水饱和冷酚法水相LPS粗提物中的多糖和蛋白含量分别约为2.248 mg/ml和31μg/ml;提取的LPS呈现明显的梯度型条带;制备的2株抗LPS单抗(1D3和2E5)均能与提取的LPS发生特异性反应;制备的LPS除了与伤寒沙门菌A～F多价血清发生交叉反应外,与其他各种肠道菌单价或多价血清均未发生反应。结论热酚水法和水饱和冷酚法均可制备出活性、纯度均较好的LPS,但水饱和冷酚法操作简单,且提取的样品纯度高,特异性和反应原性良好,可用于肠炎沙门菌特异性抗原位点单抗的制备及免疫学检测。
- 鲁学萍杜惠芬李克生连晓雯刘红亮袁明叶文华
- 关键词：沙门菌肠炎脂多糖类抗原
- 兰州地区恶性肿瘤患者弓形虫抗体IgG和IgM检测结果对比分析被引量：4
- 2010年
- 采用间接ELISA法对兰州地区435例不同临床类型恶性肿瘤患者血清中的弓形虫抗体IgG和IgM进行检测，以50例健康体检者作为对照，对前者伴发弓形虫病的情况进行统计，得出兰州地区不同临床类型恶性肿瘤患者伴发弓形虫病的特点及规律。
- 连晓雯李克生杜惠芬袁明叶文华周永奇
- 关键词：恶性肿瘤弓形虫病
- 胰蛋白酶抑制剂体外抑制肿瘤细胞降解细胞外基质的研究被引量：10
- 2004年
- 国内已有文献报道,牛肺胰蛋白酶抑制剂对B16黑色素瘤实验性肺转移及Lewis肺癌有抑制作用.肿瘤侵袭与转移机制较复杂,是一个多环节,多步骤的过程,涉及细胞间,细胞与基质间的作用,以及多种基因改变等过程,其中肿瘤细胞穿透细胞外基质尤为重要.利用可降解细胞外基质的蛋白酶抑制剂来抑制肿瘤的侵袭与转移已引起人们极大的兴趣,其中纤溶酶抑制剂--胰蛋白酶抑制剂也倍受关注.已有研究证明,尿胰蛋白酶抑制剂对乳腺癌细胞降解细胞外基质有明显地抑制作用[1].本实验对胰蛋白酶抑制剂抗转移机制进行了研究.
- 杜惠芬李克生郭红云李雪萍
- 关键词：胰蛋白酶抑制剂肿瘤细胞细胞外基质肿瘤侵袭肿瘤抑制
- 抗人血红蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
- 2002年
- 李克生杜惠芬
- 关键词：杂交瘤细胞肌红蛋白单克隆抗体杂种细胞分泌抗体
- 单核增生性李氏杆菌溶血素的原核表达及可溶性分析
- 2012年
- 对单核增生性李氏杆菌的主要毒力基因hlyA进行大肠杆菌原核表达,分析其表达蛋白的可溶性并纯化。根据hlyA基因设计特异性引物,细菌煮沸破裂提取基因组,PCR扩增出目的条带。连接转化至克隆载体pMD18-T,测序正确后连接表达载体pET-30a(+),酶切和PCR鉴定正确后转化至BL21(DE3),构建重组质粒pET-30a-hlyA。IPTG诱导表达蛋白,并分析其可溶性。PCR扩增的hlyA基因全长约1 600 bp,成功构建了重组质粒pET-30a-hlyA,转化大肠杆菌诱导表达了溶血素蛋白,SDS-PAGE分析表达产物,结果显示表达的蛋白分子量约为60 kD,以可溶性和包涵体2种形式存在,且以可溶性为主要形式。成功克隆和表达了单核细胞增生性李氏杆菌hlyA基因和溶血素蛋白,并得到纯化蛋白。
- 杜丽娟李克生杜惠芬付宝权连晓雯胡永浩
- 关键词：溶血素原核表达可溶性蛋白
- 大肠杆菌O157 LPS单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立被引量：7
- 2011年
- 以热灭活的大肠杆菌O157∶H7(E.coli O157∶H7)菌体抗原为免疫原,E.coli O157∶H7菌体结合脂多糖(LPS)为筛选抗原,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备E.coli O157∶H7LPS单克隆抗体。采用改良过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶(HRP)酶标抗体,并建立检测E.coli O157∶H7的双抗体夹心ELISA方法。结果,成功制备了9株稳定分泌E.coli O157∶H7LPS单克隆抗体的杂交瘤细胞,其中7F9和7G2为LPS O-特异性多糖(O-SP)单克隆抗体,与E.coli O157∶H7菌体具有较好的反应性。此双抗体夹心ELISA方法对与受试的非O157菌株没有交叉反应,对E.coli O157∶H7纯培养菌液的检出下限为3×104CFU/mL。结果表明,建立的ELISA检测方法对E.coli O157具有较高的特异性和灵敏度,该方法有望与其他方法相结合用于对E.coli O157∶H7的检测。
- 刘红亮李克生陈学忠杜惠芬连晓雯鲁学萍袁明
- 关键词：单克隆抗体双抗体夹心ELISA
- 抗阪崎肠杆菌LPS单克隆抗体的制备及初步应用被引量：3
- 2013年
- 为制备抗阪崎肠杆菌(ES)脂多糖(LPS)抗原单克隆抗体(MAb)及建立双抗夹心ELISA检测方法,本研究以热灭活的ES(ATCC51329)菌体抗原作为免疫原,ES菌体结合LPS作为筛选抗原,采用杂交瘤细胞技术筛选获得9株稳定分泌抗ES LPS特异性MAb的杂交瘤细胞株。采用改良的过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶(HRP)酶标抗体,并建立检测ES的双抗体夹心ELISA方法,该方法对ES ATCC51329具有良好的特异性,最低检测限可达103cfu/mL,为食品中ES的检测提供特异性MAb及ELISA检测方法。
- 马卫静李克生杜惠芬彭洪江杜丽娟连晓雯
- 关键词：阪崎肠杆菌脂多糖单克隆抗体
- 结核分支杆菌特异性抗原重组蛋白MPT63检测系统的建立被引量：1
- 2013年
- 目的建立规范的结核分枝杆菌（MTB）特异性抗原重组蛋白MPT63酶联免疫吸附试验（EHSA）检测系统。方法采用方阵法确定蛋白包被浓度和酶标二抗浓度，以ROC曲线法确定MPT63蛋白EHSA法检测的cut一0ff值。探讨规范的EHSA检测系统建立的方法。结果EUSA检测系统M蹦3蛋白包被浓度1：128000，酶浓度1：1000时为最佳；在cut—ofr值为0．35—0．40时检测MPT63蛋白抗体的灵敏度和特异性最为理想，分别是75．0％和78．6％。结论用方阵法确定蛋白包被浓度和酶标二抗浓度，并以ROC曲线法确立cut—ofr值是建立规范化的EMSA检测系统的关键环节。
- 程国平李克生张润玲
- 关键词：酶联免疫吸附试验ROC曲线
