柴丹丹
- 作品数：9 被引量：13H指数：1
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- β2微球蛋白半定量金标快速检测试剂盒
- 本实用新型公开了一种β2微球蛋白半定量金标快速检测试剂盒，属于临床医学检测领域。所述试剂盒包括卡盒、比色卡和试纸条三部分：卡盒包括盒盖(8)与盒底(14)两部分，卡盒内置比色卡(9)和试纸条。卡盒正面可见检视窗(1)、加...
- 杜惠芬李克生徐杨连晓雯柴丹丹
- 文献传递
- 再生基因4(REG4)真核表达载体的构建及其蛋白在HEK293T细胞中的表达、纯化
- 2023年
- 目的构建再生基因4(regenerating gene 4,REG4)的真核表达载体,转染人胚肾细胞293T(human embryonic kidney 293T cells,HEK 293T),获得重组人再生胰岛衍生蛋白IV(regenerating islet-derived protein IV,Reg IV)。方法根据NCBI数据库REG4基因序列进行基因优化、合成,将其克隆至pCDNA3.4载体并进行双酶切和测序鉴定,通过转染试剂聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)将pCDNA3.4-REG4质粒瞬时转染至HEK 293T细胞(实验组),同时以pEGFP-C1质粒作为转染对照组,未转染重组质粒的HEK 293T细胞作为空白对照组。荧光显微镜观察转染对照组转染效率,分别收集实验组及空白对照组细胞和细胞培养液上清,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)与免疫印迹试验(Western-Blot,WB)检测Reg IV蛋白表达水平。通过镍柱及丙烯葡聚糖凝胶S-400(Sephacryl S-400)柱进行蛋白纯化,SDS-PAGE及WB对纯化后重组蛋白进行鉴定。结果经测序和双酶切鉴定,重组质粒pCDNA3.4-REG4构建成功。转染对照组(pEGFP-C1质粒)荧光显微镜观察结果显示转染效率约50%,表明转染成功。WB结果显示仅在实验组(pCDNA3.4-REG4质粒)的细胞中检测到RegIV蛋白。镍柱纯化时目的蛋白无法与镍柱填料有效结合,SephacrylS-400凝胶柱层析纯化获得了此重组蛋白。结论成功构建了REG4基因真核表达载体并在HEK 293T细胞中成功表达,为深入研究Reg IV蛋白的作用机理及开发潜在的抗癌靶向药物奠定了基础。
- 徐杨杜惠芬李克生柴丹丹石晓玲连晓雯张学良
- 关键词：真核表达瞬时转染蛋白纯化
- 再生基因4(RegⅣ)的原核表达、蛋白结构复性及纯化
- 2020年
- 目的:构建再生基因4(Reg Ⅳ)的原核表达载体,获得重组人Reg Ⅳ蛋白。方法:将已构建好的pEGFP-C1-Reg Ⅳ质粒进行酶切纯化获得目的基因,并构建到pET-30a原核表达载体上,经测序鉴定后将序列正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE凝胶电泳鉴定,并用凝胶层析对表达产物进行复性纯化。结果:构建了pET-30a-Reg Ⅳ原核表达重组质粒,IPTG诱导表达出约22KD的重组蛋白,表达产物经复性纯化后获得纯度较高的目的蛋白。结论:成功构建了Reg Ⅳ原核表达载体,并成功表达了重组人Reg Ⅳ蛋白。
- 徐杨张学良杜惠芬柴丹丹连晓雯张瑞君李克生
- 关键词：原核表达纯化
- 金标法检测尿β_2-MG在肾功能损伤诊断中的临床价值被引量：10
- 2019年
- 目的评价尿液β_2-微球蛋白(β_2-MG)金标检测试剂盒在肾功能早期损伤诊断中的应用价值。方法将临床诊断为肾病综合征患者53例、慢性肾炎综合征患者40例、慢性肾衰竭患者18例、高血压肾病患者33例、糖尿病肾病患者23例作为研究组,体检健康者157例作为对照组,以β_2-MG金标检测试剂盒检测β_2-MG水平,并与胶乳增强免疫比浊法检测结果进行比较。结果金标法与胶乳增强免疫比浊法检测尿液β_2-MG阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);金标法检测临床确诊肾病的167例患者尿β_2-MG的灵敏度为76.7%,符合度为85.2%,特异度为94.3%。结论尿液β_2-MG金标检测试剂盒对诊断肾功能早期损伤具有一定的临床应用价值。
- 徐杨杜惠芬李克生李光迪张瑞君柴丹丹连晓雯
- 关键词：Β2-微球蛋白早期肾损伤金标法
- 抗人胱蛋白酶抑制剂C单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2016年
- 目的制备抗人Cys-C单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法用基因工程表达的Cys-C抗原免疫BALB/c小鼠,用杂交瘤技术制备抗人Cys-C单克隆抗体,间接ELISA法检测单克隆抗体的效价、亲和力,鉴定单克隆抗体的亚类并检测抗原位点互补关系,SDS-PAGE鉴定抗体纯度,秋水仙素阻抑法鉴定染色体数目。结果筛选出2株能稳定分泌抗人Cys-C单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2H2、3C4,抗体Ig亚类均为IgG1,亲和常数分别为7.429×10-8、1.95×10-7,2株单克隆抗体抗原位点不重叠,染色体鉴定符合杂交瘤细胞的特性。结论成功制备了特异性的抗人Cys-C单克隆抗体,为Cys-C检测试剂盒的研究开发奠定了基础。
- 徐杨杜惠芬连晓雯张瑞君柴丹丹李克生
- 关键词：胱蛋白酶抑制剂C单克隆抗体
- 血清和尿液β2-MG检测对肿瘤化疗患者早期肾损伤的诊断意义被引量：1
- 2018年
- 目的:评价β2-MG检测在肿瘤化疗患者早期肾损伤诊断的临床意义。方法:用β2-MG金标检测试剂盒对125份肿瘤化疗患者血清样本、113份肿瘤化疗患者尿液样本,67份非化疗肿瘤患者血清样本和63份非化疗肿瘤患者尿液样本进行检测,同时采用胶乳增加免疫比浊法检测血清Cys C,用酶法检测血清样本Scr和BUN,超正常值参考范围按阳性结果统计。结果:化疗组和非化疗组患者血清β2-MG阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05),两组患者血清Cys C、BUN和Scr阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05);化疗组和非化疗组患者尿β2-MG阳性率比较差异有统计学意义(P<0.01),两组患者血清Cys C、BUN和Scr阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:尿液β2-MG检测对化疗肿瘤患者早期肾损伤有一定诊断价值,且较血清Cys C、BUN和Scr检测敏感。
- 杜惠芬徐杨李克生江秀娟柴丹丹张瑞君连晓雯
- 关键词：早期肾损伤
- 人胱抑素C金标快速检测试剂条的研制
- 2016年
- 目的研制一种胱抑素C(Cys-C)金标快速检测试剂条。方法确定早期肾损伤的血清Cys-C cut-off值,以0.9μg/ml为试剂条最低检测值。用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,用胶体标记Cys-C单克隆抗体并固化于玻璃纤维素垫,用Cys-C单克隆抗体和羊抗鼠Ig G抗体包被硝酸纤维素膜,制备Cys-C免疫层析金标检测试剂条。用试剂条检测175份糖尿病患者血清样本、418份肾病患者血清样本和102份健康人血清样本,对试剂条的特异性、敏感性、符合性及稳定性进行测试。结果试剂盒的特异度达到93.33%,糖尿病患者血清Cys-C阳性率为77.71%,肾病患者血清Cys-C阳性率为85.88%,两类患者血清Cys-C阳性率均显著高于健康人群,差异有统计学意义(P<0.01)。重复性和稳定性试验结果显示试剂检测结果的重复性好,37℃条件下12 d质量稳定。结论 Cys-C金标检测试剂条是一种特异性强、敏感性高、快速、简便,适宜普及推广的肾功能检测试剂。
- 杜惠芬李克生李光迪江秀娟徐杨柴丹丹
- 关键词：胱抑素C
- WT1、PAX2及ER在不典型增生内膜及Ⅰ型子宫内膜癌中表达的相关性被引量：1
- 2021年
- 目的:分析WT1、PAX2及ER在不典型增生内膜及Ⅰ型子宫内膜癌中的表达关系。方法:采用免疫组化法检测41例Ⅰ型子宫内膜癌、20例Ⅱ型子宫内膜癌、35例子宫内膜增生、19例子宫内膜不典型增生及17例正常子宫内膜中WT1、PAX2和ER的表达情况。结果:①WT1在Ⅰ型子宫内膜癌的表达明显高于正常增殖期子宫内膜、增生性病变子宫内膜及Ⅱ型子宫内膜癌(P<0.05)。②WT1与PAX2在不典型增生内膜及Ⅰ型子宫内膜癌中的表达正相关(P<0.05)。③ER阳性的不典型增生及Ⅰ型子宫内膜癌患者的WT1及PAX2表达明显高于ER阴性患者(P<0.05),且二者的表达正相关(P<0.05)。结论:WT1及PAX2在Ⅰ型子宫内膜癌的发病机制中扮演着重要的角色,并且可能作为同一信号通路中的两个重要细胞因子被激活而发挥致癌作用。
- 古扎努尔·尼牙孜李波柴丹丹李艳红郭蓉秦天裕
- 关键词：WT1PAX2ER不典型增生
- 人胱蛋白酶抑制剂C的原核表达及其免疫反应性研究
- 2014年
- 目的获得具有免疫反应性的人胱蛋白酶抑制剂C（Cysc）重组蛋白。方法从Hela细胞提取总RNA，采用RTPCR扩增获得人CysC基因片段，与质粒pET30a连接构建重组表达载体，转化大肠埃希菌E．coliBL21（DE3）并加入IPTG诱导表达，表达产物经凝胶层析复性和亲和层析纯化后，用间接ELISA检测纯化后的CysC重组蛋白对重组CysC免疫小鼠血清的免疫反应性。结果成功构建了重组表达载体pET30a—CysC，诱导表达出约19ku的重组蛋白，经复性纯化后获得纯度达90％以上的目的蛋白，与重组CysC免疫小鼠血清具有良好的免疫反应性。结论在原核系统成功表达了人CysC重组蛋白，而且具有良好的免疫反应性。
- 杜惠芬付宝权李克生连晓雯王春芽徐杨柴丹丹
- 关键词：原核表达复性免疫反应性
