李天森
- 作品数：30 被引量：18H指数：3
- 供职机构：石河子大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 绵羊GM-CSF原核表达及蛋白功能检测
- 2012年
- 目的:构建GM-CSF原核表达载体,并诱导表达、纯化其蛋白。方法:将GM-CSF基因克隆至原核表达载体pET-32中,转化至BL21中,用智能蛋白质多维纯化系统(AKTAxpressTM)纯化目的蛋白,利用MTT法测定GM-CSF融合蛋白对绵羊外周血淋巴细胞的增殖活性。结果:成功获得了435bp的绵羊GM-CSF基因片段,诱导表达了35kDa融合蛋白GM-CSF,其纯度达95%以上,浓度达860mg/mL;通过MTT证明该融合蛋白对绵羊淋巴细胞具有增殖活性,其作用最明显的蛋白浓度是200μg/mL。结论:成功获得重组蛋白GM-CSF,该蛋白具有较好的生物活性,为免疫增强佐剂的开发奠定了基础。
- 李蕊陈创夫盛金良张辉杨霞黄林刘志方王讲德监通李天森
- 关键词：绵羊GM-CSF蛋白表达蛋白纯化
- 布鲁氏菌ery操纵子突变株生物学特性分析被引量：3
- 2013年
- 布鲁氏菌ery操纵子参与赤藓醇代谢.赤藓醇能够促进布鲁氏菌的生长.为进一步研究布鲁氏菌引发宿主流产的分子机制,采用基因重组技术构建布鲁氏菌ery操纵子启动子缺失株(△ery),通过体内外实验探讨布鲁氏菌ery操纵子的生物学功能.研究结果显示,获得了布鲁氏菌ery操纵子缺失株;布鲁氏菌ery操纵子缺失株侵染胚胎滋养层细胞脱落较亲本株明显下降;巨噬细胞CFU计数缺失株作用组和亲本株作用组差异显著(P<0.05).试管凝集和虎红平板实验结果显示均出现凝集现象;检测血清中细胞因子IL-10和TNF-α的表达水平,△ery诱导机体产生的IL-10和TNF-α明显低于亲本株(P<0.05).小鼠脾脏细菌CFU计数结果显示,△ery较亲本株毒力明显下降.本研究表明,布鲁氏菌ery操纵子启动子缺失株毒力较亲本株明显下降,为进一步揭示布鲁氏菌引起流产的致病机制提供了一定的理论依据.
- 桂丹张辉孟仁孟茹张豫孙志华蒋攀文李天森陈创夫
- 关键词：布鲁氏菌毒力
- E3泛素连接酶Nrdp1对布鲁氏菌胞内生存以及布鲁氏菌所引起的细胞凋亡的影响
- 研究目的：以布鲁氏菌宿主细胞小鼠巨噬细胞E3 泛素连接酶Nrdp1 研究对象，构建干扰和过表达Nrdp1 基因的小鼠巨噬细胞转染模型；羊种布鲁氏菌16M 侵染小鼠巨噬细胞，探究其对布鲁氏菌胞内生存和布鲁氏菌诱导的巨噬细胞...
- 车召堂李爽王震李天森张辉陈创夫
- 布鲁氏菌rirA基因的表达与功能分析被引量：2
- 2015年
- [目的]构建布鲁氏菌rirA基因的原核表达载体并进行表达、鉴定。[方法]将rirA基因克隆至pET-28a载体,构建重组质粒pET-28a-rirA,并转化至E.coli BL21(DE3)中,IPTG诱导表达后,通过SDS-PAGE和Western blotting检测目的蛋白的表达及其反应原性,并对该蛋白进行生物信息学分析。[结果]PCR扩增出rir A基因全长为462 bp,编码153个氨基酸,SDS-PAGE分析表明获得了约19.8 k Da的融合蛋白,Western blotting结果显示该融合蛋白与羊抗布鲁氏菌阳性血清发生特异性反应,表明其具有良好的反应原性;生物信息学分析显示,该蛋白无跨膜区结构,不存在信号肽,二级结构以α-螺旋为主并利用Phyre2服务器成功构建了该蛋白的三维模型。[结论]成功构建了rirA基因的原核表达载体,所表达蛋白具有良好的反应原性。并且作为胞内蛋白参与布鲁氏菌铁代谢的转录调控。
- 江雅丽王震李爽王勇李天森郭飞张辉陈创夫
- 关键词：布鲁氏菌原核表达反应原性
- 布鲁菌铁转录调控因子rirA基因突变株的构建与鉴定被引量：2
- 2017年
- 为了构建牛布鲁菌S2308(简称S2308)的铁转录调控因子rirA基因突变株(S2308ΔrirA),探讨该基因对自身生长的影响以及其对不同类型细胞黏附侵袭和胞内繁殖的作用。利用同源重组和抗性替换的方法,以卡那抗性基因替换rirA基因,获得突变株S2308ΔrirA。将亲本株S2308、疫苗株RB51和突变株S2308ΔrirA在相同营养条件下培养,观察其振荡培养时的生长变化趋势和静置培养时的聚集状态。将各菌株侵染人胚胎滋养层细胞(HPT-8)和小鼠巨噬细胞(RAW264.7),分别检测其黏附侵袭能力和胞内生存能力。结果显示,成功获得了布鲁菌rirA基因突变株且10代内未发生回复性突变;与亲本株相比,S2308ΔrirA在相同体外培养条件下其生长趋势未发生明显改变,且其凝集状态与亲本株类似;黏附侵袭试验显示,S2308ΔrirA对HPT-8细胞的黏附侵袭能力显著强于亲本株,而其对RAW264.7的黏附侵袭能力在一定程度上弱于亲本株;布鲁菌胞内生存试验发现,布鲁菌侵染HPT-8细胞24h后,其胞内细菌数量显著升高,而侵染巨噬细胞24h后,S2308ΔrirA的繁殖能力明显低于亲本株。这些结果表明,铁转录调控因子rirA基因参与了布鲁菌胞内寄生的过程,并与菌株的毒力强弱存在密切联系。
- 王震王勇张倩陈创夫郭飞李天森张辉王远志刘志强
- 关键词：布鲁菌小鼠巨噬细胞
- 多肽对牛种布鲁氏菌△omp10缺失株在小鼠巨噬细胞RAW264.7内生存影响的机制研究
- ＜正＞布鲁氏菌是胞内寄生革兰氏阴性菌。它能引起人及多种动物患病,严重危害人类健康和畜牧业发展。布鲁氏菌2308△omp10缺失株为牛种布鲁氏菌2308株的缺失株,降低了毒性,因此可以作为疫苗免疫易感宿主。但是,布鲁氏菌进...
- 李天森童志霞陈创夫
- 牛病毒性腹泻病毒E2抗原表位表达及验证被引量：2
- 2016年
- [目的]获得高效表达的重组牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhoea virus,BVDV)E2免疫抗原蛋白。[方法]应用软件分析BVDV-E2蛋白抗原表位,将富含抗原表位基因片段连接表达载体p GEX-4T-1,并转化至大肠杆菌(DE3),经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot检测诱导表达蛋白,经镍柱分离纯化;以纯化蛋白为包被抗原,用间接ELISA检测抗原对免疫血清的反应性。[结果]成功克隆BVDV-E2抗原表位基因,并在大肠杆菌中高效表达,Western Blot和ELISA证实表达重组蛋白对BVDV阳性血清具有反应原性。[结论]获得大小为49.5 k Da的BVDV-E2抗原表位蛋白,并且该抗原稀释度在1:40,抗体稀释度在1:20时结合效果最佳。可用于后续的纳米抗体筛选的研究。
- 黄美玲吴鹏李天森张国奇杨霞陈创夫盛金良
- 关键词：抗原表位E2蛋白BLOT间接ELISA
- E3泛素连接酶Nrdp1对布鲁氏菌胞内生存以及布鲁氏菌所引起的细胞凋亡的影响
- 研究目的:以布鲁氏菌宿主细胞小鼠巨噬细胞E3泛素连接酶Nrdp1研究对象,构建干扰和过表达Nrdp1基因的小鼠巨噬细胞转染模型;羊种布鲁氏菌16M侵染小鼠巨噬细胞,探究其对布鲁氏菌胞内生存和布鲁氏菌诱导的巨噬细胞凋亡的影...
- 车召堂李爽王震李天森张辉陈创夫
- 布鲁氏菌VirB5基因的原核表达及生物信息学分析被引量：4
- 2016年
- [目的]获得高效表达并且抗原性较好的VirB5蛋白,并分析其生物信息学功能。[方法]以羊种布鲁氏菌16M基因组为模板扩增VirB5基因,连接表达载体p ET-32a,并转化至大肠杆菌(DE3)中表达,用SDS-PAGE和Western Blot检测其免疫学特性,采用信息生物学方法对VirB5基因编码蛋白的理化性质、结构、保守结构域进行分析。[结果]成功克隆出VirB5基因,并在大肠杆菌中成功表达,SDS-PAGE和Western Blot证实表达重组蛋白对布鲁氏菌阳性血清具有反应原性,生物信息学方法推测VirB5基因可能在胞内运输功能方面发挥重要作用。[结论]成功克隆出717bp大小的VirB5基因,并在大肠杆菌中成功表达45 k Da大小的蛋白,具有良好的抗原性,且证明VirB5蛋白与布鲁氏菌的胞内运输相关。
- 童志霞李天森张辉陈创夫
- 关键词：布鲁氏菌原核表达WESTERNBLOT生物信息学分析
- 布鲁氏菌omp25基因缺失株的构建及对细胞自噬的影响
- 布鲁氏菌病是一种危害严重的人兽共患传染病，在世界范围内有广泛流行，给人类健康和经济发展带来巨大损失。近年来，全国各地上报的患病牲畜数量有显著增加，患病的人数也有显著增多。因此，对布鲁氏菌的致病机制的研究是刻不容缓的。其宿...
- 陈瑞花李天森王震张辉盛金良王鹏雁柳建新陈创夫
- 关键词：布鲁氏菌致病机制基因缺失细胞自噬
