李崴
- 作品数：15 被引量：23H指数：3
- 供职机构：天津医科大学附属肿瘤医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市科技发展战略研究计划项目山东省高等学校科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 二硫键稳定的抗CD3/抗CD19微型双功能抗体的表达及活性测定被引量：1
- 2014年
- 构建了抗CD3/抗CD19(Diabody)微型双功能抗体,并且为增强其稳定性进一步改造为二硫键稳定的抗CD3/抗CD19(ds-Diabody)微型双功能抗体,表达并纯化后测定其生物学活性。构建二硫键稳定的抗CD3/抗CD19表达载体p AYZds CD3CD19,转化感受态大肠杆菌16C9进行原核表达,分离纯化后,经12%SDS-PAGE及Westen-blot鉴定。应用间接免疫荧光和竞争性免疫荧光结合流式细胞分析技术(FACS)检测ds-Diabody与CD19+Raji细胞和CD3+Jurkat细胞的结合活性。改造后的ds-Diabody能够在原核表达系统中进行可溶性表达,ds-Diabody在非还原性SDS-PAGE中,在45 k处可见一条带,Westen-blot在同一位置显示有带,在还原性SDSPAGE中45 k处条带消失,在28 k和26 k各有一条带,Western-blot在28 k显示有带,这些均与理论相符,45 k为二硫键稳定的二聚体,在还原剂巯基乙醇作用下二硫键断开,形成28 k和26 k的2条带。FACS检测ds-Diabody可与CD19+Raji细胞和CD3+Jurkat细胞特异结合,并能竞争性抑制单抗HIT3a和HIT19a与上述细胞的结合。说明改造后的二硫键稳定的抗CD3/抗CD19双功能抗体既能在原核系统中进行可溶性表达,同时又保留了与细胞的结合活性。
- 杨雨琪金锐高子璐岳凯李崴
- 关键词：DIABODY抗CD3二硫键药物稳定性
- 脱细胞基质补片修复下咽缺损
- 目的:咽部缺损的修复是晚期下咽癌手术成功的关键,如何选择恰当的修复方法是术后的一个难题。如缺损较小,可用咽部残余黏膜原位缝合。但由于早期症状不明显,且梨状窝的位置较深并隐匿,下咽癌具有黏膜下扩散和易于颈部淋巴结转移等特点...
- 张仑张文超李崴
- 关键词：RECONSTRUCTION
- 文献传递
- 钙调素拮抗剂O-(4-乙氧基)-丁基-小檗胺增强阿霉素杀伤MCF-7/ADR细胞的机制研究被引量：1
- 2010年
- 目的研究钙调素拮抗剂0-4-乙氧基-丁基-小檗胺(EBB)增强阿霉素诱导乳腺癌多药耐药细胞系MCF-7/ADR细胞的杀伤作用及其相关机制。方法用MTT法测定阿霉素、EBB单独及联合用药对阿霉素杀伤乳腺癌多药耐药细胞系(MCF-7/ADR)及其亲代细胞系(MCF-7)的作用的IC50值,用不同浓度EBB处理MCF-7/ADR细胞后用FACS法分析EBB对阿霉素诱导细胞凋亡及对mdr1mRNA和P-gp蛋白水平表达的影响,通过激光共聚焦显微镜观察EBB处理前后及用EBB预处理24和48h后MCF-7/ADR和MCF-7细胞内阿霉素浓度的改变。结果MTT结果显示EBB对MCF-7和MCF-7/ADR都具有抗肿瘤活性;EBB还能协同提高阿霉素的细胞毒作用,MCF-7组两药相互作用指数(CDI)值为0.73,MCF-7/ADR组CDI值为0.49,其对耐药细胞的协同作用更为明显。随EBB剂量增加,低剂量阿霉素诱导MCF-7/ADR细胞凋亡增加而且P-gp蛋白表达水平逐渐下降,细胞内阿霉素浓度逐渐提高,而且用EBB预处理MCF-7/ADR细胞24和48h后细胞内阿霉素和罗丹明浓度也逐渐提高。结论EBB是有效的肿瘤细胞化疗药物,它不但能直接抑制P-gp功能还具有下调P-gp蛋白表达的作用,从而有效逆转MCF-7/ADR细胞的耐药现象,协同增强化疗药物对耐药细胞的杀伤作用。
- 赵英新刘荣范冬梅任思楣李崴师锐赞张砚君杨铭
- 关键词：MDR1基因P-GP阿霉素共聚焦激光扫描显微镜
- 抗CD3/抗CD19微型双功能抗体的构建、表达及活性测定被引量：6
- 2010年
- 背景与目的:微型双功能抗体是基因工程抗体的一种形式,它具有两个抗原结合位点,可选择性募集效应细胞到靶细胞周围,介导特异性杀伤作用。本实验构建抗CD3/抗CD19微型双功能抗体(diabody)载体,表达纯化后测定其生物学活性。方法:用重叠PCR(overlap PCR)和PCR方法,构建抗CD3/抗CD19 diabody载体,转化感受态大肠埃希菌进行原核表达。表达产物经抗His-tag亲和层析柱分离纯化,12% SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定。应用间接免疫荧光和竞争性免疫荧光结合流式细胞分析技术(FACS)检测生物学活性。结果:基因重组质粒经测序证实序列正确。抗CD3/抗CD19 diabody能够在原核表达系统中进行可溶性表达。12% SDS-PAGE显示28×103和26×103各有一条带,Western blot在28×103显示有条带,与预期相符。表达产物经纯化定量可达5mg/L。FACS检测抗CD3/抗CD19 diabody可与CD19+ Raji细胞和CD3+ Jurkat细胞特异结合,并能竞争性抑制HIT3a和HIT19a与上述细胞的结合活性。结论:本实验成功构建了抗CD3/抗CD19 diabody,并且能够进行可溶性表达,可与CD19+ Raji细胞和CD3+ Jurkat细胞特异结合,为以后的抗体功能实验奠定了基础。
- 李崴范冬梅程昕师锐赞刘荣任思楣王敏杨铭
- 关键词：基因工程抗体双功能抗体CD3CD19
- 靶向4-1BBL和CD3双信号的协同抗肿瘤作用机制研究被引量：3
- 2010年
- 目的:探讨人4-1BBL胞外区/抗CD20融合蛋白增强抗CD3/抗CD20 diabody介导的靶向杀伤作用及其机制。方法:通过表达纯化人4-1BBL胞外区/抗CD20融合蛋白及抗CD3/抗CD20 diabody,利用台盼蓝计数观察联合应用人4-1BBL胞外区/抗CD20融合蛋白及抗CD3/抗CD20 diabody对淋巴细胞增殖的影响;采用ELISA检测白介素-2(IL-2)水平。RT-PCR检测穿孔素和颗粒酶mRNA的表达。Calcein检测其联合应用抗CD3/抗CD20双功能抗体及PBL对靶细胞Raji细胞的杀伤作用。结果:人4-1BBL胞外区/抗CD20融合蛋白增强抗CD3/抗CD20 diabody对靶细胞Raji细胞的杀伤作用,其机制可能是促进淋巴细胞增殖,减少细胞死亡,促进IL-2分泌及上调穿孔素和颗粒酶mRNA表达。结论:人4-1BBL胞外区/抗CD20融合蛋白与抗CD3/抗CD20diabody联合应用,分别靶向4-1BBL和CD3双信号发挥协同抗肿瘤作用,为肿瘤免疫治疗提供了新的思路。
- 姜文国张树平刘荣李崴张研君邵晓枫王金宏
- 关键词：CD20
- 诺维苯及顺铂治疗中晚期食管癌的临床观察被引量：3
- 2005年
- 刘向明屈大望赵锡江张熙曾石洋钱碧云李崴
- 关键词：中晚期食管癌诺维苯以手术为主白细胞下降长春花碱多疗程
- 双功能抗体抗CD3/抗CD19联合阿糖胞苷对B-ALL的治疗作用的研究
- <正>目的急性淋巴细胞白血病(ALL)是一组异质性疾病,其中主要类型为B系淋巴细胞白血病(B-ALL),占85%左右。双功能抗体抗CD3/抗CD19(diabody)是基于肿瘤免疫治疗的新型抗体药物,能同时结合T淋巴细胞...
- 李真真范冬梅杨铭李崴熊冬生
- 文献传递
- 双功能抗体联合阿糖胞苷介导T细胞对白血病细胞系Nalm-6的细胞毒作用
- 2014年
- 目的研究阿糖胞苷(Cytosine arabinoside,Ara-C)对人白血病细胞系Nalm-6共刺激分子CD80(B7-1)和CD86(B7-2)表达的影响,以及联合双功能抗体介导T细胞对Nalm-6体外杀伤作用。方法 MTT法测定Ara-C对Nalm-6细胞的细胞毒作用,FACS测定一定浓度阿糖胞苷作用Nalm-6细胞后CD80和CD86的表达变化,利用非放射性荧光法测定双功能抗体体外介导T细胞对靶细胞的杀伤效果,FACS和ELISA法分别测定活化的T细胞表达CD25、CD69和分泌IL-2的变化。结果 Ara-C作用Nalm-6细胞的IC10为0.25μM,Nalm-6细胞经Ara-C刺激后CD80的表达明显高于对照组,在一定的效靶比范围内,随着效靶比的升高,双功能抗体介导T淋巴细胞对Nalm-6细胞的杀伤率也随之提高,联合Ara-C后效果最显著。T细胞活化的表面标记CD25、CD69表达显著上调,IL-2的释放较对照组明显升高。结论 Ara-C可上调人白血病细胞系Nalm-6 CD80的表达,从而增强双功能抗体介导的T细胞对靶细胞的体外杀伤作用,更有效地活化T细胞。
- 李崴王东高子璐金锐
- 关键词：阿糖胞苷白血病双功能抗体B7分子T淋巴细胞
- 二硫键稳定的抗CD3-抗CD19微型双功能抗体及其制备方法
- 本发明涉及二硫键稳定的抗CD3-抗CD19微型双功能抗体及其制备方法，以抗CD3-抗CD19抗体为基础，在抗CD3V<Sub>L</Sub>第100位氨基酸Ser和抗CD3V<Sub>H</Sub>第44位氨基酸Gly引...
- 杨纯正熊冬生李崴任思楣程昕师锐赞刘荣
- 文献传递
- 双功能抗体抗CD3／抗CD19介导T细胞对靶细胞的杀伤作用被引量：3
- 2011年
- 背景与目的:双功能抗体有2个抗原结合臂,一方面具有肿瘤相关抗原,另一方面具有和免疫效应细胞表面分子标记结合的能力,并能有效地使效应细胞靶向杀灭肿瘤细胞的作用。本实验探讨抗CD3/抗CD19双功能抗体介导T细胞杀伤靶细胞的作用。方法:利用非放射性荧光染料Calcein-AM进行抗体介导的体外特异性杀伤活性检测,Ficoll-Hypaque法分离外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocyte,PBL),流式细胞术从中分选T淋巴细胞及CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞作为效应细胞。首先以Raji细胞为靶细胞,按不同效靶比,不同抗体浓度分组,以PBS、抗CD3scFv+、抗CD3scFv抗体及非相关抗体抗CD3/抗PGP为对照,另设CD19-K562细胞为非相关靶细胞组,比较双功能抗体介导特异性体外杀伤活性。取上述杀伤实验效靶比25∶1,抗体浓度500 ng/mL各组,ELISA法比较激活的T细胞分泌IL-2的量,Real-time PCR法检测T细胞因子IL-3、IFN-γ、TNF-α激活后的表达变化。结果:体外介导T细胞杀伤靶细胞Raji的效果比对照组明显增强(P<0.05),激活T细胞分泌IL-2、IL-3、IFN-γ及TNF-α的表达均明显高于对照组。结论:双功能抗体抗CD3/抗CD19在体外介导T细胞对靶细胞具有较强的杀伤作用。
- 范冬梅李崴杨铭赵英新许元富陈礼平王敏
- 关键词：双功能抗体CD3CD19
