李辉
- 作品数：60 被引量：182H指数：6
- 供职机构：中国农业科学院更多>>
- 发文基金：广西科技计划项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项中国农业科学院兰州兽医研究所所长基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生理学更多>>
- 猪囊尾蚴API基因原核表达条件的优化被引量：1
- 2017年
- 【目的】获得猪囊尾蚴凋亡蛋白酶抑制剂(API)基因在大肠杆菌中的最佳表达条件,为API功能研究奠定基础。【方法】以表达载体pEGX-4T-1、pET-30a及猪囊尾蚴API基因的原核表达载体pEGX-4T-1/API-Flag、pET-30a/API为材料,对影响API蛋白表达的载体(pEGX-4T-1、pET-30a)、温度(25,30,37℃)、诱导时间(2,4,6,8h)、IPTG终浓度(0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mmol/L)和卡那霉素终浓度(100,200,300,400mmol/L)等条件进行优化,筛选重组蛋白最佳的表达条件。对在最佳条件下获取的目的蛋白进行超声处理,4℃、10 000r/min离心分别收集上清液和沉淀,对目的蛋白进行可溶性分析;SDS-PAGE后,将目的蛋白条带转印至硝酸纤维素膜上,与抗His标签抗体共孵育,检测目的蛋白的反应原性。【结果】当选择pET系列载体(pET-30a)时,API表达量高于其在pGEX系列(pGEX-4T-1)中的表达量。API融合蛋白最佳表达条件为:在含200mmol/L卡那霉素的LB培养基上于37℃培养3h后,加入终浓度为0.4mmol/L的IPTG,再于30℃诱导培养6h。SDS-PAGE结果表明,pET-30a/API融合蛋白分子质量约为53ku,与预期蛋白分子质量一致。Western-blot检测结果显示,重组蛋白pET-30a/API能够识别特异性抗体,显示获得了大量表达正确的目的蛋白。【结论】确定了API基因的最佳表达条件,获得了较大表达量的API融合蛋白。
- 苏文强胡鑫宇王秋霞欧长波郭爱疆李辉骆学农余燕张艳红姜金庆刘兴友马金友王松才学鹏
- 关键词：猪囊尾蚴原核表达
- 绵羊痘病毒甘肃流行株糖蛋白基因orf118的克隆及序列分析被引量：5
- 2008年
- 从甘肃景泰疑似羊痘患病绵羊的皮肤组织中提取基因组DNA,利用PCR技术,克隆糖蛋白orf118基因.比较分析表明,该基因由516个核苷酸组成,编码171个氨基酸,相对分子质量为19500,其碱基组成极不平衡,其中A+T含量占72.48%,G+C含量仅占27.52%.甘肃景泰株orf118基因同绵羊痘病毒TU-V02127株之间的核苷酸同源性最高达99.8%,氨基酸的同源性为100%;与疙瘩皮肤病病毒肯尼亚株和山羊痘病毒G20-LKV株之间的同源性分别为96.5%和94.8%.结构预测结果显示,orf118蛋白为分泌蛋白,具有2个N键连结糖基化位点和1个跨膜区.以上结果表明,orf118蛋白在不同的绵羊痘病毒流行株之间非常保守,具有潜在的疫苗和诊断价值.
- 张冬峰郑亚东骆学农王晓霞陈轶霞李辉侯俊玲潘晓梅刘琼景志忠岳城才学鹏
- 关键词：绵羊痘病毒糖蛋白PCR
- 意大利地中海奶水牛引种观察初报被引量：1
- 2018年
- 为加快我国南方河流型水牛品种改良,提高我国河流型水牛的乳用和肉用性能,从意大利引进1~2岁高产意大利地中海奶水牛59头,其中公水牛10头,母水牛49头,进行近3年的适应性观察和生产性能测定。结果表明:引进地中海奶水牛成年公牛体重平均为814.1 kg,母水牛体重平均为601.8 kg。公牛采精平均精子密度为12.25亿/m L,平均精子活力为0.54;母牛人工授精平均情期受胎率35.16%,平均初产日龄为1 299.8 d,平均怀孕天数为310.44 d;泌乳期平均产奶量为2 011.3 kg,优秀个体第1胎泌乳300 d,产奶量达到2 818.3 kg。由此表明,引进的地中海水牛很好地适应了我国南方的亚热带气侯环境,各项生产性能和指标与引进地基本相同,应加快推广应用。
- 李辉陈明棠刘超谭正准黄健李忠权赵宏涛石德顺刘庆友
- 褪黑素受体1A基因多态性与水牛繁殖性能的关联分析
- 2022年
- 为了探讨褪黑素受体1A(MTNR1A)基因多态性对水牛繁殖性能的影响,试验以86头摩拉水牛经产牛为研究对象,采用PCR方法扩增其MTNR1A基因外显子Ⅱ序列,测序后分析该序列的多态性位点;记录86头摩拉水牛经产牛在2019年1月份—2020年12月份期间的怀孕和产犊情况,分析MTNR1A基因外显子Ⅱ的多态性与繁殖性能间的关系。结果表明:成功克隆到MTNR1A基因外显子Ⅱ,测序发现其第72位碱基处存在C>T单核苷酸多态性(SNP)位点,该位点有3种基因型,即CC、CT和TT基因型;C和T等位基因频率分别为0.47和0.53,CC、CT、TT基因型频率分别为0.37,0.30,0.33。CC和CT基因型摩拉水牛在2019年1月份和8—12月份时的怀孕数量均高于2019年2—7月份,TT基因型水牛在2019年2—7月份时的怀孕数量高于2019年1月份和8—12月份。摩拉水牛产犊季节主要集中在2020年1月份及9—12月份,经计算产犊数量占总产犊数的56.98%;2020年2—8月份是摩拉水牛产犊的淡季,经计算产犊数量仅占全年产犊总数的43.02%。CC和CT基因型的摩拉水牛产犊时间主要集中在2020年1月份和8—12月份,TT基因型水牛的产犊时间则变化不大。说明MTNR1A基因外显子Ⅱ第72位碱基处存在C>T SNP位点,可以作为一种基因标记,加速水牛良种选育进程。
- 鄢胜飞曾令湖于农淇李厅厅黄健谭正准李辉梁莎莎卢瑛黄加祥覃广胜
- 关键词：摩拉水牛等位基因繁殖性能基因型外显子
- 水牛流行性血尿病诊断与治疗
- 2021年
- 流行性血尿病又被称为焦虫病及血孢子原虫病,水牛一旦患上此病,其生命健康将受到严重威胁,同时还会波及养殖安全。该文针对水牛流行性血尿病的诊断与预防措施进行分析,为相关养殖场(户)提供参考。
- 黄健谭正准李辉覃广胜曾令湖卢瑛于农淇梁莎莎
- 关键词：水牛预防措施
- 一种CpGDNA新型佐剂及其制造方法和含有该佐剂的疫苗
- 本发明涉及一种CpG DNA新型佐剂。具体地，本发明提供了一种包含SEQ ID NO：1的CpG基序序列，其是安全、高效、廉价的DNA分子新型佐剂，特别可用于猪疫病疫苗。本发明也提供了生产所述CpGDNA新型佐剂的具体方...
- 景志忠才学鹏蒙学莲王佩雅窦永喜骆学农李辉郑亚东
- 文献传递
- 一种CpG DNA新型佐剂及其制造方法和含有该佐剂的疫苗
- 本发明涉及一种CpG DNA新型佐剂。具体地，本发明提供了一种包含SEQ ID NO：1的CpG基序序列，其是安全、高效、廉价的DNA分子新型佐剂，特别可用于猪疫病疫苗。本发明也提供了生产所述CpG DNA新型佐剂的具体...
- 景志忠才学鹏蒙学莲王佩雅窦永喜骆学农李辉郑亚东
- 文献传递
- 绵羊痘病毒甘肃流行株糖蛋白基因ORF117的克隆及其原核表达被引量：7
- 2009年
- 以甘肃景泰疑似羊痘(SP)患病绵羊的皮肤组织中提取的总DNA为模板,经PCR扩增获得SP病毒(SPV)ORF117基因。测序后分析表明,该基因由591个核苷酸组成,编码196个氨基酸;将该基因克隆于pET32载体中,构建重组表达质粒pET-ORF117,用IPTG在不同条件下诱导表达,确定其最佳表达条件。SDS-PAGE电泳分析表明,表达的融合蛋白分子质量为42 ku,主要以包涵体的形式存在。在IPTG浓度为0.1 mM、温度为37℃、诱导6 h时表达量最大,约占菌体蛋白的30%。Western blot试验表明,融合蛋白可被羊痘阳性血清识别,这为研究其在新型疫苗和诊断的研究奠定了基础。
- 王晓霞郑亚东骆学农陈轶霞李辉侯俊玲于三科才学鹏
- 关键词：绵羊痘病毒克隆原核表达
- 代谢组学在奶牛上的应用研究进展
- 2022年
- 奶牛代谢产物的变化可以直接反映其体内各种生命活动的变化,利用代谢组学技术能够清晰并且直观地表征奶牛在不同生理状态下的全局代谢变化。代谢组学自2008年首次应用于奶牛后,其在奶牛的生殖生理研究、营养生理学研究、胴体品质和牛奶质量、预测饲料效率、疾病检测的生物标记开发等方面的文献不断出现。本文通过综述代谢组学在奶牛疾病、营养、繁殖育种和生产管理几个方面的应用,旨在为进一步利用代谢组学开展奶牛的重要经济性状基础研究提供参考。
- 李厅厅程隽如曾令湖于农淇鄢胜飞梁莎莎朱远致黄健谭正准李辉卢瑛覃广胜
- 关键词：代谢组学生物标记物奶牛
- 蛋白水平与来源对早期断奶犊牛消化代谢及胃肠道结构的影响
- 本文以早期断奶犊牛为对象，较全面地研究了日粮蛋白水平与来源、赖氨酸水平对犊牛生长性能、消化代谢、血清生化指标、胃肠道器官及组织形态发育的影响，具体内容分以下五个部分：
试验一、断奶日龄对犊牛早期断奶效果的影响研...
- 李辉
- 关键词：蛋白水平
- 文献传递
