林大伟
- 作品数：8 被引量：14H指数：2
- 供职机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 羟基脲对不同p53状态肝癌细胞中GADD45β的诱导差异及调控机制被引量：2
- 2011年
- 目的探讨羟基脲对不同p53状态肝癌细胞的GADD45β诱导差异及可能调控机制。方法转染p53全序列建立Hep3B＋p53；体外合成GADD4513近端启动子序列群（-618～-314），构建荧光素表达质粒，转染肝癌细胞株HepG2、Hep3B和Hep3B＋p53；以实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）比较羟基脲对GADD4513表达诱导及其近端启动子活性影响差异；比较对DNA合成和细胞克隆形成能力抑制差异；通过Caspase-3的表达变化测定凋亡的发生和发展。结果羟基脲对Hep3B中GADD45诱导并不明显，转染p53全基因序列后，Hep3B＋p53对羟基脲的敏感性明显增加，并呈现出剂量-效应的正相关。荧光素分析提示羟基脲作用Hep3B＋p53后的启动子核转录因子（NF）-κB（-618／＋6）和E2F-1（-470／＋6）活性较Hep3B明显增强约1．1倍和0．8倍。羟基脲能够更加明显地抑制Hep3B＋p53的DNA合成能力和细胞克隆形成能力，10mmol／L羟基脲对Hep3B＋p53DNA合成抑制率达到37．15％，对细胞克隆形成能力的抑制率达85．29％，与Hep3B比较差异有统计学意义（P〈0．05）。羟基脲作用后Hep3B＋p53的Caspase-3能够迅速地启动凋亡的发生和发展。结论p53对核糖核苷酸还原酶抑制性化疗药物对肝癌细胞的GADD45诱导起重要作用，增强转录调节因子的表达水平是其可能的作用机制。
- 王佳玉杨卫平林大伟衣琳施敏敏邱伟华
- 关键词：羟基脲P53启动子
- Triapine对肝癌细胞株HepG2中GADD45β表达影响及其可能机制被引量：1
- 2011年
- 目的:DNA损伤修复相关基因GADD45β的特异性表达缺失与肝癌的恶性程度密切相关,本研究初步明确肝癌细胞中GADD45β近端启动子序列,探索3-氨基吡啶-2-甲醛硫代缩氨基脲(Triapine)对人肝癌细胞株HepG2的GADD45β表达影响及其可能机制。方法:体外合成GADD45β近端启动子序列(-618至-314),构建荧光素表达质粒,转染HepG2,根据启动子活性强度结合数据库分析存在的转录调节因子结合位点;以实时荧光定量PCR比较Triapine作用前后HepG2细胞GADD45β表达;进一步比较Triapine对GADD45β启动子活性的调控作用,分析Triapine对HepG2的抑制效应;并通过Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3的表达变化测定凋亡的发生和发展。结果:GADD45β近端启动子中含有3个NF-κB(-602/-593、-581/-572、-537/-528)和1个E2F-1(-470/-436)转录调节因子与启动子结合位点;2.5μmol/L和5μmol/L的Triapine作用后,GADD45β/GAPDH分别为0.029 3和0.073 9,呈现剂量-诱导效应正相关,同时NF-κB和E2F-1启动子活性分别增强了1.5和0.8倍;高剂量Triapine对HepG2的DNA合成能力和细胞克隆形成能力的抑制率分别为75.25%和60.54%,呈现剂量-抑制效应正相关;Triapine作用后6 h即出现HepG2凋亡高峰。结论:Triapine能通过增强转录调节因子的活性,诱导肝癌细胞中特异性缺失的GADD45β基因表达;进而抑制肝癌细胞的增殖并启动凋亡途径。
- 王佳玉杨卫平林大伟衣琳李军汪洋覃胜灵施敏敏沈柏用彭承宏邱伟华
- 关键词：肝癌GADD45Β启动子
- S腺苷蛋氨酸与氯喹联合应用对肝癌细胞急性缺血／缺氧过程中生物学特性的影响被引量：3
- 2013年
- 目的研究S腺苷蛋氨酸（SAMe）对急性缺血／缺氧过程中肝癌细胞HepG2生物学特性的作用，并通过应用氯喹（CQ）抑制自噬探讨其可能机制。方法用实时PCR检测自噬特异性基因（Beclin1）表达的变化。吖啶橙染色后，采用荧光显微镜对自噬进行定性观察。CCK8法检测HepG2细胞生存率。Westernblot检测蛋白LC3的变化。用AnnexinV／PI流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。结果缺血／缺氧可以促进HepG2细胞生长，细胞生存率比空白对照组增加了20％～30％。sAMe可诱导HepG2细胞自噬的表达，自噬在荧光强度和Beclin1基因水平分别比空白对照组增强约3．2倍和3．5倍。SAMe对HepG2细胞具有显著的抑制作用，这种抑制作用在缺血／缺氧环境中更加明显。经SAMe处理后，正常和缺血／缺氧环境的细胞生存率与空白对照组相比分别下降了30％和70％。与空白对照组相比，细胞经SAMe处理后，凋亡比例增加约24％。细胞经SAMe预处理，再进行缺血缺氧后，凋亡比例增加约40％。抑制自噬后，细胞生存率下降15％～30％，细胞凋亡增加7％～16％。结论在SAMe抑制HepG2细胞生长过程中，自噬对细胞有一定的保护作用。
- 佟辉杨卫平林大伟施敏敏沈柏用彭承宏李宏为邱伟华
- 关键词：肝癌自噬氯喹
- 胰腺癌增生分化及凋亡相关蛋白互作动态网络特征分析被引量：1
- 2015年
- 目的 利用生物信息学技术查找与建立胰腺癌相关基因、单核苷酸多态性（SNP）、微小RNA（miRNA）、蛋白质调控网络以及蛋白通路（pathway）功能注释等信息数据,并建立胰腺癌增生分化及凋亡相关蛋白互作动态网络.方法 通过文本挖掘技术和已有胰腺癌数据库（PC-GDB、Ensembl）进行数据收集和整理,然后利用倍数变化（FC）方法对高通量基因表达数据库（GEO）中胰腺癌相关基因表达谱芯片进行分析,计算正常组和疾病组的差异表达基因,得到和胰腺癌相关的数据信息.进一步将GEO数据库中获取的3组基因表达谱芯片（编号：GSE22780、GSE22973、GSE14245）筛选后,将基因芯片分为2组（正常组、胰腺癌组）,利用FC方法得到胰腺癌的异常表达基因集,再将得到的基因集投射到蛋白质相互作用关系,得到相应的蛋白质网络,并取其中相对独立、相互作用较为集中且与增生分化及凋亡密切相关的子网络进行功能注释富集分析.结果 GEO数据库中得到差异基因有1 766个,PC-GDB和Ensembl数据库中潜在与胰腺癌相关基因1 173个,胰腺癌相关miRNA共140个,疾病相关SNPs共501个.建立了胰腺癌发生发展过程中的蛋白质相互作用动态网络,并分析其中主要发挥调节增生、诱导分化及凋亡作用的子网络.结论 利用文本挖掘及生物信息学技术收集了胰腺癌相关基因和蛋白数据,并建立了胰腺癌增生分化及凋亡相关蛋白互作动态网络,该网络可为后续针对胰腺癌的研究提供线索和支持,尤其可用于寻找胰腺癌的诊治靶点.
- 林大伟马丁杨卫平沈柏用彭承宏邱伟华
- 关键词：基因芯片蛋白质网络胰腺癌
- 生物信息学在胰腺癌中的应用被引量：1
- 2014年
- 胰腺癌的发病率不断升高,早期诊断困难,临床治疗效果差,是目前预后最差的恶性肿瘤之一。利用生物信息学技术能够查找或建立胰腺癌相关的基因、单核苷酸多态性(SNP)、miRNA、蛋白质调控网络及通路功能注释等信息数据,促进胰腺癌的早期诊断,这是提高胰腺癌临床诊疗水平的主要途径。此文就生物信息学在临床疾病尤其是胰腺癌中的应用研究进展作一综述。
- 林大伟邱伟华
- 关键词：生物信息学数据库转录组学基因组学蛋白质组学胰腺癌
- 以EP300为中心的胰腺癌相关蛋白质相互作用网络特征分析被引量：2
- 2015年
- 目的 :查找生物信息平台的胰腺癌相关基因、蛋白质调控网络以及生物通道功能注释信息数据,建立胰腺癌转移相关蛋白质相互作用网络。方法:筛选GEO数据库中获取的3组基因表达谱芯片(编号GSE22780、GSE22973、GSE14245),分为正常组和胰腺癌组,利用倍数变化分析得到胰腺癌阶段的差异表达基因集,再将基因集投射到蛋白质相互作用数据,得到相应的蛋白质网络,取相对独立、相互作用较集中且与转移密切相关的蛋白质子网络进行功能富集分析。结果:建立胰腺癌发生发展过程中的蛋白质相互作用网络,分析与转移密切相关的蛋白质子网络,得到以EP300为中心的胰腺癌相关蛋白质相互作用网络。结论:本研究利用生物信息平台的胰腺癌相关基因和蛋白质数据,建立以EP300为中心的胰腺癌相关蛋白质相互作用网络,为胰腺癌研究提供信息,可用于寻找胰腺癌的诊治靶点。
- 马丁林大伟杨卫平程兮汪炳瑞沈柏用彭承宏邱伟华
- 关键词：生物信息学数据库蛋白质组学肿瘤转移胰腺癌
- S腺苷甲硫氨酸对肝癌细胞急性缺血/缺氧过程中的生物学作用
- 2013年
- 目的:研究S腺苷甲硫氨酸(SAMe)在急性缺血/缺氧过程中对肝癌细胞HepG2的生物学作用,并通过检测自噬的变化探讨其可能机制。方法:real time-PCR检测自噬特异性基因(Beclin 1)表达的变化;吖啶橙染色后,采用荧光显微镜定性观察自噬;CCK-8法检测HepG2细胞的成活率;用AnnexinⅤ/PI流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。结果:SAMe可诱导HepG2细胞的自噬,在单纯缺血和缺血/缺氧处理因素下,HepG2自噬在荧光强度和Beclin 1基因水平分别比空白对照组增强约3.2倍和3.5倍。细胞成活率分别比空白对照组增加了约20%和30%。SAMe对HepG2细胞具有显著的抑制作用,这种抑制作用在缺血/缺氧环境中更加明显,SAMe单独处理组和SAMe预处理结合缺血/缺氧组,其细胞成活率与空白对照组相比分别下降了约30%和70%。随着细胞成活率下降,细胞凋亡比例相应增加,与空白对照组相比,细胞经SAMe处理后凋亡比例增加约18%;细胞经SAMe预处理后再予以缺血/缺氧,凋亡比例增加约30%。结论:在SAMe抑制HepG2细胞生长过程中,自噬起着重要作用。
- 佟辉杨卫平林大伟施敏敏沈柏用彭承宏李宏为邱伟华
- 关键词：肝癌自噬
- 奥沙利铂对不同p53状态肝癌细胞中DNA损伤修复基因GADD45β的诱导差异及调控机制被引量：5
- 2012年
- 目的探索奥沙利铂对不同p53状态肝癌细胞的DNA损伤修复基因（GADD45β）诱导差异及可能调控机制。方法转染p53全序列建立Hep3B如”。体外合成GADD451]近端启动子序列群（-618至-314），构建荧光素表达质粒，转染肝癌细胞株HepG2、Hep3B和Hep3B＋p53。以实时荧光定量PCR比较奥沙利铂对GADD4β表达诱导及其近端启动子活性影响差异；比较对DNA合成和细胞克隆形成能力抑制差异；通过Caspase-3的表达变化测定凋亡的发生和发展。结果奥沙利铂对Hep3B中GADD45β诱导并不明显。转染p53全基因序列后，Hep3B＋p53对奥沙利铂的敏感性明显增加，并呈现出剂量-效应的正相关关系。荧光素分析提示奥沙利铂作用Hep3B＋p53后的启动子NF-κB（-618／＋6）和E2F-1（-470／＋6）活性较Hep3B明显增强约1．5倍和0．8倍。奥沙利铂能够更加明显地抑制Hep3B邯”的DNA合成能力和细胞克隆形成能力，100μmol／L奥沙利铂作用后Hep3B＋p53 DNA合成率为30．41％，对细胞克隆形成能力的抑制率则达到75．60％，与Hep3B相比差异显著。奥沙利铂作用后Hep3B＋p54的Caspase-3能够迅速地启动凋亡的发生和发展。结论p53对铂类化疗药物对肝癌细胞的GADD45β诱导具有重要作用，增强转录调节因子的表达水平是其可能的作用机制。
- 王佳玉杨卫平林大伟衣琳李军施敏敏沈柏用彭承宏邱伟华
- 关键词：肝癌奥沙利铂DNA损伤修复基因肿瘤抑制基因P53
