查宏贤
- 作品数：5 被引量：21H指数：2
- 供职机构：苏州大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家现代农业产业技术体系建设项目公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂4(serpin-4)的基因克隆、原核表达和多克隆抗体制备被引量：15
- 2011年
- 丝氨酸蛋白酶抑制剂4(serpin-4)为丝氨酸蛋白酶抑制剂家族中的一员。本研究旨在研制高效价的家蚕Bombyxmoriserpin-4多克隆抗体,为深入研究serpin-4基因的生理功能打下物质基础。首先于家蚕脂肪体中克隆了serpin-4基因,利用基因重组技术构建了pET28a-serpin-4原核表达载体,经IPTG诱导,获得原核表达重组融合蛋白,利用镍柱回收纯化技术,获得目的蛋白;经SDS-PAGE和抗His多抗检测,纯化蛋白的分子量大小与预测的一致,即获得了高纯度的目的蛋白,以此蛋白为免疫抗原,采用4次免疫方式对昆明小鼠进行抗原免疫,最终获得抗serpin-4的多克隆抗体血清;该血清经ELISA和Westernblot验证,效价达到1:20000,特异性较好。家蚕serpin-4多克隆抗体的成功制备,一方面表明应用于其他生物的多克隆抗体制备所采用的方法对于家蚕serpin基因的研究同样适用;另一方面,也为深入研究家蚕serpin-4的生理功能打下了物质基础。
- 查宏贤刘罡张晨王彦云卫正国李兵陈玉华许雅香沈卫德
- 关键词：家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂基因克隆原核表达多克隆抗体
- 家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂基因serpin-6在不同发育时期的表达分析被引量：4
- 2010年
- 丝氨酸蛋白酶抑制剂(serpin)是一类具有重要生理调控功能的蛋白酶超家族。为研究家蚕serpin-6基因(Bmserpin-6)在蚕体内的功能,利用半定量RT-PCR方法,分析该基因mRNA在家蚕不同发育时期的转录水平。Bmserpin-6基因在家蚕各个发育阶段均有表达,在4龄眠期、5龄6d、吐丝48h(化蛹前)和化蛹6d的转录水平较高,在5龄4d、吐丝初期和蛹末期的转录水平较低。Bmserpin-6基因在5龄期家蚕精巢和卵巢中的表达均呈现先下降后上升的趋势。研究结果表明,Bmserpin-6基因mRNA的转录具有明显的时空特异性,推测其在家蚕不同的变态发育期执行不同的功能。
- 俞燕芳查宏贤王彦云卫正国李兵陈玉华许雅香沈卫德
- 关键词：家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂基因转录变态发育
- 家蚕追寄蝇线粒体DNA细胞色素b基因及其侧翼tRNA基因的克隆与序列结构和进化分析被引量：1
- 2010年
- 家蚕追寄蝇(Exorista sorbillans)为双翅目、寄蝇科、追寄蝇属昆虫,寄生家蚕后引起多化性蚕蛆病。研究家蚕追寄蝇的系统进化关系,有助于探讨其寄生机制。采用PCR技术扩增了家蚕追寄蝇的线粒体DNA(mtDNA)片段,序列分析结果表明:克隆的mtDNA片段大小约1.5 kb,包括完整细胞色素b基因(cyto b)及其侧翼tRNA-Leu基因序列,序列结构与其它21个昆虫物种的同源片段序列结构基本一致,说明线粒体DNA基因排列和基因结构的保守性;家蚕追寄蝇mtDNA的Cyto b蛋白和tRNA-Leu基因的二级结构符合功能大分子的空间结构特征,维持一定的保守进化;双翅目昆虫不同蝇类mtDNA中的cyto b基因、tRNA-Leu基因序列的同源性高,可保证构建蝇类系统发生树的准确性。基于包括家蚕追寄蝇在内的12个双翅目昆虫、5个鳞翅目昆虫、4个鞘翅目昆虫、1个直翅目昆虫的mtDNA cyto b基因编码氨基酸序列的进化分析表明:双翅目中蝇类的进化次序依次为狂蝇科、果蝇科、寄蝇科、蝇科、丽蝇科,寄蝇科与蝇科和果蝇科之间的进化距离较近;鳞翅目处于种系发生树分叉的起点,起源最早,双翅目处于种系发生树分叉的最末端,起源最晚。
- 邵远军李兵彭广大胡显琼查宏贤赵建欣王永州沈卫德李瑞
- 关键词：线粒体DNA细胞色素B基因TRNA基因系统进化
- 家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂Serpin4的基因克隆、表达及多克隆抗体制备
- 本研究以家蚕(大造)为材料,以家蚕脂肪体cDNA为模板克隆家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂(serpin4)基因；用脂多糖(LPS)刺激5龄3天家蚕后分时间段取其血淋巴和脂肪体,再以其cDNA为模板做荧光定量PCR分析。采用大肠杆...
- 查宏贤
- 关键词：家蚕克隆原核表达多克隆抗体
- 文献传递
- 重组杆状病毒杀虫剂的研究进展
- 2009年
- 综述了以提高杀虫速度为目的的重组杆状病毒的构建方法,对重组病毒杀虫剂的应用效果、安全性以及病毒杀虫剂生产中存在的问题进行了总结,并展望了重组杆状病毒杀虫剂今后的发展方向。
- 俞燕芳李兵查宏贤王文兵许雅香沈卫德
- 关键词：杆状病毒重组杆状病毒杀虫剂生物防治
