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重组细胞色素酶P450 3A4表达和鉴定被引量：1: 2012年; 细胞色素酶P450是代谢内源性物质和外源性物质的重要的酶,在药物治疗和药物开发领域以及了解潜在的毒性物质和致癌性物质的代谢机制起决定性作用。旨在构建细胞色素酶P450 3A4的表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化得到CYP3A4蛋白。用逆转录-聚合酶链反应方法从人肝脏总RNA中得到CYP3A4的cDNA,然后直接插入pMD20-T Vector中,将测序正确的N-末端和C-末端进行修饰。然后利用双酶切插入到表达载体pET-28a-c(+)Vectors,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中表达。并通过定点突变的方法获得CYP3A4亚型P467S(CYP3A4*19)。采用SPSS13.0设计4因素2水平正交实验,对α-ALA(0.5 mmol/L和1 mmol/L)、IPTG(0.5 mmol/L和1 mmol/L)、卡那霉素(50μg/mL和100μg/mL)添加浓度及菌的接种密度(接种1%和接种2%)进行优化。并用SPSS13.0对结果进行分析,选择出比较好的组合进行下一步的大规模的诱导表达。经定点突变的方法成功获得了CYP3A4*19亚型。经IPTG诱导获得CYP3A4蛋白,并通过Western blot验证。用BCA蛋白浓度定量分析试剂盒测定的膜蛋白浓度在65μg/mL左右,α-ALA、抗生素(卡那霉素)、T7启动子诱导剂IPTG及接种密度高低两水平中对膜蛋白的表达水平的影响没有统计学意义。; 柳艾姣石磊方方赵树进; 关键词：纯化

大肠杆菌内表达重组人源细胞色素酶P450: 本文将从表达重组P450s的宿主细胞及表达质粒、N-末端修饰、培养宿主温度与周期、分子伴侣共表达和纯化重组细胞色素酶P450s方法等方面对用E.coli表达人源P450s的近期进展进行综述.得出：细胞色素酶P450，能够...; 柳艾姣石磊关慧詹同运赵树进; 关键词：大肠杆菌分子伴侣温度效应; 文献传递

重组细胞色素酶P450 3A4、表达和鉴定: 目的：旨在构建细胞色素酶P450 3A4的表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化得到CYP3A4蛋白。方法：用逆转录-聚合酶链反应方法从人肝脏总RNA中得到CYP3A4的cDNA,然后直接插入pMD(R)20-T Vector...; 柳艾姣石磊方方赵树进; 关键词：药物相互作用基因鉴定; 文献传递

重组人CYP3A4大肠杆菌表达系统的建立: 细胞色素酶P450/(CYP/)是含有血红素的一族单加氧酶,主要参与代谢内源物质/(如甾体、胆汁酸、脂肪酸、前列腺素、花生四烯酸、生物源性氨类等/)和外源性物质的代谢。细胞色素酶能够催化生物界各种外源物质的氧化代谢,包括...; 柳艾姣; 关键词：大肠杆菌; 文献传递

大肠杆菌内表达重组人源细胞色素酶P450: 细胞色素酶P450是代谢内源性物质和外源性物质的重要的酶,在药物治疗和药物开发领域以及了解潜在的毒性物质和致癌性物质的代谢机制起决定性作用。大肠杆菌(E.coli)是表达重组人源细胞素酶P450应用最广泛的宿主。自从19...; 柳艾姣石磊关慧詹同运赵树进; 关键词：分子伴侣温度效应大肠杆菌; 文献传递

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柳艾姣