毛亮
- 作品数：52 被引量：46H指数：4
- 供职机构：教育部更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省科技支撑计划四川省应用基础研究计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 可诱导稳定表达大电导钙激活钾通道的细胞系构建及蛋白质纯化
- 2017年
- 目的:旨在构建稳定表达人大电导钙激活钾通道(BK_(Ca))的稳定细胞系并对重组蛋白分离纯化。方法:利用基因工程技术将人肠系膜动脉平滑肌BK_(Ca)编码基因克隆到表达载体pcDNA5/FRT/TO/FLAG,并转染Flp-InTMT-RExTM-293宿主细胞,用潮霉素B筛选建立稳定表达的单克隆细胞系。BK_(Ca)-pcDNA5-293细胞系经四环素诱导后,用anti-FLAG抗体对表达的BK_(Ca)蛋白质进行纯化。用western blot检测BK_(Ca)通道蛋白质的表达,用单通道膜片钳检测通道的电生理特性。结果:BK_(Ca)-pcDNA5-293细胞系经四环素诱导后表达了高水平的BK_(Ca)-FLAG融合蛋白,BK_(Ca)通道电导值为213.39±9.52pS(n=15,cell-attached)和225.72±10.61pS(n=13,inside-out),BK_(Ca)通道具有典型的大电导特性、电压依赖性、Ca2+依赖性及IbTX敏感性,与在体的人肠系膜动脉平滑肌BK_(Ca)通道具有相同的特征。纯化后的BK_(Ca)蛋白质条带单一,纯度约为89%。结论:成功构建BK_(Ca)-pcDNA5-293细胞系并获得纯化的BK_(Ca)蛋白质,为进一步深入研究通道功能及药物筛选奠定了重要的基础。
- 毛亮程俊黄文俊谭晓秋党喜同曾晓荣杨艳
- 关键词：膜片钳
- A型钾离子通道对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖的影响被引量：3
- 2017年
- 目的:探究A型钾离子(Potassium,K^+)通道抑制后对舌鳞状细胞癌株(Tca8113)细胞的影响。方法:全细胞膜片钳技术记录和分析A型K^+通道阻滞剂4-氨基吡啶(4-AP)对Tca8113细胞K^+电流的影响;MTT检测A型K^+通道对细胞增殖的作用。结果:在终浓度为2 mmol/L 4-AP作用下,A型K^+电流的峰值从(267.04±13.84)pA降到(124.81±5.24)pA。在一定范围内,不同浓度4-AP能抑制Tca8113细胞在体外的增殖,且抑制程度随药物浓度和作用时间的增加而增强。结论:A型K^+通道参与Tca8113细胞增殖的过程,且A型K^+通道阻滞剂能抑制Tca8113细胞的增殖。
- 张晓艳程俊许华丽毛亮聂敏海
- 关键词：舌肿瘤4-氨基吡啶电压门控细胞增殖
- 蛋白激酶C对心房颤动患者心房肌小电导钙激活钾通道的影响
- :小电导钙激活钾通道(Small conductance calcium-activated potassium channels,SK channels)是近年来在心房肌细胞新发现的离子通道,其中以SK2表达最为丰富....
- 范学慧李妙龄李涛谭晓秋毛亮杨艳曾晓荣
- 关键词：心房颤动小电导钙激活钾通道电流调节蛋白激酶C
- ELISA方法检测慢性心房颤动患者心房肌中SK2蛋白的表达被引量：5
- 2012年
- 目的探讨慢性心房颤动患者与窦性心律患者心房组织SK2蛋白表达水平的差异。方法将22例接受体外循环手术患者常规切除的右心耳组织作为研究对象,根据心房颤动的定义将标本分为2组:窦性心律组(n=12)、心房颤动心律组(n=10),提取患者心房组织的总蛋白,采用二辛可宁酸(BCA)方法检测总蛋白浓度,应用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测心房组织SK2蛋白水平。结果每孔上样量总蛋白为0.1mg的条件下,窦性心律组患者心房组织SK2蛋白浓度为(1.13±0.12)ng/mL,心房颤动心律组患者心房组织SK2蛋白浓度为(3.98±0.48)ng/mL,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论慢性心房颤动患者心房肌组织SK2蛋白的表达水平明显高于窦性心律患者。
- 李涛毛亮谭晓秋李妙龄杨艳刘智飞曾晓荣
- 关键词：心房颤动酶联免疫吸附测定
- 蛋白激酶A在慢性心房颤动患者2型小电导钙激活钾通道调控中的作用被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨心房颤动(AF)时心房肌细胞2型小电导钙激活钾通道(SK2通道)功能的改变及蛋白激酶A(PKA)相关途径对SK2通道电流的调节。方法:从体外循环手术中获取右心耳组织,应用改良的急性酶分离法获得人心房单个心肌细胞,采用膜片钳全细胞记录模式进行SK2通道电流记录。对比窦性心律(SR)组和AF组SK2通道电流密度及其在混合电流中所占比例的变化。观察PKA特异性抑制剂H-89对SK2通道电流的作用。采用BCA法和ELISA法检测心房组织总蛋白和PKA的含量。结果:(1)SR组和AF组的SK2通道电流均呈现内向整流特性。AF组SK2通道电流密度明显增高,且在混合电流中所占比例增加。在-130 mV钳制电压下,SR组和AF组SK2通道电流密度分别为(-2.61±0.14)pA/pF和(-6.21±0.59)pA/pF,在混合电流中所占比例分别为(20.01±1.44)%和(42.87±1.79)%,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)H-89能够降低SR组和AF组SK2通道电流密度,且对AF组SK2通道电流密度的抑制更明显。在-130 mV钳制电压下,H-89对SR组和AF组SK2通道电流密度的抑制率分别为(39.27±4.08)%和(76.32±2.94)%;SK2通道电流在混合电流中比例亦下降,抑制率分别为(37.48±4.77)%和(56.40±3.66)%,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)AF使PKA含量下降。SR组和AF组PKA含量分别为(511.91±7.22)ng/L和(444.09±7.88)ng/L,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:AF患者心房肌细胞SK2通道电流密度及其在混合电流中比例升高,是AF发生和维持的基础之一,电流改变参与了心房电重构过程。PKA能够通过一定途径调节SK2通道功能,且对AF心房肌细胞SK2通道的调节更为显著。
- 张丽李涛李妙龄毛亮谭晓秋杨艳曾晓荣
- 关键词：心房颤动小电导钙激活钾通道蛋白激酶A
- 用重叠PCR策略构建抑制NF-κB活性的IKBA基因突变体
- 2017年
- 目的:用重叠PCR方法将IKBA基因三个碱基进行点突变A94G、G95C、T106G。方法:根据重叠PCR原理设计IKBA基因两条末端引物及A94G、G95C、T106G突变引物,从HUVEC细胞克隆IKBA基因,将其作为模板进行第一次PCR,将第一次PCR产物稀释10 000~50 000倍后作为模板,扩增突变体IKBAm,并克隆到p LVX-IRES-Zs Green载体,用双酶切及DNA测序筛选阳性质粒。结果:从HUVEC细胞克隆的IKBA基因及其突变体IKBAm基因长度均为954 bp,编码317个氨基酸,与IKBA基因相比,突变体IKBAm基因3个位点发生突变94A→G,95G→C,106T→G,编码的32/36位氨基酸由Ser突变为Ala。结论:成功克隆人IKBA基因及其32/36 Ser→Ala突变体IKBAm。
- 毛亮黄文俊黄鹂李雪党喜同
- 关键词：重叠PCR点突变NF-ΚB
- 头颈鳞癌选择性阻断B7-H3可以通过减少髓源抑制细胞加强抗肿瘤免疫效果
- 目的:未成熟髓源细胞包括髓源抑制细胞(MDSC)和肿瘤相关巨噬细胞(TAM)通过促进肿瘤转化和血管生成,以及抑制抗肿瘤效应器免疫反应促进肿瘤生长和转移。因此,设计用于减少MDSC和TAMs积累及其活化的策略是潜在有价值的...
- 毛亮范腾飞武磊于光涛邓伟伟陈磊卜琳琳马思锐刘冰边岩松Ashok B Kulkarni张文峰孙志军
- 关键词：头颈鳞癌免疫治疗肿瘤相关巨噬细胞
- 文献传递
- 抑制SRC家族激酶在头颈鳞癌可以减少髓源抑制细胞
- 目的:SRC家族激酶(SFK),一组非受体酪氨酸激酶,调节多种细胞功能,例如细胞增殖,分化和代谢。SFK在人类癌症的进展期中显示异常活性。但是,SFKs在头颈鳞状细胞癌(HNSCC)信号网络中的准确作用还不清楚。方法及结...
- 毛亮邓伟伟于光涛卜琳琳刘建锋马思锐武磊Ashok B Kulkarni张文峰孙志军
- 关键词：头颈鳞癌
- 文献传递
- 卵母细胞双电极电压钳技术的建立及其记录到的内源性外向电流
- 2013年
- 目的:建立卵母细胞双电极电压钳记录技术。方法:建立双电极电压钳技术平台,并应用此平台,在去除滤泡膜的中国四川牛蛙卵母细胞上,记录内源性的外向离子电流。结果:卵母细胞孵育在正常ND96溶液中,将细胞膜钳制在-80 mV膜电位,给予一系列的去极化刺激可诱发出一个外向电流。在细胞外液中加入10 mM的TEA可阻断该电流80%以上,洗脱后电流幅值恢复至90%左右。将正常ND96溶液替换为无钙ND96溶液后,电流没有变化。结论:成功建立了卵母细胞双电极电压钳记录技术。去极化刺激在牛蛙卵母细胞上诱发出的外向电流为钾电流。
- 王娜杨艳兰欢毛亮陈唐葶曾晓荣
- 关键词：TEA
- 原发性高血压患者与非高血压患者肠系膜动脉大电导钙激活钾通道蛋白质表达水平的差异
- 目的：检测原发性高血压患者与非高血压患者肠系膜动脉BK通道蛋白质表达水平的差异。方法：提取人肠系膜动脉平滑肌蛋白质，用western blot方法检测BK通道α、β亚单位及GAPDH蛋白质的表达。以GAPDH蛋白质为内参...
- 毛亮李涛黄文俊谭晓秋兰欢曾晓荣刘智飞杨艳
- 关键词：原发性高血压肠系膜动脉大电导钙激活钾通道
- 文献传递
