王凡强
- 作品数：10 被引量：102H指数：6
- 供职机构：山东大学生命科学学院微生物技术国家重点实验室更多>>
- 相关领域：化学工程生物学轻工技术与工程理学更多>>
- 嗜热脂肪芽孢杆菌过氧化氢酶基因perA在大肠杆菌中的高效表达被引量：11
- 2002年
- 利用PCR技术得到嗜热脂肪芽孢杆菌 (Bacillusstearothermophilus)过氧化氢酶基因 perA ,将该基因与表达载体 pKK2 2 3 3连接构建重组质粒pK perA ,转化大肠杆菌过氧化氢酶HPⅠ和HPⅡ双缺突变株UM 2 ,得到重组大肠杆菌UM 2 1.酶活测定结果表明 ,表达产物具有正常的生物学活性 .SDS PAGE电泳结果显示出明显的特异性表达条带 ,单体Mr =86× 10 3 ,与嗜热脂肪芽孢杆菌所产酶相同 .实验表明 ,重组质粒在宿主UM 2中有较好的稳定性 ,在无选择压力条件下传代 6 0次基本保持稳定 ,传代 10 0次重组质粒保留 80 %以上 .摇瓶实验确定重组菌的最佳表达条件为 :IPTG浓度 ,0 .75mmol/L ;诱导时间 3h ;培养基起始 pH 6 .5 ;诱导温度 37℃ ;装液量 5 0mL/ 2 5 0mL .在优化条件下 ,重组菌产生的过氧化氢酶占菌体总蛋白的 8% ,酶活力可达 35U/mL ,是原始菌株BacillusstearothermophilusIAM110 0 1的 11.7倍 .图 2表 1参
- 王凡强王正祥邵蔚蓝刘吉泉徐成勇诸葛健
- 关键词：大肠杆菌嗜热脂肪芽孢杆菌过氧化氢酶
- 生料发酵生产高浓度酒精的研究
- ＜正＞随着世界经济的发展,人们对石油的需求日益增长,自20世纪70年代发生石油危机以来,石油价格不断上涨,同时石油消费产生大量二氧化碳,从而加剧了全球的温室效应并剧烈的气候变化,从而对人类的生存环境做出了巨大破坏。石油的...
- 杨春玉高翠娟王凡强许平
- 文献传递
- 枯草杆菌蛋白酶基因工程的研究进展被引量：22
- 2000年
- 本文介绍了枯草杆菌蛋白酶 (Subtilisin)的研究现状 ,即利用定位诱变和体外重组等技术改变酶的性质 ,包括催化活性、底物特异性、稳定性、低温适应性以及酶在有机相中的性能等。对枯草杆菌蛋白酶的成功改造不仅有可观的商业价值 。
- 王凡强马美荣王正祥诸葛健
- 关键词：枯草杆菌蛋白酶体外重组蛋白质工程
- 重组过氧化氢酶与一种商品过氧化氢酶的性质比较被引量：2
- 2002年
- 将重组过氧化氢酶和市售一种商品过氧化氢酶的性质进行了比较 .重组酶的最适温度为70℃ ,某商品过氧化氢酶的最适温度为 4 0℃ ;与这种商品过氧化氢酶相比 ,重组酶的热稳定性更好 .重组过氧化氢酶和这种商品过氧化氢酶的最适 pH都是 7.0 ;重组酶和这种商品过氧化氢酶在pH 3～ 8的范围内均较为稳定 ;重组酶在室温放置 1个月后酶活力基本保持不变 ,而此种商品过氧化氢酶活力损失约 70 % ;金属离子对重组酶和这种商品过氧化氢酶都有抑制作用 ,抑制程度有所不同 ;EDTA抑制这种商品过氧化氢酶的活性 。
- 王凡强王正祥刘吉泉诸葛健
- 关键词：过氧化氢酶重组酶热稳定性
- 乙醇发酵生产工程菌研究进展
- ＜正＞石油的产生经过了数亿年的自然演化过程,但人类将用200年左右的时间将其消耗尽。专家预测在未来的十年左右时间里,石油的生产将达到峰值,随后生产能力必然呈下降曲线[Kerr, 1998]。乙醇是一种重要的工业原料,广泛...
- 王凡强许平
- 文献传递
- 发酵法制备甲乙酮被引量：5
- 2000年
- 利用 Klebsiella oxytoca菌发酵葡萄糖制得2,3-丁二醇发酵液,再将经过离心去除菌体的该发酵液进行蒸馏获得商品级甲乙酮,转化率为99％以上,收率95％以上。虽然该方法在产品成本上还无法与石油化工产品竞争,但可作为利用生物法生产燃料及化工原料的一种补充。
- 王迪王凡强王建华
- 关键词：发酵甲乙酮丁二醇发酵液蒸馏
- 产乙醇工程菌研究进展被引量：10
- 2006年
- 伴随着21世纪的到来,低油价的时代也悄然落幕。简要概述了燃料乙醇产生菌代谢工程的研究进展,包括了利用淀粉、戊糖及纤维素的工程酵母构建,运动发酵单胞菌利用戊糖工程菌的构建,引入外源乙醇合成途径的大肠埃希氏菌和产酸克雷伯氏菌等。对燃料乙醇的重视将促进开发能利用廉价原料和要求粗放的工程菌株用于高产乙醇的生产过程,以降低成本和能耗,其中能利用生淀粉的工程酵母及利用木质纤维素水解物的运动发酵单胞菌工程菌有较大的工业化潜力。
- 王凡强许平
- 关键词：燃料乙醇代谢工程菌株
- 重组大肠杆菌热稳定性过氧化氢酶的纯化及性质研究被引量：27
- 2002年
- 将产热稳定性过氧化氢酶的重组大肠杆菌培养后菌体破碎得到的粗酶液经热处理、硫酸铵分级沉淀、DEAE SephadexA 5 0离子交换层析、HiPrep 1 6 1 0Phenyl疏水作用层析、Su perdex2 0 0HR 1 0 3 0凝胶层析提纯后得到电泳纯的酶 ,比酶活达到 1 5 6 2 9U mg。此酶的最适温度为 70℃ ,最适pH7 0 ,在 6 0℃保温 6 0min酶活力基本不变 ,在pH3～ 8的范围内比较稳定。此酶的Km 和Vmax分别为 7 75mmol L和 2 7 8mmol·min- 1·mg- 1。 1mmol L的Zn2 + 、Ba2 + 、Mn2 +可使该酶完全失活 ,KCN、NaN3 、Na2 S2 O4 、巯基乙醇对酶活力有抑制作用 ,5 0mmol
- 王凡强王正祥邵蔚蓝刘吉泉徐成勇诸葛健
- 关键词：重组大肠杆菌纯化
- 发酵法生产2,3-丁二醇被引量：11
- 2000年
- 应用Klebsiella oxytoca发酵生产2,3-丁二醇,以葡萄糖为底物,在5L发酵罐、37℃、pH为6.0、底物浓度为160g/L的条件下发酵,产物浓度在100g/L,底物转化率达90％以上,与酒精行业发酵水平类似。
- 王迪王凡强王建华
- 关键词：发酵丁二醇甲乙酮
- 热稳定性过氧化氢酶工程菌株发酵条件的研究被引量：18
- 2002年
- 重组大肠杆菌UM2 1携带来自嗜热脂肪芽孢杆菌过氧化氢酶的基因 ,在以IPTG作为诱导物时 ,在IPTG浓度为 0 75mmol/L、起始 pH6 5、装液量 5 0mL/2 5 0mL三角瓶的条件下 3 7℃诱导 3h ,酶的表达水平最佳 ;在以乳糖作为诱导物时 ,在乳糖质量浓度为 10 g/L、起始 pH7 5、装液量 5 0mL/2 5 0mL三角瓶的条件下 ,3 7℃诱导 5h ,酶的活力最高。乙酸的存在能够抑制酶的表达。工程菌在最适条件下酶活力可达 3 0 0 0 0～ 3 5 0 0 0U/L以上 ,约是原始菌株嗜热脂肪芽孢杆菌的 10倍。工程菌在无选择压力的条件下连续传代 60代 ,基本保持稳定 ,连续传代 10 0代 ,仍有 80 %左右的菌株携带重组质粒。
- 王凡强王正祥邵蔚蓝刘吉泉徐成勇诸葛健
- 关键词：过氧化氢酶工程菌发酵热稳定性
