刘吉泉
- 作品数：10 被引量：124H指数：7
- 供职机构：江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：高等学校骨干教师资助计划更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程理学更多>>
- 重组过氧化氢酶与一种商品过氧化氢酶的性质比较被引量：2
- 2002年
- 将重组过氧化氢酶和市售一种商品过氧化氢酶的性质进行了比较 .重组酶的最适温度为70℃ ,某商品过氧化氢酶的最适温度为 4 0℃ ;与这种商品过氧化氢酶相比 ,重组酶的热稳定性更好 .重组过氧化氢酶和这种商品过氧化氢酶的最适 pH都是 7.0 ;重组酶和这种商品过氧化氢酶在pH 3～ 8的范围内均较为稳定 ;重组酶在室温放置 1个月后酶活力基本保持不变 ,而此种商品过氧化氢酶活力损失约 70 % ;金属离子对重组酶和这种商品过氧化氢酶都有抑制作用 ,抑制程度有所不同 ;EDTA抑制这种商品过氧化氢酶的活性 。
- 王凡强王正祥刘吉泉诸葛健
- 关键词：过氧化氢酶重组酶热稳定性
- 耐热过氧化氢酶基因工程菌的构建及其发酵条件被引量：9
- 2006年
- 利用PCR扩增技术以嗜热脂肪芽孢杆菌IAM11001染色体DNA为模板,扩增得到嗜热脂肪芽孢杆菌过氧化氢酶编码基因perA。再与经EcoRⅠ酶切的温控表达载体pBV220连接,构建重组质粒,并转化宿主大肠杆菌JM109,得到耐热过氧化氢酶基因工程菌,然后对该工程菌在LB培养基和半合成培养基中的发酵条件进行了优化。结果表明:在LB培养基中,诱导时期和酶合成最佳诱导时间均为5 h,最大产酶量达到72.9 U/mL;在半合成培养基中,于30℃培养4 h,再于42℃诱导培养6 h,产酶量最高达到131 U/mL。
- 段绪果沈微李艳丽饶志明唐雪明方慧英刘吉泉诸葛健
- 关键词：基因工程菌发酵条件
- 重组大肠杆菌热稳定性过氧化氢酶的纯化及性质研究被引量：27
- 2002年
- 将产热稳定性过氧化氢酶的重组大肠杆菌培养后菌体破碎得到的粗酶液经热处理、硫酸铵分级沉淀、DEAE SephadexA 5 0离子交换层析、HiPrep 1 6 1 0Phenyl疏水作用层析、Su perdex2 0 0HR 1 0 3 0凝胶层析提纯后得到电泳纯的酶 ,比酶活达到 1 5 6 2 9U mg。此酶的最适温度为 70℃ ,最适pH7 0 ,在 6 0℃保温 6 0min酶活力基本不变 ,在pH3～ 8的范围内比较稳定。此酶的Km 和Vmax分别为 7 75mmol L和 2 7 8mmol·min- 1·mg- 1。 1mmol L的Zn2 + 、Ba2 + 、Mn2 +可使该酶完全失活 ,KCN、NaN3 、Na2 S2 O4 、巯基乙醇对酶活力有抑制作用 ,5 0mmol
- 王凡强王正祥邵蔚蓝刘吉泉徐成勇诸葛健
- 关键词：重组大肠杆菌纯化
- 碱性蛋白酶工程菌发酵条件及重组酶的纯化和性质的研究被引量：22
- 2002年
- 在 5L发酵罐中对重组碱性蛋白酶工程菌株BP0 71高产碱性蛋白酶的条件进行了研究 ,通过提高通气量和改变搅拌转速 ,BP0 71可在发酵 40h内达到产酶高峰 ,酶活力最高可达 2 44 80u mL。利用快速蛋白液相层析(FPLC)技术 ,建立了快速高效纯化碱性蛋白酶的方案。发酵液通过硫酸铵沉淀、DEAE A 5 0脱色及聚乙二醇浓缩得粗酶 ,再经过CM Sephadex C 5 0、Sephadex G 75柱层析后得到了单一组份的重组碱性蛋白酶 ,酶纯度提高了 76 .2倍。SDS -PAGE显示重组碱性蛋白酶分子量为 2 8kD。酶学性质研究表明 ,酶的最适作用pH为 11,最适作用温度为 6 0℃ ,具有良好的pH稳定性和热稳定性。Ca2 +、Mg2 +对酶的稳定性有促进作用 ,Hg2 +、Ag+、PMFS和DFP能强烈抑制酶的活力。
- 唐雪明王正祥邵蔚蓝刘吉泉方慧英诸葛健
- 关键词：碱性蛋白酶工程菌发酵条件重组酶纯化
- 嗜热脂肪芽孢杆菌过氧化氢酶基因perA在大肠杆菌中的高效表达被引量：11
- 2002年
- 利用PCR技术得到嗜热脂肪芽孢杆菌 (Bacillusstearothermophilus)过氧化氢酶基因 perA ,将该基因与表达载体 pKK2 2 3 3连接构建重组质粒pK perA ,转化大肠杆菌过氧化氢酶HPⅠ和HPⅡ双缺突变株UM 2 ,得到重组大肠杆菌UM 2 1.酶活测定结果表明 ,表达产物具有正常的生物学活性 .SDS PAGE电泳结果显示出明显的特异性表达条带 ,单体Mr =86× 10 3 ,与嗜热脂肪芽孢杆菌所产酶相同 .实验表明 ,重组质粒在宿主UM 2中有较好的稳定性 ,在无选择压力条件下传代 6 0次基本保持稳定 ,传代 10 0次重组质粒保留 80 %以上 .摇瓶实验确定重组菌的最佳表达条件为 :IPTG浓度 ,0 .75mmol/L ;诱导时间 3h ;培养基起始 pH 6 .5 ;诱导温度 37℃ ;装液量 5 0mL/ 2 5 0mL .在优化条件下 ,重组菌产生的过氧化氢酶占菌体总蛋白的 8% ,酶活力可达 35U/mL ,是原始菌株BacillusstearothermophilusIAM110 0 1的 11.7倍 .图 2表 1参
- 王凡强王正祥邵蔚蓝刘吉泉徐成勇诸葛健
- 关键词：大肠杆菌嗜热脂肪芽孢杆菌过氧化氢酶
- 弗氏柠檬酸细菌酪氨酸酚解酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达被引量：5
- 2001年
- 以基因组DNA为模板 ,利用PCR技术从弗氏柠檬酸细菌 (Citrobacterfreundii)中扩增得到含有酪氨酸酚解酶基因的DNA片段 ,定向连接到质粒 pUC118上 ,得到重组质粒 pTPL ,将此重组质粒转化到受体菌E .coliXL - 1-BlueMRF′中 ,通过蓝白斑鉴定挑出阳性菌株。从此阳性菌株中提取质粒 pTPL并将此质粒转入到E .coliJM 10 9中 ,用E .coliJM 10 9(pTPL)制备高活性的酪氨酸酚解酶。对质粒稳定性的研究表明 ,E .coliJM 10 9(pTPL)在无选择压力下 37℃连续培养 5 0代以上 ,质粒丢失率仅有 15 % 。
- 李华钟孙伟刘吉泉陈坚
- 关键词：大肠杆菌克隆质粒稳定性
- 古细菌Pyrococcus furiosus高嗜热α-淀粉酶基因在大肠杆菌中的分泌表达被引量：18
- 2003年
- 该文将大肠杆菌表达载体pKK223-3中含tac启动子的片段以BamHI、EcoRI酶切后接入表达载体pET28a 中,构建成新的表达载体pEtac,通过PCR扩增获得P.furiosus 胞外α- 淀粉酶完整结构基因,接入pEtac 中,转化大肠杆菌JM109。在IPTG诱导下,转化子周质中能测出明显酶活,证明Pyrococcusfuriosus 的胞外α- 淀粉酶能在自身信号肽引导下分泌到大肠杆菌细胞周质中。重组酶最适pH为4.5,最适温度为95℃,重组酶经121℃保温1h,酶活仍能保持50%以上,性质与由P.furiosus自身分泌的胞外α- 淀粉酶相似。
- 沈微王正祥唐雪明邵蔚蓝刘吉泉诸葛健
- 关键词：大肠杆菌分泌表达
- 古细菌Pyrococcus furiosus嗜热α-淀粉酶基因在大肠杆菌中的表达被引量：6
- 2003年
- 用PCR方法从嗜热古细菌Pyrococcusfuriosus的基因组DNA中扩增出胞外α 淀粉酶完整结构基因 ,插入表达载体pET2 8a中构建成质粒 pET amy(sig+) ,以质粒pET amy(sig +)为底物扩增出不含信号序列的α 淀粉酶成熟肽基因片断 ,获得质粒 pET amy(sig ) ,将重组质粒分别转化大肠杆菌BL2 1 (DE3)。在T7启动子和lac操纵子控制下 ,通过IPTG的诱导在重组大肠杆菌细胞内分别表达出含信号肽和不含信号肽的融合蛋白。其中不含信号肽的融合蛋白具有与P .furio sus产生的胞外α 淀粉酶相似的酶学性质 :最适pH为 5 .0 ,最适温度约为 95℃ ,在 1 2 1℃下热处理 1h酶活仍能保持 50 %以上 ;
- 沈微王正祥刘吉泉诸葛健
- 关键词：大肠杆菌细胞
- 微生物酶的分子改性和人工进化的研究进展被引量：16
- 2000年
- 运用分子生物学技术对微生物来源的酶进行分子改性和人工进化在过去几年中取得了令人瞩目的进展。本文综述了用于酶分子改性和人工进化的主要分子生物学方法 ,如易错PCR技术。
- 王正祥刘吉泉诸葛健
- 关键词：微生物
- 热稳定性过氧化氢酶工程菌株发酵条件的研究被引量：18
- 2002年
- 重组大肠杆菌UM2 1携带来自嗜热脂肪芽孢杆菌过氧化氢酶的基因 ,在以IPTG作为诱导物时 ,在IPTG浓度为 0 75mmol/L、起始 pH6 5、装液量 5 0mL/2 5 0mL三角瓶的条件下 3 7℃诱导 3h ,酶的表达水平最佳 ;在以乳糖作为诱导物时 ,在乳糖质量浓度为 10 g/L、起始 pH7 5、装液量 5 0mL/2 5 0mL三角瓶的条件下 ,3 7℃诱导 5h ,酶的活力最高。乙酸的存在能够抑制酶的表达。工程菌在最适条件下酶活力可达 3 0 0 0 0～ 3 5 0 0 0U/L以上 ,约是原始菌株嗜热脂肪芽孢杆菌的 10倍。工程菌在无选择压力的条件下连续传代 60代 ,基本保持稳定 ,连续传代 10 0代 ,仍有 80 %左右的菌株携带重组质粒。
- 王凡强王正祥邵蔚蓝刘吉泉徐成勇诸葛健
- 关键词：过氧化氢酶工程菌发酵热稳定性
