皮庆猛
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
- 供职机构：上海交通大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划上海市教育发展基金会“曙光计划”项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 类胚体中残留细胞分化全能性维持与外源性白血病抑制分化因子的关系被引量：1
- 2009年
- 目的研究小鼠胚胎干细胞体外类胚体分化后残留未分化细胞的分化能力,探讨其分化全能性维持与外源性白血病抑制分化因子(LIF)的关系。方法小鼠R1胚胎干细胞体外经20 d的类胚体诱导分化后,胰酶消化为单细胞悬液,在不含LIF的DMEM培养液中贴壁培养。扩增后的细胞用流式细胞仪分析未分化及分化表面标志(CD9、SSEA1和Flk-1)的表达情况。分别于再次类胚体诱导分化前后,RT-PCR检测Oct-4、Nanog、Rex1、FGF5、Nestin、Brachyury、Flk-1和GATA6表达。将扩增后的残留细胞注射至裸鼠皮下,检测畸胎瘤形成能力。Oct-4/GFP转基因小鼠胚胎干细胞在半固体培养基上作单细胞分化,20 d后统计分化残留率。结果在不含LIF的DMEM培养液中的残留细胞呈克隆样生长,表达未分化胚胎干细胞标志CD9、SSEA1、Oct-4、Nanog和Rex1。残留细胞体外可再次诱导分化,表达3个胚层的分化标志。残留细胞裸鼠皮下注射6周后形成畸胎瘤。单细胞分化实验表明,常规培养的小鼠胚胎干细胞中约14%的细胞具有分化残留能力。结论残留胚胎干细胞全能性维持不依赖外源性白血病抑制分化因子;常规培养的胚胎干细胞仅部分具有残留能力。
- 皮庆猛付炜石伦刚唐郑雅曹谊林张文杰
- 关键词：胚胎干细胞分化全能性白血病抑制因子
- 应用量子点标记小鼠胚胎干细胞的初步研究被引量：2
- 2008年
- 目的探讨应用量子点(Quantum dots,Qdots)体外标记胚胎干细胞进行长期跟踪的可行性。方法以Qtracker 655标记小鼠未分化胚胎干(ES)细胞和小鼠胚胎成纤维(MEF)细胞,标记后倒置荧光显微镜和流式细胞仪动态观察细胞内Qdots的变化。丝裂霉素、秋水仙素或Verapamil处理标记Qdots的胚胎干细胞,观察细胞内Qdots含量与细胞增殖及多药耐药泵的关系。结果Qdots可以标记ES细胞,标记效率可达到90%以上。标记24h后细胞内Qdots含量较MEF细胞明显下降,至72h仅5%左右的ES细胞Qdots标记呈阳性。细胞增殖抑制实验显示,ES细胞内Qdots含量下降与细胞增殖关系不大。用Verapamil抑制多药耐药泵的功能,也不能阻止胞内Qdots含量的降低。结论Qdots不能长期标记未分化ES细胞,ES细胞内Qdots含量的迅速降低并非单由细胞增殖过快造成,而且与迅速地被排出细胞有关,但这一排出与多药耐药泵无关。
- 皮庆猛付炜石伦刚曹谊林张文杰
- 关键词：细胞标记胚胎干细胞量子点
- 类胚体中残留未分化胚胎干细胞的初步研究被引量：4
- 2009年
- 目的探讨类胚体中残留未分化胚胎干细胞(ESC)的特性。方法小鼠R1和Oct-4-GFP转基因ESC细胞株,体外类胚体分化20d后消化打散,重新给予ESC常规培养液培养。观察类胚体中残留未分化细胞形态;流式细胞仪和免疫荧光染色检测和观察残留细胞表面标志物及体外再次分化能力。将残留细胞扩增后注射入裸鼠背部皮下和大腿肌肉内,6周后注射部位取材进行大体和组织学检查。结果分化20d的类胚体中存在残留未分化ESC,生长形态呈克隆样,表达SSEA1、CD31、CD9和Oct-4等未分化ESC标志;细胞能反复传代,并可在体外再次分化和残留。残留细胞注射部位形成畸胎瘤,瘤体组织中存在成熟的内胚层、中胚层和外胚层组织。结论胚胎干细胞分化为类胚体后仍存在残留未分化全能ESC,残留细胞在体内、外可再次分化,并能在体外分化中再次残留。
- 付炜皮庆猛石伦刚唐郑雅曹谊林张文杰
- 关键词：胚胎干细胞分化
- 诱导小鼠胚胎干细胞分化获取血管平滑肌和内皮细胞被引量：1
- 2009年
- 目的探讨从诱导分化的小鼠胚胎干细胞中获取体外构建组织工程化血管种子细胞的可行性。方法利用Flk-1作为小鼠胚胎干细胞分化来源的血管前体细胞标志,流式细胞仪分选分化的类胚体中Flk-1阳性细胞,分别添加血小板源生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF),诱导血管前体细胞向血管平滑肌细胞和血管内皮细胞分化。免疫荧光染色鉴定诱导分化后细胞的相关标志表达;流式细胞仪分析诱导分化后细胞的分化效率和纯度。结果流式细胞仪分析显示,在分化第4天类胚体中有50%左右的细胞表达Flk-1,经分选的Flk-1阳性细胞通过进一步诱导,可以得到(95.9±3.5)%α-SMA阳性的血管平滑肌细胞和(59.1±4.8)%CD31阳性的血管内皮细胞。结论成功应用流式细胞分选法从诱导分化的小鼠胚胎干细胞中获取血管平滑肌细胞和血管内皮细胞,实验为组织工程化血管构建中种子细胞来源提供了新途径。
- 皮庆猛岳伟付炜石伦刚曹谊林张文杰
- 关键词：胚胎干细胞FLK-1平滑肌细胞
- 量子点标记共培养睾丸体细胞体外培养观察被引量：1
- 2011年
- 目的 初步验证量子点能否对共培养睾丸体细胞进行标记,为睾丸体细胞的体内外研究提供一种细胞损伤小,且简便、有效的标记手段.方法 取雄性Wistar大鼠的睾丸组织小块,胶原酶消化,差速贴壁法收集睾丸体细胞,取第一代睾丸体细胞以0.25%胰酶蛋白酶-0.02%EDTA消化,制备单细胞悬液,与量子点共同孵育2h后贴壁及传代培养,共聚焦荧光显微镜动态观察细胞生长、增殖情况.结果 相差显微镜下观察,标记细胞形态无明显改变,荧光显微镜下可见摄取量子散在分布于细胞内,主要集中于细胞核周围,分裂细胞及增殖活跃细胞摄取量明显高于老化细胞.传代后仍可见细胞内的量子点分布,荧光强度未见明显衰减.结论 量子点能够被共培养睾丸体细胞摄取,且摄取速度快,荧光显微镜下易于观察.量子点标记法对共培养细胞损伤小,操作简便易行,是共培养睾丸体细胞标记的理想选择之一.
- 李鸣王晓云皮庆猛周广东戴海英邢新
- 关键词：量子点共培养细胞标记
- 组织工程化血管构建中胚胎干细胞诱导分化为血管内皮细胞的研究进展被引量：1
- 2007年
- 血管组织工程学是将体外培养扩增的血管壁细胞（包括内皮细胞、平滑肌细胞、成纤维细饱），种植于天然或人工合成的细胞外基质上，经体外培养后，再移植到体内，以替代病损的血管组织。而长久以来限制工程化组织研究的一个关键问题是种子细胞的来源的问题．胚胎干细胞的研究深入为体外构建各种组织提供了新的来源。同时，随着研究的深入，胚胎干细胞也有望成为组织工程化血管构建的种子细胞来源。
- 皮庆猛张文杰
- 关键词：血管内皮细胞组织工程化血管构建细胞诱导分化体外培养扩增血管壁细胞
