石伦刚
- 作品数：5 被引量：12H指数：2
- 供职机构：上海交通大学医学院附属第九人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划上海市教育发展基金会“曙光计划”项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 类胚体中残留未分化胚胎干细胞的初步研究被引量：4
- 2009年
- 目的探讨类胚体中残留未分化胚胎干细胞(ESC)的特性。方法小鼠R1和Oct-4-GFP转基因ESC细胞株,体外类胚体分化20d后消化打散,重新给予ESC常规培养液培养。观察类胚体中残留未分化细胞形态;流式细胞仪和免疫荧光染色检测和观察残留细胞表面标志物及体外再次分化能力。将残留细胞扩增后注射入裸鼠背部皮下和大腿肌肉内,6周后注射部位取材进行大体和组织学检查。结果分化20d的类胚体中存在残留未分化ESC,生长形态呈克隆样,表达SSEA1、CD31、CD9和Oct-4等未分化ESC标志;细胞能反复传代,并可在体外再次分化和残留。残留细胞注射部位形成畸胎瘤,瘤体组织中存在成熟的内胚层、中胚层和外胚层组织。结论胚胎干细胞分化为类胚体后仍存在残留未分化全能ESC,残留细胞在体内、外可再次分化,并能在体外分化中再次残留。
- 付炜皮庆猛石伦刚唐郑雅曹谊林张文杰
- 关键词：胚胎干细胞分化
- 诱导小鼠胚胎干细胞分化获取血管平滑肌和内皮细胞被引量：1
- 2009年
- 目的探讨从诱导分化的小鼠胚胎干细胞中获取体外构建组织工程化血管种子细胞的可行性。方法利用Flk-1作为小鼠胚胎干细胞分化来源的血管前体细胞标志,流式细胞仪分选分化的类胚体中Flk-1阳性细胞,分别添加血小板源生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF),诱导血管前体细胞向血管平滑肌细胞和血管内皮细胞分化。免疫荧光染色鉴定诱导分化后细胞的相关标志表达;流式细胞仪分析诱导分化后细胞的分化效率和纯度。结果流式细胞仪分析显示,在分化第4天类胚体中有50%左右的细胞表达Flk-1,经分选的Flk-1阳性细胞通过进一步诱导,可以得到(95.9±3.5)%α-SMA阳性的血管平滑肌细胞和(59.1±4.8)%CD31阳性的血管内皮细胞。结论成功应用流式细胞分选法从诱导分化的小鼠胚胎干细胞中获取血管平滑肌细胞和血管内皮细胞,实验为组织工程化血管构建中种子细胞来源提供了新途径。
- 皮庆猛岳伟付炜石伦刚曹谊林张文杰
- 关键词：胚胎干细胞FLK-1平滑肌细胞
- 应用量子点标记小鼠胚胎干细胞的初步研究被引量：2
- 2008年
- 目的探讨应用量子点(Quantum dots,Qdots)体外标记胚胎干细胞进行长期跟踪的可行性。方法以Qtracker 655标记小鼠未分化胚胎干(ES)细胞和小鼠胚胎成纤维(MEF)细胞,标记后倒置荧光显微镜和流式细胞仪动态观察细胞内Qdots的变化。丝裂霉素、秋水仙素或Verapamil处理标记Qdots的胚胎干细胞,观察细胞内Qdots含量与细胞增殖及多药耐药泵的关系。结果Qdots可以标记ES细胞,标记效率可达到90%以上。标记24h后细胞内Qdots含量较MEF细胞明显下降,至72h仅5%左右的ES细胞Qdots标记呈阳性。细胞增殖抑制实验显示,ES细胞内Qdots含量下降与细胞增殖关系不大。用Verapamil抑制多药耐药泵的功能,也不能阻止胞内Qdots含量的降低。结论Qdots不能长期标记未分化ES细胞,ES细胞内Qdots含量的迅速降低并非单由细胞增殖过快造成,而且与迅速地被排出细胞有关,但这一排出与多药耐药泵无关。
- 皮庆猛付炜石伦刚曹谊林张文杰
- 关键词：细胞标记胚胎干细胞量子点
- 类胚体中残留细胞分化全能性维持与外源性白血病抑制分化因子的关系被引量：1
- 2009年
- 目的研究小鼠胚胎干细胞体外类胚体分化后残留未分化细胞的分化能力,探讨其分化全能性维持与外源性白血病抑制分化因子(LIF)的关系。方法小鼠R1胚胎干细胞体外经20 d的类胚体诱导分化后,胰酶消化为单细胞悬液,在不含LIF的DMEM培养液中贴壁培养。扩增后的细胞用流式细胞仪分析未分化及分化表面标志(CD9、SSEA1和Flk-1)的表达情况。分别于再次类胚体诱导分化前后,RT-PCR检测Oct-4、Nanog、Rex1、FGF5、Nestin、Brachyury、Flk-1和GATA6表达。将扩增后的残留细胞注射至裸鼠皮下,检测畸胎瘤形成能力。Oct-4/GFP转基因小鼠胚胎干细胞在半固体培养基上作单细胞分化,20 d后统计分化残留率。结果在不含LIF的DMEM培养液中的残留细胞呈克隆样生长,表达未分化胚胎干细胞标志CD9、SSEA1、Oct-4、Nanog和Rex1。残留细胞体外可再次诱导分化,表达3个胚层的分化标志。残留细胞裸鼠皮下注射6周后形成畸胎瘤。单细胞分化实验表明,常规培养的小鼠胚胎干细胞中约14%的细胞具有分化残留能力。结论残留胚胎干细胞全能性维持不依赖外源性白血病抑制分化因子;常规培养的胚胎干细胞仅部分具有残留能力。
- 皮庆猛付炜石伦刚唐郑雅曹谊林张文杰
- 关键词：胚胎干细胞分化全能性白血病抑制因子
- 人胚胎干细胞向类间充质干细胞的诱导分化及鉴定被引量：5
- 2009年
- 目的建立诱导人胚胎干细胞向类间充质干细胞分化的方法,并鉴定细胞的生物学特性。方法人胚胎干细胞在无血清条件下悬浮培养形成类胚体,10d后在含血清条件下使类胚体贴壁生长,5～6d后机械法剔除类胚体中心区高密度重叠细胞,保留周边铺展细胞并传代扩增。观察诱导分化与传代扩增后细胞的形态学变化;免疫荧光染色和流式细胞术进行细胞表型分析。取第5代细胞进行成脂、成骨和成软骨诱导,3～4周后运用特殊染色及RT-PCT技术检测细胞成脂、成骨及成软骨分化能力。结果诱导分化后细胞具有与骨髓间充质干细胞相似的形态,扩增能力较强,多次扩增传代后细胞形态和增殖能力无明显改变。免疫荧光染色发现细胞表达中胚层标志波型蛋白(vimentin)。流式细胞术分析显示,细胞表达CD29、CD105、CD166等间充质干细胞表面标志。特殊染色及RT-PCT检测结果显示,成脂诱导后多数细胞油红染色阳性,脂蛋白酶和leptin表达增加;成骨诱导后细胞茜素红染色阳性,碱性磷酸酶和Cbfa-1表达增加;成软骨诱导后细胞Ⅱ型胶原染色阳性,Ⅱ型胶原和软骨寡聚基质蛋白(COMP)表达增强。结论成功诱导人胚胎干细胞向类间充质干细胞分化。分化获得的细胞增殖能力强,表达间充质干细胞的特异性标志,并具有多向分化潜能。
- 石伦刚唐郑雅陆峻泓曹谊林张文杰
- 关键词：人胚胎干细胞间充质干细胞分化
