苏良
- 作品数：34 被引量：212H指数：9
- 供职机构：长沙市疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：长沙市科技计划项目湖南省卫生厅科研基金湖南省卫生厅科技项目更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 食品安全常见致病微生物快速检测方法的建立及应用研究
- 宋克云孙边成欧新华张如胜苏良姚栋叶文
- 研究背景、目的、意义：食品安全相关致病微生物的检测和监测主要依靠繁琐费时（3-7天）的传统病原体培养方法，无法满足暴发性食物中毒和食品安全事件快速检测的需要。该研究利用一种便捷、不需要特殊仪器、肉眼可以判断结果的环介导等...
- 关键词：
- 关键词：食品安全检测试剂盒
- 猪链球菌长沙分离株的鉴定与16S rRNA系统进化分析被引量：3
- 2013年
- 目的对2株猪链球菌(Streptococcus suis,SS)长沙分离株进行分离培养和分子鉴定,并对其16SrRNA基因进行测序,阐明其系统进化关系。方法利用分离培养法对2株SS进行分离鉴定,同时对分离株16SrRNA基因进行PCR扩增和核苷酸序列测定,将测序结果提交GenBank,通过在线Blast同源性分析进行菌株鉴定,并与传统培养鉴定方法进行比较,利用Mega4.0软件构建SS长沙分离株系统进化树。结果成功扩增出2株菌的目的片段,通过测序后Blast同源性分析,证实2株菌株均为SS,且与传统鉴定方法结果一致,进化树显示长沙2株SS和国内外2型位于同一进化分支上,同四川的05ZYH33参考株亲缘关系最近。结论通过16SrRNA基因可以准确快速鉴定SS,可应用于应急检测,长沙2株猪链球菌属于SS2型,与其他SS2分离株16SrRNA基因同源性高,未发生变异。
- 苏良欧新华杨柳青张如胜刘如春陈田木李亚曼孙边成
- 关键词：猪链球菌RRNA进化分析
- 某中学细菌性痢疾暴发流行的病原学检测报告被引量：2
- 2006年
- 目的浏阳市某中学发生了一起感染性腹泻暴发,部分学生出现发烧、腹痛、腹泻情况,为查明病因和及时控制疫情,长沙市疾病预防控制中心及时组织人员协助浏阳市疾病预防控制中心进行了流行病学调查和实验室检查。方法在开展流行病学调查的同时,采集了现症病人肛拭子4份,水2份,按GB/T4789.5-2003的方法进行病原菌检测。结果4份肛拭标本检出宋内氏志贺氏痢疾杆菌。结论此次感染性腹泻为水源污染所致的菌痢暴发流行。
- 叶文袁洁杨柳青苏良李莎
- 关键词：宋内氏志贺氏菌菌痢水源污染
- 双重PCR检测副溶血性弧菌的tlh和tdh基因方法建立与初步应用被引量：5
- 2012年
- 目的建立同时检测副溶血性弧菌的tlh和tdh基因的双重聚合酶链式反应(PCR)法。方法根据副溶血性弧菌的tlh、tdh基因序列设计引物,进行PCR扩增及电泳检测。同时优化反应体系,测定稳定性、重复性、特异性及灵敏度。结果本实验设计的引物能特异性地扩增副溶血性弧菌的450、269 bp的片段,而对其它种类的菌物无特异性扩增,结果表明该方法特异性好,双重PCR检测灵敏度为100 cfu/ml。并进行了肛门拭子样品的检测。结论初步建立能在8 h内快速、灵敏、特异地检出副溶血性弧菌毒力菌株的双重PCR技术。
- 岳友宏苏良
- 关键词：双重PCR副溶血性弧菌
- 志贺菌和肠侵袭性大肠埃希菌LAMP检测方法的建立及应用被引量：5
- 2013年
- 目的建立针对侵袭性质粒抗原H(ipaH)编码基因的环介导等温扩增(LAMP)方法。方法利用LAMP方法对4株志贺菌、1株肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)和20株其他肠道菌DNA在65℃恒温扩增30min或60min后观察结果。结果 4株志贺菌和EIEC可通过肉眼和电泳观察到阳性结果,而其他肠道菌为阴性。LAMP检测特异性与聚合酶链反应(PCR)相似,但敏感性比PCR高10倍。LAMP、PCR检出下限分别为1.2×102、1.2×103CFU/mL。LAMP和分离培养法对70例食物中毒患者和健康者肛拭子标本检测结果符合率为100%。结论 LAMP由于具有快速和无需特殊仪器的优点,可广泛用于肛拭子标本志贺菌和EIEC的检测。
- 张如胜宋克云欧新华陈静芳姚栋苏良孙边成
- 关键词：环介导等温扩增志贺菌属大肠杆菌
- MALDI-TOF MS用于沙门菌食源性疾病暴发同源性分析初步研究被引量：1
- 2023年
- 目的评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)技术用于沙门菌食源性疾病暴发同源性分析的效果,为沙门菌暴发疫情处置提供技术支持。方法收集长沙市近年5起食源性疾病暴发事件相关的42株沙门菌,进行生化鉴定和血清学分型并对其进行脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)分型分析。应用MALDI-TOF MS技术采集42株沙门菌质谱数据构建主要谱图后进行质谱鉴定,并对42株沙门菌进行相关距离聚类同源分析,再对不同事件的相关沙门菌分4次分别进行不加参考菌株和加入参考菌株的聚类同源分析,并与PFGE聚类分析结果进行比较。结果29份食品中分离出5株沙门菌,62份病人标本中分离出37株沙门菌,42株沙门菌的质谱鉴定结果和生化鉴定结果符合率为100%,血清学鉴定分为3个血清型,肠炎沙门菌22株,布伦登卢普沙门菌17株,鼠伤寒沙门菌3株。PFGE将5次事件的沙门菌分成了4个内部完全一致的分支,42株沙门菌的质谱聚类在300的相对相关距离水平上分为3个不同的分支,和血清学分型一致,和PFGE聚类分型大致相同。4次无参考菌株的质谱分别聚类同源分析不能将相关菌株聚类为预期的簇,但加入参考菌株后的质谱聚类同源分析能将同一事件中的菌株聚类成相似度接近100%的一簇,和PFGE分型结果高度一致。结论MALDI-TOF MS聚类分析可在一定范围内应用于沙门菌食源性疾病暴发同源性的病原学确认,可作为PFGE同源性分析的一种较好补充方法,但其不能直接将不同平台数据进行比较。
- 苏良宋迎春杨柳青张玉娟刘晓蕾
- 关键词：沙门菌基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱脉冲场凝胶电泳聚类分析食源性疾病
- 环介导等温扩增(LAMP)技术检测沙门菌属方法的建立被引量：19
- 2008年
- 建立一种检测沙门菌属快速敏感的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法。针对沙门菌属侵袭蛋白(invA)基因序列的六个区域设计四条LAMP引物,65℃保温约60min,完成对沙门菌属的扩增,扩增产物经电泳和酶切鉴定。利用LAMP和普通PCR方法同时检测4株沙门菌和9株非沙门菌(对照组)来验证LAMP方法的特异性;将肠炎沙门菌菌液做一系列10倍稀释后用LAMP和PCR方法进行检测来比较两者敏感性。4株沙门菌扩增出LAMP特征性梯状条带,9株非沙门菌没有出现LAMP扩增,LAMP产物的特异性通过限制性内切酶得到了证实;LAMP检测沙门菌属的特异性与普通PCR相同,但其敏感性比普通PCR高10倍,LAMP检测沙门菌属的检测下限为10cfu/ml,PCR检测下限为100cfu/ml。LAMP检测速度相比PCR更快速,在60min内即可完成扩增反应。建立了一个快速、特异、敏感的沙门菌属LAMP检测方法。
- 欧新华张如胜宋克云苏良魏泉德
- 关键词：环介导等温扩增沙门菌属
- 10种食源性疾病病原体高通量LAMP分子鉴别检测体系的建立及应用被引量：3
- 2011年
- 目的建立一种LAMP分子鉴别检测体系,应用于10种食源性疾病病原体的分子鉴别检测。方法针对8种细菌（沙门菌属、志贺菌属、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、EHEC O157：H7、奇异变形杆菌、霍乱弧菌和单增李斯特菌）和2种病毒（Norwalk病毒和轮状病毒）分别建立LAMP和RT-LAMP方法,分别对25种常见肠道细菌和病毒进行LAMP扩增,水浴箱内65℃扩增60 min（LAMP）或120 min（RT-LAMP）,扩增完成后利用电泳和肉眼进行结果判断。对365份食源性疾病患者呕吐物、肛拭子和食品等标本进行10种食源性疾病病原体LAMP分子检测。结果 10种食源性疾病病原体LAMP或RT-LAMP方法均只对靶病原体出现阳性结果,电泳显示为LAMP特异性梯状条带,加SYBRGreen I后肉眼观察反应液变为绿色;8种细菌性病原体LAMP检测方法的敏感度为3×100~1.2×102cfu/ml,其中6种LAMP方法敏感度高于PCR方法,其他病原体（霍乱弧菌、EHEC O157：H7、Norwalk病毒和轮状病毒）敏感度与PCR方法相同。从365份标本中检出沙门菌属11份、志贺菌属6份、金黄色葡萄球菌13份、EHEC O157：H7 2份、副溶血性弧菌2份、单增李斯特菌2份、Norwalk病毒12份和轮状病毒7份。结论建立了一个较为完整的LAMP分子鉴别检测体系,可以在一台水浴箱内同时对10种食源性疾病病原体进行高通量的分子鉴别检测,具有快速、不需要特殊仪器和肉眼判断结果的优势,适合基层单位的实验室开展食源性疾病的分子鉴别诊断。
- 孙边成张如胜宋克云欧新华姚栋苏良叶文陈法明
- 关键词：食源性疾病病原体环介导等温扩增高通量
- 长沙市流行性感冒病毒病原学检测结果分析被引量：8
- 2006年
- 目的 对长沙市2004～2006年4月流行性感冒病毒（简称流感）的病原学监测结果进行分析。方法 采集流感样病例（ILI）的鼻咽拭子标本用狗肾细胞（MDCK）进行病毒分离培养，采用血凝（HA）及血凝抑制（HI）方法进行流感病毒初筛及分型鉴定。结果 二年共监测ILI鼻咽拭子标本470份，分离到流感病毒64株，阳性分离率为13．62％，经分型鉴定A（H3N2）亚型21株，A（H1N1）亚型22株，B型21株，7株因HA〈1：8或病毒丢失未能分型；疑似流感疫情ILI鼻咽拭子标本178份，分离到流感病毒44株，阳性分离率为24．72％，经分型鉴定A（H3N2）亚型10株，A（H1N1）亚型13株，B型21株。结论 长沙市流感流行株为A（H1N1）亚型，A（H3N2）亚型及B型，未发现流感变异株。
- 袁洁苏良叶文宋克云欧新华
- RT-LAMP快速检测Norwalk病毒GⅡ型被引量：10
- 2009年
- 建立一种检测Norwalk病毒GⅡ型快速、敏感的一步逆转录环介导等温扩增(Reverse transcription-loop-me-diated isothermal amplification,RT-LAMP)方法。针对Norwalk病毒RNA聚合酶基因特异性序列的6个区域设计4条LAMP引物,65℃保温约120 min,完成对Norwalk病毒GⅡ的扩增,扩增产物通过肉眼观察、SYBR GreenI染色、凝胶电泳及酶切消化进行鉴定。利用RT-LAMP和RT-PCR方法同时检测48份Norwalk病毒GⅡ粪便标本和12份A组轮状病毒标本来验证RT-LAMP方法的特异性;将Norwalk病毒GⅡ RNA一系列稀释后用RT-LAMP和RT-PCR方法进行检测来比较两者敏感性。46份Norwalk病毒GⅡ粪便标本出现LAMP扩增反应:通过肉眼观察、SYBR Green Ⅰ染色和凝胶电泳均能观察到LAMP扩增产物的存在,LAMP产物的特异性通过酶切消化加以证实;2份Norwalk病毒GⅡ粪便标本和12份A组轮状病毒标本未出现RT-LAMP扩增。RT-LAMP与RT-PCR特异性符合率为100%,RT-LAMP和RT-PCR检测Norwalk病毒GⅡ的检测下限均为15.6pg/管。与RT-PCR相比较,一步RT-LAMP法检测粪便中Norwalk病毒GⅡ的方法是一种快速、敏感、特异且准确的方法,有望用于快速检测感染性腹泻暴发时粪便中的Norwalk病毒GⅡ。
- 宋克云张如胜欧新华苏良杨秋林
- 关键词：RNA聚合酶
