蔡磊 作品数:12 被引量:19 H指数:3 供职机构: 苏州大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 江苏省普通高校研究生科研创新计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 理学 化学工程 更多>>
人鼠嵌合B7-2抗体对狼疮样肾病型的免疫干预效应及分子机制研究 系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)是以产生多种自身抗体,全身多系统、多器官受累为特征的自身免疫性疾病,狼疮样肾病(lupus nephritis,LN)是该疾病最严重的并发... 蔡磊关键词:B7-2 免疫干预 文献传递 降植烷诱导小鼠类风湿关节炎的模型 被引量:7 2015年 目的:利用降植烷构建一种模拟人类风湿性关节炎发病过程的小鼠模型。方法:6-8周雌性BALB/c小鼠30只,随机分为模型组和对照组,每组15只。模型组于0周、9周、18周时经腹腔注射0.5 ml降植烷;对照组注射0.5 ml生理盐水。观察各组小鼠后足足掌厚度变化,并对关节炎的肿胀程度进行评分;H&E染色评估滑膜增生和炎性细胞浸润程度;流式细胞术方法检测小鼠脾脏中巨噬细胞、树突状细胞、中性粒细胞、T细胞和B细胞的亚群变化。结果:21周时,模型组有11只小鼠出现足爪红肿,足掌平均厚度为(2.90±0.51)mm,与对照组(1.29±0.47)mm比较,差异有统计学意义(P〈0.05);关节炎评分为9.55±2.80。H&E染色结果显示模型组胫骨远端骨小梁吸收破坏,累及骨皮质,关节软骨可见坏死脱落、纤维化,呈现出明显的类风湿关节炎病理改变。流式细胞术分析结果显示,造模21周时,脾脏细胞中CD11b、CD11c和GR1表达明显增加,提示巨噬细胞、树突状细胞和中性粒细胞亚群数量增加;同时,CD4、CD8、CD154的分子表达也明显上调,与对照组比较,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论:经腹腔注射降植烷能够成功诱导小鼠关节炎,并产生与RA患者类似的组织病理和免疫学改变。降植烷诱导的小鼠关节炎模型,能够较为准确地模拟临床类风湿关节炎的发病过程。 陶云霞 蔡磊 沈辉 朱玉强 邱玉华 顾巧丽 耿德春 施勤关键词:降植烷 类风湿关节炎 小鼠模型 慢性移植物抗宿主病狼疮样肾炎小鼠模型的建立及免疫病理学鉴定 被引量:4 2014年 对慢性移植物抗宿主病狼疮样肾炎小鼠模型进行免疫学、血清学及肾脏病理损伤鉴定。以考察该模型作为系统性红斑狼疮(SLE)疾病模型的可靠性。将亲代雌性BALB/c小鼠脾脏细胞悬液经尾静脉注射(C57BL/J6×BALB/c)F1代小鼠,每隔3d注射1次,共4次。建模第7d,采用免疫荧光及流式细胞仪分析小鼠脾脏中抗原提呈细胞(APC)及抗体形成细胞的百分率。每隔2周检测血清中anti-dsDNA抗体及ANA;每隔4周检测尿蛋白含量的动态变化;建模12周终止实验,取肾脏组织作HE染色观察病理改变,直接免疫荧光法检测免疫复合物(IC)沉积以及透射电镜观察肾小球超微结构变化。流式细胞术的分析结果显示,造模后7d脾脏中膜型CD11b+、CD11c+及Gr1+细胞的百分率较对照组明显升高(P<0.05),同时抗体形成细胞B220+表面CD21、CD23、CD80及CD86分子的表达均上调(P<0.05);建模2周时,血清anti-dsDNA抗体出现阳性,4周时ANA出现阳性;12周时80%的小鼠存在蛋白尿,蛋白含量++^++++;肾小球体积增大并有大量炎性细胞浸润;肾脏IC沉积;透射电镜下可见肾基底膜节段性增厚,脏层上皮细胞和基底膜之间存在大量的电子致密物。慢性移植物抗宿主病小鼠狼疮样肾炎模型具有人类SLE相似的免疫细胞异常活化及肾脏病理损伤的特征性表现,用于相关研究具有可靠性。 韩莲花 蔡磊 朱莹 朱华亭 夏永洁 邱玉华关键词:慢性移植物抗宿主病 狼疮样肾炎 动物模型 钙钛矿发光二极管无辐射损耗机理及效率提升途径研究 金属卤化钙钛矿材料因其优异的载流子迁移率、可调且半高宽窄的发光光谱、可溶液加工等优势,在发光领域展现出了巨大的潜力。钙钛矿发光二极管(perovskite light-emitting diode,PeLED)的外量子效... 蔡磊关键词:钙钛矿 发光二极管 小鼠B7-1基因RNAi慢病毒载体的构建及其沉默效应研究 2016年 目的:构建介导小鼠B7-1基因RNAi的慢病毒载体,研究其对L929细胞表面B7-1分子表达的沉默效应。方法:从小鼠B7-1基因编码区选择3段RNA干扰靶序列,制备转录双发夹RNA的前体DNA,并克隆至慢病毒穿梭质粒,构建B7-1的RNAi慢病毒穿梭载体,测序鉴定。将重组质粒及辅助质粒共转染293T细胞产生慢病毒,经超速离心获得浓缩慢病毒颗粒。通过测定293T细胞GFP表达水平确定病毒滴度,流式细胞术检测感染效率以及对细胞表面B7-1的干扰效率。病毒感染细胞经嘌呤霉素筛选及克隆培养获得小鼠B7-1基因RNAi慢病毒稳定感染的L929细胞,流式细胞术分析细胞中GFP及B7-1分子表达的状况;将感染细胞与分离的小鼠脾脏T细胞混合培养,分析B7-1稳定沉默细胞刺激T细胞增殖的能力。结果:成功了构建小鼠B7-1基因RNA干扰的重组慢病毒载体;获得了滴度达(3~5)×10~8TU/ml的浓缩重组慢病毒,重组慢病毒可有效感染L929细胞介导GFP表达以及沉默其表面的B7-1。经筛选获得慢病毒稳定感染的L929细胞,该细胞表面B7-1分子表达受到抑制,刺激T细胞增殖的能力显著下降(P〈0.05)。结论:构建了能够高效感染及沉默小鼠B7-1分子的RNAi慢病毒载体,该载体可稳定沉默L929细胞表面B7-1分子表达,抑制B7-1/CD28信号诱导的T细胞增殖效应。 孔永 沈立军 王婧 朱莹 蔡磊 邱玉华 黄莉关键词:B7-1 RNAI 慢病毒 共刺激信号 L929 致敏原剂量对哮喘模型免疫细胞活化及肺组织损伤的影响 2014年 目的研究致敏原的剂量对哮喘模型免疫细胞活化及肺组织损伤的影响。方法以卵蛋白为致敏原,采用腹腔注射[高剂量组1 mg/(只·次),低剂量组0.1 mg/(只·次)]联合雾化吸入建立小鼠哮喘模型。ELISA分析血液中过敏相关免疫球蛋白IgE及细胞因子IL-4与IFN-γ的水平,免疫荧光及流式细胞术分析脾脏免疫细胞(包括T、B和DC细胞)的活化程度,HE染色分析肺组织的损伤情况。结果模型组小鼠血液中IgE及IL-4的水平明显高于对照组(P<0.05),且高剂量组高于低剂量组(P<0.05)。但IFN-γ的水平模型组均低于对照组(P<0.05),高、低剂量组间无差异(P>0.05)。模型组小鼠脾脏细胞膜型CD28、CD86、CD80、CD40和MHC-Ⅱ的表达均高于对照组(P<0.05),且高剂量组高于低剂量组(P<0.05)。显微镜下观察模型组小鼠肺组织出现炎性细胞浸润及支气管壁增厚等病理改变,高剂量组更为严重。结论哮喘引发的免疫细胞活化和肺组织病理损伤与致敏原的剂量呈正相关。 朱莹 蔡磊 孔永 王婧 朱华亭 夏永洁 彭丽 邱玉华关键词:卵蛋白 免疫细胞 共刺激分子 B7-1人-鼠嵌合抗体对小鼠狼疮样肾炎模型的免疫干预效应 被引量:4 2015年 目的:在运用化学法建立小鼠狼疮样肾炎模型并对其进行生物学鉴定的基础上,探讨B7-1人-鼠嵌合抗体阻断B7/D28信号通路对小鼠狼疮样肾炎模型病理损伤的逆转效应。方法:取6周龄雌性C57BL/6J小鼠,予一次性腹腔注射Pristane 0.5ml/只,每月定期检测小鼠的尿蛋白、ANA及肾脏病理学改变。取尿蛋白含量达到++,ANA荧光强度达到++的小鼠随机分为3组,每组5只。抗体干预组用B7-1人-鼠嵌合抗体经眼眶静脉序贯给药,阳性对照组注射免疫抑制剂CTX,阴性对照组注射人同型Ig G。每月定期检测尿蛋白及ANA,干预至3个月时,处死小鼠,取肾脏进行H&E染色分析,免疫复合物(IC)检测及透射电镜观察。结果:Pristane诱导至4个月时,80%的小鼠尿蛋白含量达到+^+++,血清ANA荧光强度为++^+++,出现尿蛋白及ANA的小鼠,其肾小球炎性细胞侵润,肾小管上皮样细胞可见水肿样变性、血管充血明显,纤维组织增生。抗体干预后,尿蛋白逐渐由++^+++降为±^++,ANA由++^+++降为+^++。与阴性对照组比较具有统计学差异(P<0.01)。肾脏HE染色分析的结果显示,抗体干预组肾小球炎性细胞侵润及肾小管充血等表现均得到明显改善。免疫荧光染色可见抗体干预组抗原抗体复合物(IC)的荧光强度明显减弱。经透射电镜观察,抗体干预组与阴性对照组相比,肾小球的电子致密物沉积减少,基底膜厚度趋于均匀。结论:B7-1抗体通过抑制B7-1/CD28信号通路下调机体的免疫应答,减少自身抗体的产生,对自身免疫造成的病理损伤具有逆转作用。 沈辉 朱玉强 孔永 王婧 朱华亭 於葛华 蔡磊 朱莹 王志瑶 邱玉华关键词:B7-1 人-鼠嵌合抗体 降植烷 狼疮样肾炎 抗核抗体 人鼠嵌合B7-2抗体对狼疮样肾病模型的免疫干预效应及分子机制研究 系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)是以产生多种自身抗体,全身多系统、多器官受累为特征的自身免疫性疾病,狼疮样肾病(lupus nephritis,LN)是该疾病最严重的并发... 蔡磊关键词:抗原递呈细胞 免疫干预 文献传递 CXC趋化因子受体3的单克隆抗体抑制体外培养的MCF-7细胞和HepG2细胞的增殖及迁移 2015年 目的研究CXC趋化因子受体3(CXCR3)单克隆抗体(mAb)对MCF-7人乳腺癌细胞和HepG2人肝癌细胞体外增殖及迁移的影响。方法诱生腹水法制备CXCR3 m Ab;流式细胞术筛选高表达CXCR3的MCF-7细胞和HepG2细胞;MTT法检测CXCR3 mAb对MCF-7细胞和HepG2细胞增殖及干扰素诱导的T细胞α趋化因子(I-TAC)对MCF-7细胞和HepG2细胞促增殖的影响;TranswellTM法研究CXCR3 mAb对MCF-7细胞和HepG2细胞迁移及I-TAC对MCF-7细胞和HepG2细胞促迁移的影响。结果 MCF-7细胞和HepG2细胞CXCR3的阳性表达率分别为83.5%和96.2%;50μg/m L CXCR3 m Ab能够显著的抑制MCF-7细胞和HepG2细胞的增殖并抑制I-TAC对MCF-7细胞和HepG2细胞的促增殖作用;50μg/m L CXCR3 m Ab可抑制MCF-7细胞和HepG2细胞的迁移,并抑制I-TAC对MCF-7细胞和HepG2细胞促迁移作用。结论 CXCR3 mAb能够显著地抑制高表达CXCR3的肿瘤细胞的增殖及迁移。 朱玉强 王志遥 朱莹 王婧 蔡磊 沈辉 孔永 邱玉华关键词:迁移 抗人B7-1及B7-2双特异性抗体的构建、表达及与抗原结合的特性分析 2015年 目的:构建及表达抗人B7-1及B7-2双特异性抗体(anti-B7-1/B7-2-Bs Ab),并分析其与相应抗原结合的特性。方法:采用PCR的方法分别从重组质粒中克隆出抗人B7-1及B7-2单链抗体基因,将其克隆入p IRES2-EGFP表达载体,并用6×His为纯化的标签。用脂质体法将两个基因转染入中华仓鼠卵巢细胞(CHO),经G418加压筛选高表达株,扩大培养并收集上清纯化。分析抗体对膜型B7-1及B7-2的识别及与其相应抗原的结合能力。以天然高表达B7-1及B7-2分子的Raji细胞用丝裂霉素处理后作为APC,人PBMC为效应细胞,分析抗体通过阻断B7-CD28共刺激信号对PBMC增殖的影响。结果:获得了稳定表达抗人B7-1/B7-2-Bs Ab的CHO细胞株及相应的抗体。该抗体与B7-1及B7-2基因转染细胞株L929-B7-1及L929-B7-2的阳性结合率分别为99.5%及62.0%。Anti-B7-1/B7-2-Bs Ab对抗人B7-1及B7-2单链抗体的竞争结合率分别为0.4%及32.4%。Anti-B7-1/B7-2-Bs Ab通过阻断B7-CD28共刺激信号使PBMC的增殖效应仅为阴性对照组的59.7%。结论:成功构建了稳定分泌抗人B7-1/B7-2-Bs Ab的CHO细胞株(命名为SA-VI)。该抗体可以识别B7-1及B7-2分子并具有良好的生物学活性。 沈立军 孔永 王婧 朱莹 蔡磊 朱玉强 沈辉 邱玉华关键词:B7-1 B7-2 双特异性抗体 CHO 共表达