袁永辉
- 作品数：11 被引量：44H指数：5
- 供职机构：同济医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“九五”国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 低氧对肺血管周细胞增殖及分化的影响被引量：13
- 1999年
- 目的研究低氧对肺血管周细胞增殖及分化的影响，探讨低氧性肺动脉高压时无肌型肺动脉肌化的细胞来源。方法实验分为４组：直接低氧组（Ｈ组），常氧组（Ｎ组），低氧内皮细胞条件培养液组（ＨＥＣＣＭ组），常氧内皮细胞条件培养液组（ＮＥＣＣＭ组）。应用细胞培养、３Ｈ胸腺嘧啶核苷（３ＨＴｄＲ）、免疫细胞化学、图像分析等技术，研究低氧对肺血管周细胞３ＨＴｄＲ的掺入量、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）、α平滑肌肌动蛋白（αＳＭＡｃｔｉｎ）表达的影响。结果Ｈ组周细胞３ＨＴｄＲ的掺入量、ＰＣＮＡ及αＳＭＡｃｔｉｎ的表达量分别是Ｎ组的２．１６倍（Ｐ＜０．０１）、１．１６倍（Ｐ＜０．０１）及１．１１倍（Ｐ＜０．０５），ＨＥＣＣＭ组周细胞３ＨＴｄＲ的掺入量、ＰＣＮＡ及αＳＭＡｃｔｉｎ的表达量分别是ＮＥＣＣＭ组的１．８倍（Ｐ＜０．０１）、１．１５倍（Ｐ＜０．０１）及１．１２倍（Ｐ＜０．０５）。结论低氧可直接或刺激内皮细胞分泌某些细胞因子促进肺血管周细胞增殖、并向平滑肌样细胞分化。肺血管周细胞的增殖。
- 王林熊密车东媛袁永辉刘绍春
- 关键词：低氧肺动脉高压
- DDPH对猪肺动脉平滑肌细胞PDGF·BB和bFGF表达的影响：免疫细胞化学研究被引量：1
- 1995年
- ＤＤＰＨ［１－（２．６－二甲基苯乙氧基）－２－（３．４二甲氧基苯乙胺基）丙烷盐酸盐］是南京药科大学合成的降压新化合物，也具有降低肺动脉高压和抑制肺动脉平滑肌细胞增殖作用。本实验用细胞培养、免疫细胞化学、图像分析、３Ｈ－ＴｄＲ、细胞周期测定等方法，进一步探讨ＤＤＰＨ对缺氧性肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣＳ）增殖的抑制机制。结果：缺氧促进肺动脉内皮细胞（ＰＡＥＣｓ）的ＰＤＧＦ·ＢＢ和ｂＦＧＦ两种生长因子的表达（积分光密度ＯＤ值）增高。缺氧内皮细胞条件培养液（ＨＥＣＣＭ）能促进ＰＡＳＭＣＳ的ＰＤＧＦ·ＢＢ的ＯＤ值增高，ｂＦＧＦ的ＯＤ值无明显改变。加药组（ＨＥＣ－ＣＭ＋ＤＤＰＨ）的ＰＤＧＦ·ＢＢ和ｂＦＧＦ的ＯＤ值均显著降低，尤以ＰＤＧＦ·ＢＢ的ＯＤ值减少最多．提示：ＤＤＰＨ能抑制ＨＥＣＣＭ引起ＰＡＳＭＣＳ的ＰＤＧＦ·ＢＢ和ｂＦＧＦ表达增多和细胞增殖。结果与大鼠实验观察相符。
- 刘绍春车东媛袁永辉
- 关键词：免疫细胞化学
- 肺血管周细胞增生分化与慢性肺动脉高压发生的关系被引量：3
- 1999年
- 为证实周细胞增生和分化与慢性肺动脉高压的关系，用ＭＴＴ法、流式细胞术及免疫组化分别检测低氧对培养的大鼠肺血管周细胞的增生及活性、细胞周期和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ） 表达的影响。同时复制慢性低氧性肺动脉高压大鼠模型，定量分析腺泡内肺动脉（ＩＡＰＡ）三种类型血管的构成比及其结构改变。结果表明，低氧组周细胞的ＭＴＴ和ＰＣＮＡ吸光度均较常氧组高。细胞周期中， 处于Ｇ０、Ｇ１ 期的细胞百分值， 低氧组较常氧组低， 但Ｓ期细胞百分值升高。低氧组大鼠ＩＡＰＡ内环肌型动脉构成比和α－ＳＭ－ａｃｔｉｎ 抗原表达的吸光度较常氧组者高。结论： 低氧促进肺血管周细胞的增生。
- 熊密张燕车东媛袁永辉刘绍春
- 关键词：肺动脉高压肺血管
- 中药814对肺炎克雷伯杆菌诱发大鼠慢性阻塞性肺疾病的影响被引量：8
- 1999年
- 为观察中药８１４ 对肺炎克雷伯杆菌诱发大鼠慢性阻塞性肺疾病（ＣＯＰＤ） 是否有影响， 用经鼻腔注入， 反复感染法建立大鼠ＣＯＰＤ模型。大鼠分为正常对照、感染、预防治疗、一般治疗和假治疗组。预防治疗组和一般治疗组大鼠分别于细菌感染前３ ｄ 和细菌感染后第４ 周开始用中药８１４灌胃治疗。结果表明， 两治疗组尤其是前者大鼠气管、细支气管和肺泡上皮细胞损伤轻微， 细支气管壁和肺间质炎症亦较感染组为轻。与感染组相比较，预防治疗组第８周起和一般治疗组第１６ 周大鼠单位面积内平均肺泡数增加 （Ｐ＜ ０．０５）， 第１６ 周， 预防治疗组大鼠血氧分压比感染组增高（Ｐ＜ ０．０５）， 血ＣＯ２ 分压降低 （Ｐ＜ ０．０５）， 两指标均接近正常水平。结果提示， 中药８１４
- 许浒熊密车东媛黄庆华赵时宇袁永辉余尚斌
- 关键词：阻塞性肺疾病克雷伯杆菌中药814COPD
- 新生大鼠肺微血管壁周细胞的培养方法及其生长特性被引量：5
- 2000年
- 用 型胶原酶消化和微孔过滤法分离新生大鼠肺微血管段的内皮细胞和周细胞 ,再用富含 PDGF的选择性条件培养液刺激周细胞的生长和抑制内皮细胞生长而建立了肺血管壁周细胞的培养方法。 S180细胞条件培养液(SCCM)的灭活 ,分离、纯化微血管段 ,静置及筛选周细胞是获得新生大鼠肺血管壁周细胞纯培养的关键。用该方法培养的第 5代周细胞 ,经相差显微镜和免疫细胞化学法检查 ,纯度达 98%以上 ;细胞倍增时间为 5 4.3h,且在 12代以内 ,细胞形态结构特征保持稳定 。
- 袁永辉王林车东媛熊密
- 关键词：周细胞细胞培养
- 一种改良的猪肺动脉干平滑肌细胞培养方法被引量：2
- 2000年
- 在本室已建立的肺动脉平滑肌细胞 (PASMC)培养方法的基础上作了改进 :1用含 40 0 ml/ L PASMC条件培养液和 10 0 ml/ L胎牛血清 (FBS)的 PASMC混合培养液 (PASMCMM)代替含 10 0 m l/ L FBS的 M199培养液 ;2传代时间选在 90 %长满 ,即 PASMC处在对数生长期末而停滞期前 ;3用 5～ 8滴 /瓶混合消化液传代 ,然后用含 10 0m l/ L小牛血清的 M199培养液终止反应 ,并使其贴壁 ,第 2 d改换成 PASMCMM。经此法培养的 PASMC具有生长快、分散更均匀的特点。细胞倍增时间 (4 5 .6 h)较改进前 (5 6 .8h)缩短 11.2 h。改进后的培养方法更加简便、实用、高效。因此是一种快速、并可大量获取优质
- 袁永辉
- 关键词：肺动脉干平滑肌细胞
- 低氧对体外培养的肺血管周细胞免疫表型的影响被引量：1
- 2000年
- 用细胞培养、免疫细胞化学染色、图像分析及流式细胞术观察低氧和猪肺动脉缺氧内皮细胞条件培养液(HECCM)对体外培养的新生大鼠肺血管周细胞 (PC)α- SM- actin、 CD34 、 S- 10 0和 PCNA的表达及细胞周期的影响。结果发现 ,低氧和 HECCM可促进 PC表达α- SM- actin和 PCNA,而抑制 CD34 和 S- 10 0的合成 ,促进 PC由静止期 (G0 /G1 期 )进入 DNA合成期 (S期 )及有丝分裂期 (G2 +M期 )。提示 ,低氧不仅能促进 PC增殖 ,而且还可促进其向平滑肌样细胞转化。故 PC是慢性低氧性肺动脉高压时无肌型细动脉肌化的重要细胞来源。
- 袁永辉王林熊密车东媛
- 关键词：肺动脉高压低氧免疫表型
- 1-(2,6-二甲基苯氧基)-2-(3,4-二甲氧基苯乙氨基)丙烷盐酸盐对肺血管周细胞增殖与免疫表型的影响
- 2001年
- 目的 观察具有抗高血压作用新药 1 (2 ,6 二甲基苯氧基 ) 2 (3,4 二甲氧基苯乙氨基 )丙烷盐酸盐 (DDPH)对低氧内皮细胞条件培养液 (HECCM)诱导的大鼠肺血管周细胞 (PC)增殖和免疫表型转化有无抑制作用 ,为开发具有降压和防止肺血管构型重建新药物提供实验依据。方法 实验根据不同条件培养液分为 4组 :常氧内皮细胞条件培养液 (NECCM)组 ,NECCM +DDPH组 ,HECCM组和HECCM +DDPH组。应用细胞培养、免疫细胞化学染色、图像分析及流式细胞术观察HECCM和DDPH对PC平滑肌肌动蛋白 (α SM actin)和增殖细胞核抗原 (PCNA)的表达及细胞周期的影响。结果 ①HECCM组PCα SM actin呈强阳性表达 ,CD34 和S 10 0呈阴性反应 ,而其它各组PCα SM actin、CD34及S 10 0均呈阳性表达 ;②HECCM组PCα SM actin和PCNA的表达量分别是NECCM组的 1 32倍 (F=11 0 9,P =0 0 0 0 1)和 1 2 4倍 (F =2 89,P =0 0 2 5 7) ,是HECCM +DDPH组的 1 30倍 (F =3 6 5 ,P =0 0 0 70 )和 1 2 1倍 (F =2 6 3,P =0 0 414) ;③HECCM组PC的G0 G1期细胞百分率分别比NECCM组和HECCM +DDPH组低 11 7%和 9 1% ,S期细胞百分率分别高 5 6 %和 4 2 % ,G2 M期细胞百分率分别高 6 1%和 4 9% ;④DDPH对HECCM引起的PCs合成α SM actin和PCNA增高?
- 袁永辉车东媛熊密
- 关键词：丙烷盐酸盐周细胞降压作用肺动脉高压
- DDPH对缺氧内皮细胞条件培养液致肺动脉平滑肌细胞PDGF mRNA表达的影响
- 1996年
- 利用地高辛标记的ｃＤＮＡ探针，原位检测ＤＤＰＨ［１－（２，６－二甲基苯氧基）－２－（３，４－二甲氧基苯乙胺基）丙烷酸盐］对缺氧内皮细胞条件培养液致猪ＰＡＳＭＣＰＤＧＦ基因表达的影响。实验分６组：常氧、低氧无血清培养液组（Ｎ、Ｈ组），常氧、低氧内皮细胞条件培养液组（ＮＥＣＣＭ、ＨＥＣＣＭ组），ＮＥＣＣＭ＋ＤＤＰＨ、ＨＥＣＣＭ＋ＤＤＰＨ组。用自动图像分析仪检测各组细胞ＰＤＧＦ－Ａ和－Ｂ链杂交产物的平均光密度（ＯＤ）值。结果：ＨＥＣＣＭ组ＰＤＧＦ－Ａ和－Ｂ链ｍＲＮＡ表达量分别是ＮＥＣＣＭ组的１．４０、１．４９倍（Ｐ＜０．０１），分别是Ｎ组的１．８倍、１．７倍（Ｐ＜０．０１），ＨＥＣＣＭ＋ＤＤＰＨ组ＰＤＧＦ－Ａ、－Ｂ链ｍＲＮＡ表达量分别为ＨＥＣＣＭ的０．７３倍、０．６５倍（Ｐ＜０．０１），与ＮＥＣＣＭ组相比，均无显著差异。提示ＤＤＰＨ在ＰＤＧＦ基因转录水平抑制ＨＥＣＣＭ诱导的ＰＡＳＭＣ的增殖。
- 张燕李丰袁永辉李文英车东媛
- 关键词：缺氧平滑肌细胞核酸原位杂交
- 猪肺动脉壁细胞培养方法在肺血管构形重建机制研究中的应用被引量：8
- 1995年
- 用胰蛋白酶和胶原酶消化法和组织贴块法培养猪肺动脉干内皮细胞和平滑肌细胞。方法简便易行，成功率高。培养的第２～３代细胞适用于缺氧实验和药物作用机制的研究。并可用于流式细胞术、同位素标记、单层细胞超微结构、免疫细胞化学和图像分析、原位杂交等的研究。因此，本方法培养的细胞可作为探讨缺氧引起肺血管构形重建及抗肺动脉高压药物疗效的一个体外研究模型。
- 袁永辉车东媛
- 关键词：肺动脉内皮细胞细胞培养
