谢柏臻
- 作品数：20 被引量：91H指数：6
- 供职机构：厦门大学附属中山医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- siRNA抑制人高迁移率族蛋白1表达对前列腺癌PC-3增殖的影响被引量：6
- 2008年
- 目的:研究小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制高迁移率族蛋白1(HMGB1)基因的表达对人前列腺癌细胞PC-3增殖的影响。方法:构建真核表达载体Pgenesil-1/HMGB1 siRNA,在脂质体Lipofectamine 2000的介导下转染前列腺癌PC-3细胞株,通过RT-PCR和Western Blot检测HMGB1的mRNA及蛋白质的变化;流式细胞仪检测细胞周期;噻唑蓝(MTT)检测细胞生长曲线。观察转染后PC-3细胞HMGB1基因表达和体外增殖活性的变化。结果:成功构建siRNA表达载体Pgenesil-1/HMGB1 siRNA,所获表达载体转染可使PC-3细胞HMGB1 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05),并能有效抑制PC-3增殖活性(P<0.05)。结论:应用siRNA干扰技术能有效的抑制HMGB1基因的表达,同时也可有效抑制癌细胞的体外增殖活性,为肿瘤的生物学治疗提供新思路。
- 宋登新陈安民郭风劲谢柏臻廖晖祝文涛王江
- 关键词：高迁移率族蛋白1SIRNA人前列腺癌细胞
- 下调Ezrin表达对前列腺癌细胞增殖和运动能力的影响被引量：4
- 2008年
- 目的研究Ezrin蛋白对前列腺癌细胞增殖和运动能力的影响。方法采用前列腺癌PC-3细胞系作为研究对象,针对Ezrin蛋白的编码序列设计小干扰RNA片段,重组为shRNA表达载体转染入细胞,筛选出稳定表达的细胞克隆,RT-PCR和Western blot分别检测Ezrin在基因和蛋白水平表达的变化,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,Transwell法检测侵袭能力的变化。结果PCR和Western blot显示shRNA对Ezrin在基因和蛋白水平均有显著的下调作用,转染后的前列腺癌细胞生长速度明显减慢,细胞周期显示处于分裂期的细胞比例由(24.58±4.23)%下降到(18.65±2.21)%,处于G1期的细胞数量则由(58.69±3.48)%上升到(66.54±4.13)%。穿过人工基底膜的细胞数量也由(38.6±5.4)减少为(24.5±2.7)(P<0.01)。结论Ezrin对于前列腺癌细胞的增殖和运动能力有重要影响,可能成为肿瘤治疗的重要靶点。
- 谢柏臻陈安民郭风劲宋登新朱波祁军陈超
- 关键词：EZRINSHRNA前列腺癌
- Ezrin shRNA联合HSP70对骨肉瘤细胞凋亡和增殖的影响被引量：6
- 2015年
- 目的 探讨Ezrin基因沉默联合热休克蛋白（heat shock protein,HSP）70诱导的免疫杀伤对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用人成骨肉瘤MG63细胞系作为研究对象,将人HSP70和Ezrin-shRNA的DNA片段分别克隆至含CMV和pU6双启动子的表达载体pGFP-V-RS中构建含HSP70和Ezrin-shRNA的真核表达载体pGFP-V-RS-shRNA和pGFP-V-RS-shRNA-HSP70.重组质粒分别转染入细胞,筛选出稳定表达的细胞克隆.荧光显微镜观察细胞形态及转染效果;荧光定量RT-PCR及蛋白印迹western blot检测稳定转染细胞株Eznn和HSP70基因及蛋白水平的变化;采用MTT、流式细胞术检测细胞增殖、凋亡能力变化,Western blot检测凋亡及周期相关蛋白表达量变化;MTT法检测HSP70刺激产生特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对靶肿瘤细胞的杀伤作用.结果 荧光图像及基因和蛋白表达分析证实,首次成功构建同时沉默Ezrin和过表达HSP70的特异性载体.较单纯沉默Ezrin,同时过表达HSP70会在一定程度上减弱沉默Ezrin蛋白促进细胞凋亡和抑制增殖的效果,但与对照细胞相比,M63细胞凋亡率仍明显上升,自11.01％±0.22％上升至24.28％±0.50％,增殖速度则自395.14％±2.24％减少至310.00％±2.83％.另外,Western blot检测发现Ezrin-shRNA可促进凋亡基因Bax的表达,相反可降低抗凋亡基因Bcl-2和细胞周期蛋白Cyclin D1的表达.而Ezrin-shRNMHSP70组较Ezrin-shRNA组促Bax表达和降低Bcl-2、细胞周期蛋白Cyclin D1表达有所减弱,但较阴性对照组仍有明显效果.MG63细胞的CTL细胞毒杀伤效应显示各效靶浓度下CT＋IL-2＋HSP70组的杀伤活性高于CT＋IL-2组,最高达56.33％±1.95％.结论 同时沉默Ezrin、过表达HSP70既可以促进骨肉瘤细胞凋亡抑制其增殖,并利用HSP70诱导的CTL,增强对靶肿瘤细胞的杀伤作用.
- 姚琴赵慧毅谢柏臻
- 关键词：骨肉瘤HSP70热休克蛋白质类
- 大鼠PTHrP亚基因的克隆及其真核反应质粒的构建被引量：2
- 2008年
- 目的:克隆甲状旁腺相关肽(PTHrP)亚基因PTHrP(1-36)、PTHrP(38-94)和PTHrP(107-139)并构建四环素反应性元件调控的反应质粒pTRE-PTHrP(1-36)、pTRE-PTHrP(38-94)和pTRE-PTHrP(107-139),为调控PTHrP亚克隆在软骨前体细胞中的表达打下基础。方法:提取骨骺干细胞的总RNA,以RT-PCR方法获得带有酶切位点的PTHrP(1-36)、PTHrP(38-94)和PTHrP(107-139)基因片段,扩增的DNA片段分别与含潮霉素筛选标记的四环素反应性元件载体pTRE-2Hyg双酶切后连接,转化扩增后对重组质粒进行提取和酶切、测序鉴定。结果:经酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已经插入重组质粒。结论:成功克隆出PTHrP亚克隆基因PTHrP(1-36)、PTHrP(38-94)和PTHrP(107-139)并构建了反应质粒pTRE-PTHrP(1-36)、pTRE-PTHrP(38-94)和pTRE-PTHrP(107-139),为进一步精确调控PTHrP亚基因的表达奠定了基础。
- 张树威陈安民郭风劲谢柏臻祁军王江易磊李昆朋
- 关键词：骨骺干细胞
- 人前列腺癌细胞骨转移潜能差异表达蛋白的研究被引量：6
- 2008年
- 目的研究人前列腺癌不同骨转移潜能细胞株的差异表达蛋白质图谱，筛选前列腺癌骨转移相关蛋白并探讨其功能。方法应用蛋白质组学和免疫印迹等方法比较和筛选来源相同但具有不同骨转移潜能的前列腺癌细胞株（PC-3／骨转移亚克隆T3B／淋巴结转移亚克隆P2-4）的蛋白质表达差异。构建高迁移率族蛋白1（HMGB1）的真核表达载体Pgenesil-1／HMGB1siRNA转染至高骨转移潜能的T3B细胞中，通过动物实验观察HMGB1对前列腺癌细胞骨转移的影响。结果蛋白质组学技术获得6个有意义的蛋白质，分别参与细胞骨架构成、转录调控、磷酸化过程和物质代谢等功能。成功构建siRNA表达载体Pgenesil-1／HMGB1siRNA，转染后可使T3B细胞HMGB1的蛋白表达水平显著降低（P〈0．05）。动物实验显示，抑制HMGB1表达可明显降低T3B细胞的骨转移能力（P〈0．05）。结论高骨转移潜能的前列腺癌细胞株中存在与前列腺癌骨转移相关的蛋白质，HMGB1与前列腺癌骨转移密切相关。应用siRNA干扰技术能有效地抑制HMGB1基因的表达，同时也能有效抑制前列癌细胞的骨转移能力。
- 宋登新陈安民郭风劲廖晖谢柏臻朱波陈超
- 关键词：前列腺肿瘤肿瘤转移骨肿瘤
- 聚乙二醇-聚乙烯亚胺负载超顺磁纳米Fe_3O_4的合成及其基因转染应用被引量：1
- 2018年
- 采用单甲基醚聚乙二醇(mPEG-OH)改性聚乙烯亚胺(PEI),得到水溶性接枝共聚物聚乙二醇接枝支化聚乙烯亚胺(mPEG-g-PEI),并利用离子交换法制备了负载超顺磁性氧化铁的聚乙二醇-聚乙烯亚胺(PEG-PEISPIO).然后合成了α-羧基-ω-马来酰亚胺聚乙二醇(mal-PEG-COOH)和多功能负载SPIO的抗体-聚乙二醇-聚乙烯亚胺(Ab-PEG-PEI-SPIO).PEG-PEI-SPIO与质粒DNA(pDNA)的复合物(Ab-PEG-PEI-SPIO/pDNA)粒径约105nm.体外实验结果显示:T细胞能特异性地吸收Ab-PEG-PEI负载的SPIO,靶向组在基因转染实验中有较好的效果,在基因转染的过程中可用磁共振手段进行实时无创观测.
- 姚琴谢柏臻裴一花
- 关键词：聚乙烯亚胺聚乙二醇基因转染
- 经椎间孔楔形截骨术治疗胸腰椎后凸畸形被引量：7
- 2016年
- 目的 探讨经椎间孔楔形截骨矫形术结合椎间隙植骨垫高矫正僵硬型胸腰椎后凸畸形的手术方法及其临床效果.方法 2003年1月至2013年6月,采用经椎间孔楔形截骨矫形（transforaminal wedge osteotomy,TWO）治疗脊柱胸腰椎僵硬型胸腰椎后凸畸形52例,男33例,女19例;年龄15～72岁,平均42.3岁.强直性脊柱炎17例,胸腰椎陈旧性骨折25例,陈旧性结核7例,先天性椎体畸形3例.52例患者均表现为腰背部后凸畸形,腰背痛进行性加重,疼痛视觉模拟评分（visual analogue scale,VAS）平均8.6分.24例伴有不同程度的神经功能障碍,明显影响日常生活或工作.手术经椎间孔楔形截骨,矫形后应用椎弓根螺钉加压并椎间隙植骨垫高融合固定.患者手术前后腰背痛采用VAS评分、Oswestry功能障碍指数（Oswestry disability index,ODI）,神经功能障碍采用Frankel分级进行评价.以上指标均与使用PSO截骨组进行比较.结果 术前后凸Cobb角平均为65.6°（31°～137°）改善为术后平均19.2°（8°～35°）,平均矫正率为68.4％,平均手术时间3.8 h（2.2～5.3 h）,术中平均出血量1 220 ml（500～2 900 ml）.术前VAS评分平均（8.6±1.2）分降为末次随访时的平均（1.8±0.5）分;术前Oswestry功能障碍指数75.6％±8.2％降为末次随访18.4％±8.1％;各项的差异均有统计学意义.神经功能Frankel分级术前C级4例、D级20例术后均降为E级.术后平均随访41个月（6～60个月）,术后6个月截骨部位骨性融合率为94.23％,术后3年全部融合,脊柱后凸Cobb角平均丢失5.5°（4°～12°）.与对照PSO组病例对比在平均手术时间、出血量、术后神经功能改善上具有部分优势.结论 经椎间孔入路楔形截骨矫形术具有手术切口出血少、神经干扰少、有限多节段截骨创伤小和截骨面融合率高等优势.
- 华强赵慧毅陈雍君谢柏臻
- 关键词：胸椎腰椎脊柱后凸截骨术脊柱融合术
- 枕寰枢复合体后方静脉结构三维CT解剖被引量：4
- 2011年
- 背景:颅、颈交界区解剖结构复杂,术前观察枕寰枢复合体后方静脉丛是非常必要的。利用三维CT血管成像技术显示这些结构具有明显的优势。目的:观察枕寰枢复合体后方静脉丛结构的解剖特点。方法:随机筛选60例患者头颈部CTA枕寰枢复合体无明确异常资料,回顾性分析其三维CT成像,测量枕寰枢复合体后方静脉结构,描述枕寰枢复合体的空间关系。结果与结论:统计学处理结果显示除寰枢关节后硬膜外静脉丛至中线距离左、右侧有显著性差异(P<0.05)外,枕下海绵窦体积、寰枢外侧关节后硬膜外静脉丛体积、枕下海绵窦与中线距离、颈深静脉C1段水平直径及至中线距离、C1后弓距离的测量值左、右侧,男、女性之间差异均无显著性意义(P>0.05)。提示枕寰枢复合体后方静脉、静脉丛血管丰富、其形态或结构变异复杂,存在不确定的变异。
- 陈雍君谢柏臻陈丽君隋桐赵慧毅段少银
- 关键词：枕寰枢复合体枕下海绵窦CT血管造影
- 异源基因α1,3半乳糖转移酶与增强型绿色荧光蛋白融合对荧光蛋白表达的影响被引量：1
- 2011年
- 目的研究异源(猪)基因α1,3半乳糖转移酶(α1,3GT)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因形成的融合蛋白对其荧光表达量的影响。方法 BamHI,EcoRI酶切pcDNA3.1-α1,3GT重组载体后,回收含α1,3GT的片段,与BamHI、EcoRI酶切回收的pEGFP-N1载体连接,并酶切、测序鉴定重组真核表达载体pEGFP/α1,3GT。将该表达载体转染人肺癌细胞A549、人胚肾细胞293FT,EGFP的表达用荧光显微镜观察和流式细胞仪进行荧光定量分析。结果 pEGFP-N1载体转染A549和293FT后48h的转染阳性率分别80.5﹪和86.5﹪;pEGFP/α1,3GT载体转染A549和293FT细胞后48h的转染效率则为75.8﹪和81.2﹪。A549细胞空白对照,转染pEGFP-N1和pEGFP/α1,3GT载体的A549细胞平均荧光强度分别为1.21、0.956;293FT细胞空白对照,pEGFP-N1和pEGFP/α1,3GT载体的293FT细胞平均荧光表达量分别为7.66、1.00。结论 pEGFP/α1,3GT融合蛋白的生成抑制了绿色荧光蛋白的表达强度。
- 唐晶谢柏臻李鹏飞姚琴赵涣阁卓慧钦刘祖国赵永祥
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白融合蛋白荧光强度
- 鼠骨骺干细胞免疫纯化和pTRE-PTHrP（38-94）反应质粒的构建被引量：6
- 2008年
- 目的免疫纯化新生大鼠骨骺干细胞，克隆甲状旁腺相关蛋白的中间片段PTHrP（38-94）基因并构建四环素反应性元件调控的反应质粒pTRE-PTHrP（38-94）。方法采用免疫磁珠技术分离纯化具有FGFR-3特异性表面标志的骨骺干细胞，分别以FGFR-3抗体和PCNA抗体对骨骺干细胞的细胞爬片进行免疫细胞化学鉴定。提取骨骺干细胞的总RNA，以RT-PCR方法获得带有酶切位点PTHrP（38-94）基因片段，扩增的DNA片段与含潮霉素筛选标记的四环素反应性元件载体pTRE-2Hyg均双酶切后连接，转化、扩增后对重组质粒进行提取和酶切、测序鉴定。结果免疫荧光证实所取材分离并纯化的细胞为骨骺干细胞；经限制性内切酶Bam HⅠ、NotⅠ酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已经插入重组质粒。结论运用显微取材和免疫纯化技术可以成功分离纯化骨骺干细胞；成功克隆PTHrP（38-94）基因并构建了反应质粒pTRE-PTHrP（38-94），为进一步明确PTHrP（38-94）片段的生物学功能及其在成软骨和成骨分化过程中的作用奠定了基础。
- 张树威陈安民游洪波廖晖宋登新王江谢柏臻刘铁郭风劲
- 关键词：干细胞免疫磁化分离
