辛丽
- 作品数：22 被引量：68H指数：3
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项国家科技支撑计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 中国职业暴露人群感染H9N2禽流感病毒血清学调查被引量：22
- 2015年
- 目的评估我国职业暴露人群感染H9N2禽流感病毒的风险因素。方法利用2009 2011年间在我国22个省(直辖市、自治区)采集的职业暴露人群血清13 715份,筛选了在我国主要流行的G9系毒株A/Chicken/AK4/Anhui/2011作为检测抗原,使用血凝抑制方法初筛和微量中和方法复核两种血清抗体检测方法,在我国大陆地区开展系统的H9N2禽流感病毒血清学研究。结果 H9N2禽流感病毒在中国职业暴露人群的中和抗体血清阳性率为0.41%(63份阳性血清标本)。所有家禽职业暴露人群均有阳性血清标本检出,活禽市场暴露人群感染H9N2禽流感病毒风险显著高于其他职业暴露人群。结论活禽市场是人感染禽流感病毒的重要暴露风险因素。加强H9N2禽流感病毒在我国职业暴露人群的监测,对于有效评估和防控禽流感对人类的危害具有重要的意义。
- 辛丽白天周剑芳唐静陈永坤陈涛史景红李晓丹李燕朱闻斐高荣保王大燕舒跃龙
- 关键词：禽流感H9N2职业暴露人群血清学调查
- 2015-2016年度中国甲型H1N1亚型流感病毒疫苗候选株的制备及鉴定
- 2017年
- 目的 为获得2015-2016年度中国流行的甲型H1N1亚型流感病毒疫苗候选株,制备流感病毒重配株并对其进行鉴定.方法 采用经典重配的方法,将H1N1亚型流感病毒流行株与H3N2亚型的鸡胚高产重配母本株（X-157株）在鸡胚上进行混合培养.用H3亚型的HA蛋白抗血清和X-157株全病毒抗血清对混合培养病毒进行阴性筛选.阴性筛选后HA滴度较高的病毒用Real-Time PCR法对表面蛋白基因型进行鉴定.对表面蛋白基因型正确的毒株用限制性内切酶酶切鉴定法鉴定其内部基因组成.进一步对HA和NA基因进行Sanger法测序,并用表面基因无氨基酸位点突变的毒株免疫雪貂,进行双向血凝抑制（Two-way hemagglutination inhibition test,HI）试验.结果 Real-Time PCR筛选出5株表面蛋白基因型正确的毒株.经内部基因鉴定其中4株为6＋2组成,1株为5＋3组成.5株重配株的HA和NA基因均未发生氨基酸位点突变.5株重配株HA滴度均维持在1 024以上.最终选取的12号重配株免疫原性良好,HI滴度达5 120,双向HI试验均通过.重配后疫苗株在鸡胚上的产量是重配前野毒株的64倍.结论 成功制备了2015-2016年度中国流行的甲型H1N1亚型流感病毒疫苗株,为疫苗贮备和疾病防控奠定了基础.
- 唐静辛丽李晓丹陈永坤郭俊峰黄维娟成艳辉王大燕舒跃龙
- 关键词：流感病毒A型H1N1亚型流行株
- 流感病毒H1N1血凝素基因和神经氨酸酶基因在酵母菌中的表达被引量：3
- 2010年
- 在成功克隆流感病毒H1N1全长HA（Hemagglulinin，HA）、NA（Neuramidinase，NA）基因并测序的基础上，将部分基因序列克隆到表达载体pMETA上，构建了重组表达质粒pMETA/HA（52～1557bp）、pMETA／NA（121～1263bp），电转化真核酵母菌pMAD16，甲醇诱导表达，利用Ni^2＋亲和层析柱对重组蛋白进行纯化，并用Western blotting和ELISA方法检测其抗原性。SDS-PAGE显示重组蛋白在酵母菌中可以高效表达，蛋白纯度占总蛋白的95％以上，ELISA和Western blotting实验证实，重组蛋白具有良好的抗原性。成功克隆和表达了流感病毒H1N1HA、NA基因序列，为流感病毒H1N1诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究提供了参考。
- 张烨于在江辛丽陈永坤唐启慧陈禹保陈清轩舒跃龙
- 关键词：血凝素神经氨酸酶酵母表达
- 季节性流感疫苗株制备技术平台的建立被引量：3
- 2015年
- 目的 在国家流感中心建立经典重配技术平台,使我国具备制备季节性流感疫苗株的能力.方法 我国甲型H1N1流感病毒的代表毒株A/四川/1/2009与母本毒株X157重配,经3轮血清筛选以获得鸡胚高产疫苗候选株.结果 经鉴定,重配毒株的表面基因HA和NA均来自野毒株,内部基因M和NP来自母本毒株.重配株的血凝效价为1024,抗原性分析表明重配株与野毒株无抗原性差异.结论 重配毒株为鸡胚高产株,为我国自主研发季节性流感疫苗株奠定了基础.
- 辛丽鲁健陈永坤唐静郭俊峰王大燕舒跃龙
- 关键词：流感病毒A型流感流感疫苗
- 禽流感病毒H5N1血凝素基因和神经氨酸酶基因在真核酵母菌中的表达被引量：2
- 2011年
- 目的克隆、表达和鉴定禽流感病毒H5N1血凝素基因(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶基因(neuramidinase,NA)序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。方法在成功克隆禽流感病毒H5N1全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pMET A上,构建了重组表达质粒pMET A/HA(49～1 587 bp)、pMET A/NA(121～1 200 bp),电转化真核酵母菌pMAD16,甲醇诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western Blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果重组蛋白在酵母菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示蛋白表达后形成了二聚体,蛋白纯度占总蛋白的95%以上,ELISA和Western Blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。结论本研究成功克隆和表达了禽流感病毒H5N1 HA、NA基因序列,为禽流感病毒H5N1诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究提供了依据。
- 邹淑梅于在江张烨辛丽陈永坤陈禹保陈清轩舒跃龙
- 关键词：血凝素神经氨酸酶
- 流感病毒A/PR/8/34重配母本株高免疫原性HA蛋白制备及鉴定
- 2016年
- 制备流感病毒经典重配过程中所需的A/PR/8/34母本株血凝素蛋白（Hemagglutinin,HA）抗血清。A/PR/8/34流感病毒灭活纯化后经菠萝蛋白酶消化。5%~20%蔗糖连续密度梯度离心法纯化HA蛋白。单向免疫扩散法（Single Radial Immunodiffusion,SRID）筛选目的蛋白。SDS-PAGE法鉴定目的蛋白。纯化的A/PR/8/34 HA蛋白免疫兔子制备抗血清,血凝抑制试验（Hemoglutination Inhibition Assay,HI）测定HA抗血清效价,经SRID法鉴定HA抗血清纯度。成功制备了高免疫原性A/PR/8/34HA蛋白;兔抗血清HI滴度可达10240,SRID法鉴定为高纯度HA抗血清。制备了流感病毒经典重配中关键试剂,摸索成功整套技术方法,为我国自主研发季节性流感疫苗株奠定了基础。
- 唐静辛丽郭俊峰朱闻斐张贺源郎绍辉王大燕舒跃龙
- 关键词：流感病毒HA蛋白
- 神经氨酸酶E119D、R152K突变对人感染高致病性H7N9禽流感病毒药物敏感性的影响被引量：2
- 2020年
- 2016年底出现的高致病性禽流感(Highly pathogenic avian influenza,HPAI)H7N9病毒是H7N9禽流感病毒的变异体,HPAI H7N9病毒中耐药株比例较高且其在哺乳动物细胞中适应性强。为进一步研究HPAI H7N9病毒神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)耐药位点,本研究以HPAI H7N9病毒A/Guangdong/17SF006/2017株为骨架,利用反向遗传学技术分别制备NA E119D、NA R152K突变HPAI H7N9重配病毒,并分别命名为rg006-NA119D和rg006-NA152K。NA抑制试验结果显示,奥司他韦对rg006-NA119D(平均IC50(nM)±SD,7.87±0.20;升高5.50倍)和rg006-NA152K(平均IC50(nM)±SD,1.57±0.01;升高1.10倍)正常抑制。扎那米韦对rg006-NA152K(平均IC50(nM)±SD,10.54±0.15;升高6.13倍)正常抑制,但对rg006-NA119D抑制程度高度降低(平均IC50(nM)±SD,1068±3.00;升高620.93倍)。rg006-NA119D和rg006-NA152K病毒在MDCK细胞中均复制良好,其前期(18h、24h)复制水平与其对应的敏感株相当。在扎那米韦存在的条件下,HPAI H7N9敏感株基本不能复制,rg006-NA119D和rg006-NA152K病毒复制水平有所下降,但rg006-NA119D在后期(48h、72 h)复制水平较高,表明rg006-NA119D对扎那米韦耐药。本研究结果对于HPAI H7N9等人感染禽流感病毒的临床用药、风险评估具有一定的参考价值。
- 唐静张曙霞张靖邹淑梅辛丽朱闻斐李希妍黄维娟王大燕
- 关键词：反向遗传学
- H9N2禽流感病毒反向遗传系统的构建和鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的建立H9N2亚型禽流感病毒反向遗传系统，为人禽流感疫苗研制以及传播和致病机制等方面的研究提供技术平台。方法使用RT-PCR方法获得禽流感H9N2亚型病毒A，Guangzhou／333／99（H9N2）的8条全长基因节段，然后克隆到双表达载体pCI-pol I中，获得H9N2禽流感病毒的8个基因节段的8质粒系统。将构建好的8质粒共转染293T细胞后，收获上清接种鸡胚，然后对鸡胚尿囊液进行鉴定；对拯救的病毒进行鉴定。结果8质粒系统转染293T细胞后可以成功拯救出H9N2禽流感病毒，血凝效价可达到2^9／50μl，生长特性与野生型病毒类似。结论成功建立了H9N2禽流感病毒反向遗传系统。
- 刘丽琦董婕薄洪温乐英辛丽张烨李梓董丽波王敏郭元吉舒跃龙
- 关键词：禽流感遗传学技术
- 潜在的流感大流行病毒：H9N2禽流感病毒被引量：14
- 2013年
- 流感是一种由甲（A）、乙（B）和丙型（C）流感病毒引起的急性呼吸道传染病.根据甲型流感病毒的包膜糖蛋白,病毒可以分为1 ～16个血凝素（HA）和9个神经氨酸酶（NA）亚型,而这些均可从水禽体内分离出来[1].最近,人们又从蝙蝠的体内发现了H17亚型,但未能成功分离出病毒.按照病毒的致病性来分,可以将所有的H1-16亚型禽流感病毒分为高致病性、低致病性和无致病性禽流感病毒[2].至今为止,人们仅发现H5和H7两种高致病性禽流感病毒.H5、H9和H7等禽流感病毒被证实能够偶尔感染人[3].
- 辛丽舒跃龙
- 关键词：高致病性禽流感病毒流行病毒急性呼吸道传染病包膜糖蛋白神经氨酸酶
- 流感病毒H3N2血凝素基因和神经氨酸酶基因在真核酵母菌中的表达
- 2010年
- 目的克隆、表达和鉴定流感病毒H3N2血凝素基因(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶基因(neuramidinase,NA)序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。方法在成功克隆流感病毒H3N2全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pMET A上,构建了重组表达质粒pMET A/HA(52 bp～1 549 bp)、pMET A/NA(121 bp～1 260 bp),电转化真核酵母菌pMAD16,甲醇诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western Blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果重组蛋白在酵母菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示蛋白表达后形成了二聚体,蛋白纯度占总蛋白的95%以上,ELISA和Western Blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。结论本研究成功克隆和表达了流感病毒H3N2 HA、NA基因序列,为流感病毒H3N2诊断试剂和疫苗开发等进一步研究奠定了基础。
- 李梓张烨唐启慧陈禹宝于在江辛丽陈永坤陈清轩舒跃龙
- 关键词：血凝素神经氨酸酶酵母菌
