阎岩
- 作品数：50 被引量：125H指数：5
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HSV-1 gC糖蛋白真核表达载体的构建及表达被引量：1
- 2011年
- 目的:构建单纯疱疹病毒1型(HSV-1)囊膜糖蛋白C(gC)哺乳动物表达载体pCI-mCMV-gC-1-IRES-DHFR-L22R,实现其在中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)中的稳定表达。方法:利用基因重组技术构建同时克隆有gC-1基因和中国仓鼠二氢叶酸还原(DHFR-L22R)基因的真核表达载体pCI-mCMV-gC-1-IRES-DHFR-L22R,按LipofectamineTM2000说明书转染野生型CHO-K1细胞,在G418和氨甲喋呤(MTX)双筛选压力下筛选稳定表达细胞株,Slot blot方法测定重组蛋白的表达,并用His-Ni琼脂糖填料进行目的蛋白纯化,纯化后West-ern blot检测。结果:成功构建了真核表达载体pCI-mCMV-gC-1-IRES-DHFR-L22R。经过两轮筛选获得稳定表达HSV-1型gC基因的细胞系,Western blot成功检测到目的蛋白。结论:HSV-1 gC在CHO-K1细胞中成功表达,并具有良好的特异性结合活性,为进一步的实验研究和临床应用提供了基础。
- 党引利阎岩张晓晓李璞媛于澜张蕾张芳琳徐志凯吴兴安
- 关键词：HSVGCDHFR真核表达CHO
- 杂交瘤细胞的半连续式培养法被引量：1
- 1997年
- 目的：研究杂交瘤细胞的体外高密度培养，大量制备高纯度单克隆抗体（ＭｃＡｂ）．方法：应用Ｃｅｌｉ－ｇｅｎ５Ｌ细胞培养罐，以半连续灌注方式在１％的低血清条件下培养分泌抗疱疹病毒（ＨＳＶ）ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞１Ａ１２．结果：细胞密度最高达１．７×１０７／ｍｌ，鼠ＩｇＧ最高为３５０μｇ／ｍｌ，连续培养２３ｄ，共获鼠ＩｇＧ５．３ｇ，平均滴度１∶６４．结论：半连续式培养杂交瘤细胞，细胞密度和抗体产量均优于纯批式培养．
- 薛小平尹文王海涛徐志凯阎岩吴兴安
- 关键词：细胞培养杂交瘤细胞半连续式单克隆抗体
- 大肠杆菌中融合表达汉滩病毒S,M基因片段的研究被引量：1
- 2002年
- 为在大肠杆菌中融合表达汉滩病毒囊膜糖蛋白G1与NP含主要抗原位点的片段 .将汉滩病毒 76 118株S基因编码区 5′端约 0 .7kb的片段与M基因编码G1的片段连接 ,克隆入 pGEX 4T2 ,构建嵌合基因原核表达载体 pGEX 4T2 S 0 .7G1,在大肠杆菌XL1 Blue中诱导GST S0 .7G1融合蛋白的表达 .表达产物用ELISA和Westernblot进行鉴定 .限制性内切酶酶切鉴定证明 ,成功构建了嵌合原核表达载体 pGEX 4T2 S0 .7G1.经IPTG诱导后 ,ELISA活性测定结果表明 ,该融合蛋白可与抗汉坦病毒NPmAb特异性结合 .Westernblot结果显示 ,诱导出相对分子质量 (Mr)大于 1× 10 5的S0 .7G1与GST的融合蛋白 ,并有一系列大小不等的可与抗汉坦病毒NPmAb特异性结合的蛋白带 .获得具有特异性结合活性的融合蛋白GST S0 .7G1。
- 罗雯徐志凯张芳琳阎岩吴兴安刘勇白文涛王海涛
- 关键词：大肠杆菌汉滩病毒基因片段
- 抗汉滩病毒核蛋白细胞内抗体的表达及鉴定
- 肾综合征出血热(HFRS)是在我国危害严重的急性传染病之一,目前尚无特异、有效的治疗方法。我室制备了多株具有高中和活性的抗汉坦病毒的鼠源性单克隆抗体(mAb),有些已经进入临床试验,但仍需解决鼠源性抗体应用于人体产生的副...
- 阎岩徐志凯胡刚白文涛罗雯吴兴安张芳琳刘勇王海涛
- 文献传递
- 汉滩病毒结构蛋白昆虫细胞融合表达产物的免疫原性评价被引量：4
- 2002年
- 目的 研究汉滩病毒 (HTNV)囊膜糖蛋白G1与核蛋白 (NP)部分片段在昆虫细胞中融合表达产物的免疫学特性 ,为HTNV基因工程疫苗的研制提供依据。方法 构建含有HTNVG1S0 .7嵌合基因的重组杆状病毒Bac G1S0 .7,用其感染的Sf9细胞免疫Balb c小鼠。用间接免疫荧光法、ELISA法、微量细胞培养中和试验及T淋巴细胞增殖试验对被免疫小鼠的体液免疫及细胞免疫应答效果进行检测。结果 Bac G1S0 .7感染的昆虫细胞免疫小鼠后 ,测得免疫鼠血清抗HTNV抗体滴度最高达 1∶3 2 0 0 ,含有特异性抗HTNVNP及抗HTNV糖蛋白G1的抗体 ,被免疫小鼠中有部分产生了较低滴度的中和抗体 ,免疫鼠脾细胞对HTNVNP或糖蛋白的增殖反应指数均高于阴性对照组。结论 G1S0 .7嵌合基因的昆虫细胞表达产物具有较好的免疫原性 。
- 罗雯徐志凯张芳琳阎岩吴兴安刘勇白文涛王海涛
- 关键词：汉滩病毒结构蛋白免疫原性肾综合征出血热
- 抗HSV－糖蛋白（gp30）单克隆抗体重链可变区基因的克隆及序列分析被引量：1
- 1996年
- 目的：获得鼠抗ＨＳＶ－２型特异性糖蛋白（ｇｐ３０）单抗重链可变区基因，为基因工程改建及表达奠定基础。方法：从分泌高中和活性的鼠抗ＨＳＶ－２型特异性单抗杂交瘤细胞系中提取ＲＮＡ，逆转录成ｃＤＮＡ，用ＰＣＲ法扩增出抗体重链可变区基因，并克隆入质粒，随机挑选阳性克隆进行核酸序列分析．结果：基因全长３５７ｂｐ，编码１１９个氨基酸，含有维持抗体结构的半胱氨酸，序列内无终止码．结论：所克隆基因具备小鼠抗体重链可变区基因结构特征，与已确认的小鼠抗体ＶＨ基因有较高的同源性，隶属于Ｋａｂａｔ分类体系中的小鼠抗体重链（Ａ）亚组．
- 郑东阎岩姜绍谆马文煜徐志凯尹文喻启桂刘军连
- 关键词：单克隆抗体可变区基因糖蛋白
- 汉滩病毒核蛋白部分片段与囊膜糖蛋白G1在昆虫细胞中的融合表达被引量：1
- 2002年
- 目的 应用Bac -to -Bac杆状病毒表达系统融合表达汉滩病毒囊膜糖蛋白G1与核蛋白部分片段。方法 构建含有汉滩病毒G1S0 7嵌合基因的杆状病毒表达载体 pFBD -G1S0 7,转化DH10Bac致敏菌 ,利用其含有的细菌Tn7转座系统将嵌合基因重组至穿梭质粒Bacmid上 ,快速筛选出含有G1S0 7嵌合基因的重组杆状病毒 ,在昆虫细胞中表达该融合蛋白 ,利用间接免疫荧光、ELISA和免疫印迹对表达产物进行检测。结果 构建的含G1S0 7嵌合基因之重组杆状病毒可在昆虫细胞中表达出融合蛋白 ,该蛋白可被抗汉滩病毒核蛋白及糖蛋白G1特异性单抗所识别 ,表达产物主要集中在细胞内。结论 在昆虫细胞中表达出具有生物学活性的G1S0 7融合蛋白 。
- 罗雯徐志凯阎岩吴兴安张芳琳刘勇白文涛王海涛
- 关键词：汉滩病毒杆状病毒昆虫细胞肾综合征出血热HFRS免疫学
- 抗汉滩病毒NP抗原mAb的ScFv-C_κ基因真核和原核表达载体的构建及鉴定被引量：3
- 2001年
- 目的构建抗汉滩病毒HTNVNP抗原mAb的ScFvCκ基因原核和真核表达载体。方法将鼠源性抗HTNVmAb1A8的ScFv基因和人Cκ基因连接,分别克隆入原核表达载体pComb3和真核表达载体pCIneo中,并用间接免疫荧光和Westernblot检测其原核表达产物的活性。结果成功地构建了重组1A8ScFvCκ基因并克隆入原核和真核表达载体。间接免疫荧光和Westernblot分析表明,该基因在E.coliTG1中的表达产物可与HTNVNP抗原特异性结合。结论抗NP抗原mAb的ScFvCκ原核和真核表达载体的构建,为进一步研究细胞内抗体的功能奠定了基础。
- 阎岩徐志凯胡刚白文涛罗雯吴兴安张芳琳刘勇王海涛
- 关键词：单链抗体汉滩病毒真核表达
- 抗HFRS病毒McAb 1A8可变区基因的克隆及序列分析
- 1997年
- 抗ＨＦＲＳ病毒ＭｃＡｂ１Ａ８可变区基因的克隆及序列分析阎岩徐志凯姜绍谆尹文吴兴安王海涛薛小平（第四军医大学微生物学教研室，西安７１００３２）基因工程小分子抗体由于分子小，免疫原性弱，穿透力强，易于抵达抗原“峡谷”位点，因此对于研究病毒及肿瘤分子的结构...
- 阎岩徐志凯姜绍谆尹文吴兴安王海涛薛小平
- 关键词：单克隆抗体克隆
- 鼠源单抗3G1单链抗体基因的构建及序列分析
- 2003年
- 利用RT PCR方法 ,从分泌抗汉滩病毒mAb的杂交瘤细胞系 3G1中扩增出抗体VH 和VL基因 ,通过PCR方法获得linker VL 基因 ,进而利用加端PCR技术 ,在扩增出的单抗体VH 和linker VL基因两端加上限制性酶切位点 ,分别克隆入 pUC18中并测序 .3G1VH 基因长 36 0bp ,编码 12 0个氨基酸 ;VL 基因长 32 4bp ,编码 10 8个氨基酸 .在pUC18载体中将VH 和linker VL 基因连接成ScFv基因 .
- 罗雯阎岩徐志凯张芳琳吴兴安刘勇白文涛王海涛
- 关键词：肾综合征出血热基因构建基因工程
