黄伟达
- 作品数：116 被引量：471H指数：13
- 供职机构：复旦大学附属华东医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“九五”国家科技攻关计划国际原子能机构基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学理学更多>>
- 穿梭表达载体的构建及产L-苯丙氨酸基因工程菌的选育
- 1996年
- 基因工程技术已经给发酵工程的发展注入了新的活力,使传统的发酵工业面貌一新。它不仅开创了许许多多新的发酵产品,而且也使不少传统发酵产品的产量、质量和生产技术有了新的飞跃。棒状杆菌中许多菌(如,谷氨酸棒杆菌和黄色短杆菌)是重要的工业生产菌。这类菌生长迅速、不产胞外蛋白酶、无内毒素、产品易分离纯化,已广泛用于各种氨基酸、核苷酸等的发酵生产。因此开展棒状杆菌的基因工程研究具有重要的理论意义和应用价值。
- 雷呈祥范长胜段峰海黄伟达沈水源严维耀郑兆鑫
- 关键词：棒状杆菌穿梭载体L-苯丙氨酸基因工程菌发酵
- RAPD技术在罗汉松性别辨别中的应用(英文)被引量：8
- 2002年
- 部分植物(包括不少濒危物种)是雌雄异株,且在非花期仅凭形态学特征难以辨别其性别;这给品种改良、植物保护工作都带来了麻烦.以罗汉松(Podocarpusmacrophyllus(Thunb.)D.Don)、短叶罗汉松(PodocarpusmacrophyllusVar.makiEndl)为具体实验材料,就RAPD技术在植物性别判断方面进行了尝试.在筛选了340种随机引物后,发现其中23种引物的产物有良好的多态性;最终筛选到了可以扩增出与性别相关的特异性条带的引物P20.在这基础上对表现出多态性的RAPD产物进行了UPGMA聚类分析,观察到各样本在遗传多态性上,性别间的差异大于变种与原种间的差异.同时还对单引物、双引物的RAPD结果进行了对比.
- 蔡亮田晓晨李明黄伟达
- 关键词：RAPDUPGMA
- 扩展青霉碱性脂肪酶cDNA的克隆和表达被引量：8
- 2001年
- 采用 ＴＲＩｚｏｌ试剂一步法所抽提的总 ＲＮＡ的 Ｄ（２６０）／Ｄ（２８０）值为 １.８２，甲醛变性电泳呈现真核微生物所特有的 ２８Ｓ ｒＲＮＡ和 １８Ｓ ｒＲＮＡ 条带．根据扩展青霉所产碱性脂肪酶（Ｌｉｐ ＰＥ）Ｎ末端 ２０个氨基酸残基序列和真核生物 ｍＲＮＡ３’端具有 ｐｏｌｙ（Ａ）等所提供的生物信息，采用 ＲＴ－ＰＣＲ技术和 ３’－ＲＡＣＥ法扩增了 ＬｉｐＰＥ成熟肽编码区和３’非纪码区的ｃＤＮＡ，直接将该ＰＣＲ产物克隆至ｐＵＣｍ－Ｔ载体中。序列分析表明，该碱性脂肪酶含有２５８个氨基酸，其中保守的五肽序列为 Ｇｌｙ－Ｈｉｓ－Ｓｅｒ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ。进一步采用 ＣｌｏｎＴｅｃｈ公司的 ＳＭＡＲＴ～（ＴＭ）ＰＣＲ ｃＤＮＡ文库构建试剂盒，扩增、克隆和测定了自转录起始点至纪码区的 ｃＤＮＡ片段，从而完成了 Ｌｉｐ ＥＰ完整 ｃＤＮＡ的分析测定．最后将编码完整脂肪酶蛋白的ｃＤＮＡ克隆至 ｐＧＥＸ－５Ｘ－３表达载体中．在大肠杆菌 ＢＬ２１中进行 ＩＰＴＧ诱导表达，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测结果表明，所表达的 ＧＳＴ－Ｌｉｐ ＥＰ融合蛋白分子质量约为 ５３ｋｕ；
- 邬敏辰李江华黄伟达孙崇荣
- 关键词：碱性脂肪酶基因克隆真核生物CDNA
- 外源乳酸脱氢酶基因在双歧杆菌中的表达被引量：13
- 2002年
- 以大肠杆菌 双叉双歧杆菌的穿梭质粒pHJ为基础,插入从Lactococcuslactis总DNA中用PCR方法扩增得到的报告基因乳酸脱氢酶基因(ldh),构建了双叉双歧杆菌的表达质粒pHJ LDH,并采用电转化法导入双叉双歧杆菌进行了表达研究.对双叉双歧杆菌总蛋白的SDS PAGE分析结果表明,ldh报告基因的表达产物形成了明显的条带,Western blotting结果确认了该条带为ldh基因的产物.LDH的酶活性定量测定结果表明,重组双叉双歧杆菌的蛋白粗抽提液中LDH的比活性为5.5U/mg,菌中LDH的表达量约为2mg/L.此工作为今后双叉双歧杆菌的基因工程奠定了基础.
- 李宁军李琳江培李盛翃黄伟达
- 关键词：乳酸脱氢酶基因蛋白
- 弓形虫GRA6可溶性蛋白在大肠埃希菌中的表达及纯化被引量：1
- 2006年
- 目的在大肠埃希菌中高效表达及纯化弓形虫GRA6抗原,为制作弓形虫感染基因工程诊断试剂盒奠定基础。方法将重组pGEX-GRA6表达载体转化大肠埃希菌BL21-Codon Plus (DE3)-RP菌株,在异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导下表达。超声破壁后,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物的表达形式,并对表达产物以硫酸铵沉淀、Sephedax G50脱盐和GST亲和层析柱进行目的蛋白的纯化。通过Western blotting检测其纯化的重组抗原的免疫反应性。结果GRA6以融合蛋白(GST-GRA6)的形式在大肠埃希菌中得到了高效表达。对表达产物可溶性分析表明,表达蛋白在上清液中和包涵体中均有表达。在上清液中表达的可溶性蛋白经纯化后蛋白纯度可达90%以上。Western blotting分析表明纯化蛋白能被弓形虫感染的人血清所识别。结论GRA6在大肠埃希菌中得到了高效表达,重组抗原经纯化后能特异性地被弓形虫感染者血清所识别。
- 朱翔闵太善高胜兰王勇平陆惠民黄伟达
- 关键词：弓形虫属重组融合蛋白质类
- 牛β-酪蛋白基因控制的人凝血Ⅸ因子基因在小鼠乳腺组织中的表达调控被引量：9
- 1998年
- 构建牛β 酪蛋白基因控制的人凝血Ⅸ因子 (hFⅨ )乳腺组织特异性表达载体pCⅨm,pCiⅨ ,pCⅨ和报告基因 (LacZ)乳腺表达载体 pCiLacZ ,pCLacZ ,利用Stearylamine(SA)阳离子脂质体包埋 5种载体 ,通过尾静脉注射的方法直接转染哺乳期母鼠的活体组织 .在DNA ,mRNA以及蛋白质水平对实验小鼠的检测结果表明 :转染处理后hFⅨ基因和LacZ基因在小鼠乳腺获得表达 ,hFⅨ蛋白在乳汁中的最高分泌表达量为 80 .2 8ng/mL ,其中 85 %以上已经羧基化并具有生物学活性 ;对 5种载体表达调控的研究证实牛β_酪蛋白基因 5′端 2 .0kb的片段能够驱动人凝血Ⅸ因子基因在小鼠乳腺组织中分泌表达 ,β_酪蛋白基因内含子 1能够提高Ⅸ因子基因在乳腺组织中的表达水平 ,并能影响该基因表达的组织特异性 ;和hFⅨcDNA相比 ,hFⅨ基因自身的内含子 1能够提高该基因在活体乳腺组织中的表达水平
- 张克忠陈立卢大儒黄伟达薛京伦邱信芳
- 关键词：Β-酪蛋白基因乳腺组织血友病B
- 热激蛋白HSP70在肿瘤免疫反应中作用的研究进展被引量：3
- 2002年
- 热激蛋白(heat shock proteins,HSPs)是细胞受应激原刺激后诱导产生的一组应激蛋白,在进化上高度保守。热激蛋白的功能有很多,充当分子伴侣,参与蛋白质折叠和转运。最近研究表明HSP70还在肿瘤免疫反应过程中起协同作用,充当呈递载体,将抗原肽呈递于APC表面引起CTL毒性杀死感染细胞和肿瘤细胞。在肿瘤的免疫治疗中作为免疫疫苗的载体有很好的前景。
- 章宏海钱志康黄伟达
- 关键词：抗原呈递免疫疫苗肿瘤免疫反应
- 乳酸乳球菌表达弓形虫棒状体蛋白1(ROP1)被引量：12
- 2002年
- 目的 在乳酸乳球菌中表达ROP1抗原蛋白。方法 从质粒 psk -ROP1中以BamHⅠ和SalⅠ双酶切出ROP1基因 ,置换构建好的大肠杆菌 -乳酸乳球菌穿梭表达质粒L2 -PsP30T中的P30基因 ,电转化感受态乳酸乳球菌 ,以Westernblotting鉴定ROP1在乳酸乳球菌中的表达。结果 表达产物中有一约 4 3kDa的蛋白带能被弓形虫病人血清识别。
- 朱翔杨秋林陆惠民施宓黄伟达
- 关键词：弓形虫乳酸乳球菌疫苗弓形虫病
- 通过DNA shuffling技术获得初步解除苯丙氨酸反馈抑制的3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖-7-磷酸合成酶(AroG)突变株被引量：1
- 2010年
- aroG基因编码的3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖-7-磷酸合成酶(3-deoxy-D-arabino-heptulosonate-7-phosphate synthase,AroG)是苯丙氨酸(phenylalanine,Phe)合成途径中的关键酶之一,受到苯丙氨酸的反馈抑制.为得到解除苯丙氨酸反馈抑制的突变AroG,分别以Escherichia coli(E.coli)野生型和突变型aroG基因以及Sal monella typhi mnrium(S.typhi mnrium)野生型aroG基因为亲本,通过DNA suffling技术对aroG进行改组,获得的改组分子与载体pET30a连接得到改组文库,转化到E.coliBL21(DE3)中,在含有Phe类似物对氟苯丙氨酸(p-FP)的培养基上筛选转化子,获得4个解除Phe反馈抑制的克隆.
- 郝瑞昕边英男李晓萍管栋印江培翃黄伟达
- 关键词：SHUFFLINGAROG苯丙氨酸
- 一种蛋白质芯片及其制作方法
- 本发明属分子生物学技术领域，具体涉及一种蛋白质芯片及其制备方法。该蛋白质芯片是在固体基质表面通过共价结合交联金属离子螯合物，在碱性条件下金属离子螯合物与金属离子螯合，蛋白质分子通过其末端的组氨酸标记(His-tag)与上...
- 黄伟达钱志康宣宝琴徐剑锋王奕然万凯丁天章宏海史顺成程小伟宋海林
- 文献传递
