刘红莉
- 作品数：6 被引量：39H指数：5
- 供职机构：西安交通大学生命科学与技术学院癌症研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 截短型人乳头瘤病毒58型L1蛋白的表达及其体外生物活性研究被引量：7
- 2004年
- 利用PCR技术克隆截短型HPV5 8L1基因并重组入杆状病毒表达系统穿梭质粒pFastBac Htb ,通过转座反应 ,将目的基因片段重组入杆状病毒基因组 ,分离重组的BacmidDNA ,并转染Sf 9昆虫细胞 ,收集被转染的Sf 9细胞 ,提取细胞蛋白 ,SDS PAGE检测可见在大约 5 8Kda处出现一新生蛋白条带 ,Westernblot证实为HPV5 8L1蛋白。用ProBondTM 纯化系统纯化所表达的蛋白。小鼠红细胞凝集试验证实纯化的蛋白可介导小鼠红细胞凝集 ,透射电镜观察证实纯化蛋白可自组装成VLP。结果表明昆虫杆状病毒表达系统可高效表达截短型HPV5 8L1蛋白 ,纯化后的截短型HPV5 8L1蛋白在体外可自组装VLP 。
- 李文生郑瑾刘红莉陈宏伟杨军王一理司履生
- 关键词：L1蛋白蛋白纯化病毒样颗粒
- 预防性重组HPV58-减毒志贺氏杆菌载体活疫苗的研制及免疫学特性被引量：1
- 2007年
- 目的:构建预防性重组HPV58-减毒志贺氏杆菌载体活疫苗,并研究其免疫学特性。方法:克隆HPV58L1基因并重组入自杀载体pCVD442,减毒志贺氏杆菌Sf301:ΔvirG、辅助质粒PRK2013、重组自杀载体pCVD442-HPV58L1进行筛选杂交,经氨苄抗性培养基、刚果红培养基双重选择,获得重组的含HPV58L1基因的减毒志贺氏杆菌菌株。Western blot检测HPV58L1蛋白表达。用豚鼠角结膜炎模型进行疫苗动物免疫试验,ELISA检测豚鼠血清中特异性抗体,ELISPOT检测豚鼠脾及淋巴结中抗原特异性IgG、IgA产生细胞频数。结果:Western blot法证实该菌株可表达HPV58L1蛋白。豚鼠免疫保护试验发现:HPV58L1-减毒志贺氏杆菌不引起角结膜炎,经用野生型sf301攻击后有80%豚鼠不发病。免疫后第20天,免疫豚鼠血中抗HPV58L1特异性IgG、IgA明显升高,而对志贺氏杆菌菌体抗原(LPS)仅产生低效价的IgG抗体。ELISPOT结果显示,脾和淋巴结的IgA-ASC及IgG-ASC明显升高。结论:成功构建了预防性重组HPV58-减毒志贺氏杆菌载体活疫苗,能诱发免疫动物较强的体液免疫反应,激发保护性抗体的产生。
- 李文生刘红莉张盈涛杨筱风王一理司履生
- 关键词：疫苗同源重组
- LT-B转基因烟草植株的建立被引量：5
- 2004年
- 目的 构建大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚单位 (LT B)基因的植物表达载体 ,并建立LT B转基因烟草植株。方法 用PCR从pMMB6 8扩增LT B编码基因 ,将其克隆于 pUCmT和 pBI12 1载体 ,进而构建植物表达双元载体pBI LTB ,LT B基因由CaMV 35S启动子控制表达 ;将pBI LTB用电穿孔法导入根瘤农杆菌LBA4 4 0 4 ;采用叶盘共培育法经根瘤农杆菌介导转化烟草 ,获得转基因烟草植株 ;用PCR、Southern、Westernblot和ELISA检测转基因植株。结果 经PCR及Southern杂交分析 ,共发现 12株烟草的基因组中有LT B基因整合 ;Westernblot和ELISA分析表明有 9株转基因烟草能有效表达LT B蛋白 ,其表达量为烟草叶片总可溶蛋白的 3.36～ 10 .5 6 μg·g-1TSP。结论 建立的LT B转基因烟草植株可成功表达LT B ,并具有五聚体结构 ,为进一步生产预防婴幼儿大肠杆菌腹泻可食用疫苗及黏膜免疫佐剂奠定了基础。
- 刘红莉雷霆张铮郑瑾来宝长孔令洪王喆之王一理司履生
- 关键词：转基因烟草植物疫苗
- HPV-16L1植物表达载体的构建及HPV-16L1在转基因烟草中表达的鉴定被引量：8
- 2004年
- 利用PCR技术克隆人乳头瘤病毒HPV 16L1蛋白编码基因 ,将其重组于pUCmT和pBI12 1中 ,构建含HPV 16L1基因的植物双元表达载体pBI L1,L1基因由CaMV 35S启动子控制表达。采用叶盘共培育法经根瘤农杆菌介导转化烟草 (NicotianatobacumL .) ,获得HPV 16L1转基因烟草植株。经PCR及Southern杂交分析 ,HPV 16L1基因整合到烟草基因组中 ;Westernblot和ELISA分析检测显示转基因烟草叶片蛋白可与HPV 16L1单克隆抗体特异性反应 ,且定位于 5 5kD处 ,其最高表达量占烟草叶片总可溶蛋白的 0 0 76 %。小鼠红细胞凝集试验 (HA)及小鼠红细胞凝集抑制试验 (HAI)显示转基因烟草叶片蛋白可引起小鼠红细胞凝集。结果表明已成功地构建了HPV 16L1的植物双元表达载体 ,并证实了利用转基因烟草植物能够表达出HPV 16L1蛋白 。
- 刘红莉陈宏伟李文生雷霆王喆之王一理司履生
- 关键词：病毒样颗粒转基因烟草植物疫苗
- 转基因植物疫苗研究策略被引量：7
- 2004年
- 利用转基因植物作为生物反应器生产疫苗受到越来越多的关注。对转基因植物疫苗的研究、生产策略进行了介绍 ,重点对提高植物疫苗表达所采用的生物技术策略进行综述 ,探讨转基因植物疫苗的发展及面临的问题。
- 刘红莉雷霆王一理司履生
- 关键词：转基因植物疫苗生物技术
- 量子点:新的荧光标记物质被引量：12
- 2005年
- 陈宏伟刘红莉王一理司履生
- 关键词：量子点人类基因组计划纳米晶体
