吴双林
- 作品数：5 被引量：16H指数：3
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- 猪轮状病毒VP4蛋白基因在大肠杆菌中的表达被引量：6
- 2009年
- [目的]研究猪的轮状病毒VP4蛋白基因在BL21大肠杆菌中的表达。[方法]以猪肺脏组织中分离的总RNA为模板,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术扩增VP4蛋白的部分基因,将PCR产物克隆到表达载体pGEX-4T-1中,构建原核表达质粒PGEX-4T-1-VP4并对重组质粒进行酶切和测序鉴定。将重组载体PGEX-4T-1-VP4转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达和SDS-PAGE分析,并对重组大肠杆菌进行可溶性分析。[结果]对猪肺脏组织中分离的总RNA进行RT-PCR扩增,获得875 bp的VP4部分基因,重组质粒PGEX-4T-1-VP4经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切和测序鉴定后,插入的猪轮状病毒VP4的cDNA编码区序列与已公布的猪GenBank核酸序列比对结果为99.5%;将重组质粒pGEX-4T-1-VP4-转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,可见约58 kDa融合蛋白带。[结论]该研究为进一步研究轮状病毒的疫苗研制奠定了基础。
- 肖长峰刘成倩卢永红陈斌吴双林张天庆易建中
- 关键词：轮状病毒VP4基因克隆原核表达
- 穿膜肽在疫苗中应用的研究进展被引量：3
- 2012年
- 穿膜肽自发现以来,因其独特的蛋白转导功能,为基因治疗和新型疫苗的开发等开辟了新的途径。通过综述穿膜肽的种类、结构特点、作用机制及其在疫苗中的应用,为进一步研发DNA疫苗和肿瘤疫苗奠定基础。
- 范兴琼吴双林刘成倩易建中
- 关键词：穿膜肽蛋白转导域疫苗
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因的克隆与原核表达被引量：2
- 2009年
- [目的]克隆猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因并在原核表达系统中表达。[方法]根据GenBank上登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核酸序列设计1对引物,用RT-PCR方法扩增出PRRSV的核衣壳蛋白(N)基因,并将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1上,得到重组质粒pGEX-4T-1-N。将重组质粒转化大肠杆菌BL31(DE3)感受态细胞,经TPTG诱导,SDS-PAGE电泳检测。[结果]PRRSV肺组织所提取的RNA,经RT-PCR扩增,得到一段392 bp的片段,与预期结果一致。SDS-PAGE电泳分析,所得重组蛋白的分子量约39.866 Da,与预期结果相同。重组菌体超声裂解后,经10%的SDS-PAGE电泳分析,结果显示该重组蛋白为可溶性蛋白。[结论]该研究为重组蛋白的纯化奠定了基础。
- 刘成倩肖长峰易建中关平原吴双林陈斌张天庆
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白克隆
- 猪尿酸氧化酶在大肠杆菌中的表达、纯化与部分酶学性质分析被引量：5
- 2009年
- 本研究报道了猪尿酸氧化酶(Porcine urate oxidase,pUOX)的原核表达载体的构建、pUOX的蛋白表达条件的优化以及对pUOX经纯化后进行活性检测和酶学性质分析。利用RT-PCR从猪肝总RNA中克隆pUOX,定向插入原核表达载体pET30a(+)中,构建表达载体pET30a(+)/pUOX,并转化到大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中。重组质粒pET30a(+)/pUOX经双酶切鉴定和序列分析,证实已成功构建了重组表达载体。重组表达菌经IPTG诱导表达了约为41kD的蛋白,与预期分子量一致,并对pUOX蛋白表达条件进行了优化,表达的蛋白主要以包涵体的形式存在于细胞中,包涵体经过变性、复性后,用Ni2+-NTA对复性蛋白进行亲和纯化,并对纯化蛋白进行了活性检测和酶学性质分析,纯化的重组pUOX的比活为50.63IU/mg,并发现重组蛋白在最佳温度、热稳定性等方面与天然pUOX相同,为后续动物实验奠定重要的基础。
- 吴双林陈斌刘成倩欧瑜易建中
- 关键词：包涵体纯化生物活性
- 穿膜肽在疫苗中应用的研究进展
- 穿膜肽自发现以来，因其独特的蛋白转导功能，为基因治疗和新型疫苗的开发等开辟了新的途径。通过综述穿膜肽的种类、结构特点、作用机制及其在疫苗中的应用，为进一步研发DNA疫苗和肿瘤疫苗奠定基础。
- 范兴琼吴双林刘成倩易建中
