陈斌
- 作品数:5 被引量:13H指数:2
- 供职机构:上海市农业科学院更多>>
- 发文基金:上海市浦江人才计划项目上海市科技兴农重点攻关项目上海市科委重大科技攻关项目更多>>
- 相关领域:农业科学生物学更多>>
- 在昆虫细胞中表达西尼罗河病毒prM+E蛋白
- 2018年
- 采用PCR技术扩增prM+E基因,将其插入到供体质粒pFast-Bac1中得到重组质粒Pfast-Bac1-W-PE,之后转化大肠杆菌DH10-Bac,构建包含西尼罗河病毒prM+E基因的重组杆状病毒,然后感染正常的sf9细胞,收集感染不同时间段的细胞及上层培养基。结果表明:在感染后的第1天目的基因就得到了转录,同时有少量的重组杆状病毒释放到培养基中;SDS-PAGE和Western-Blot检测结果显示,在43.0ku与66.0ku条带之间,感染细胞裂解液较正常细胞的裂解液多出一条带,该蛋白为WNV完整的E蛋白,而且这一差异蛋白能与WNV兔多抗反应。
- 刘成倩李红陈斌易建中
- 关键词:西尼罗河病毒杆状病毒表达系统
- 四川省部分猪场猪链球菌病免疫前后的病原及抗体调查
- 猪链球菌是重要的人兽共患病病原。本研究通过对四川省部分规模猪场猪链球菌灭活疫苗免疫前、一次免疫后及二次免疫后,分别对猪进行三次采样,检测猪扁桃体拭子中的病原和血清样本抗体水平。结果表明:与免疫前相比,二次免疫后60 d,...
- 陈斌李金海秦学远罗毅张代芬张东余勇邓永强汤芳包银莉张炜姚火春陆承平
- 关键词:猪链球菌病抗体水平病原分离
- 猪轮状病毒VP4蛋白基因在大肠杆菌中的表达被引量:6
- 2009年
- [目的]研究猪的轮状病毒VP4蛋白基因在BL21大肠杆菌中的表达。[方法]以猪肺脏组织中分离的总RNA为模板,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术扩增VP4蛋白的部分基因,将PCR产物克隆到表达载体pGEX-4T-1中,构建原核表达质粒PGEX-4T-1-VP4并对重组质粒进行酶切和测序鉴定。将重组载体PGEX-4T-1-VP4转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达和SDS-PAGE分析,并对重组大肠杆菌进行可溶性分析。[结果]对猪肺脏组织中分离的总RNA进行RT-PCR扩增,获得875 bp的VP4部分基因,重组质粒PGEX-4T-1-VP4经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切和测序鉴定后,插入的猪轮状病毒VP4的cDNA编码区序列与已公布的猪GenBank核酸序列比对结果为99.5%;将重组质粒pGEX-4T-1-VP4-转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,可见约58 kDa融合蛋白带。[结论]该研究为进一步研究轮状病毒的疫苗研制奠定了基础。
- 肖长峰刘成倩卢永红陈斌吴双林张天庆易建中
- 关键词:轮状病毒VP4基因克隆原核表达
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因的克隆与原核表达被引量:2
- 2009年
- [目的]克隆猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因并在原核表达系统中表达。[方法]根据GenBank上登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核酸序列设计1对引物,用RT-PCR方法扩增出PRRSV的核衣壳蛋白(N)基因,并将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1上,得到重组质粒pGEX-4T-1-N。将重组质粒转化大肠杆菌BL31(DE3)感受态细胞,经TPTG诱导,SDS-PAGE电泳检测。[结果]PRRSV肺组织所提取的RNA,经RT-PCR扩增,得到一段392 bp的片段,与预期结果一致。SDS-PAGE电泳分析,所得重组蛋白的分子量约39.866 Da,与预期结果相同。重组菌体超声裂解后,经10%的SDS-PAGE电泳分析,结果显示该重组蛋白为可溶性蛋白。[结论]该研究为重组蛋白的纯化奠定了基础。
- 刘成倩肖长峰易建中关平原吴双林陈斌张天庆
- 关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白克隆
- 猪尿酸氧化酶在大肠杆菌中的表达、纯化与部分酶学性质分析被引量:5
- 2009年
- 本研究报道了猪尿酸氧化酶(Porcine urate oxidase,pUOX)的原核表达载体的构建、pUOX的蛋白表达条件的优化以及对pUOX经纯化后进行活性检测和酶学性质分析。利用RT-PCR从猪肝总RNA中克隆pUOX,定向插入原核表达载体pET30a(+)中,构建表达载体pET30a(+)/pUOX,并转化到大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中。重组质粒pET30a(+)/pUOX经双酶切鉴定和序列分析,证实已成功构建了重组表达载体。重组表达菌经IPTG诱导表达了约为41kD的蛋白,与预期分子量一致,并对pUOX蛋白表达条件进行了优化,表达的蛋白主要以包涵体的形式存在于细胞中,包涵体经过变性、复性后,用Ni2+-NTA对复性蛋白进行亲和纯化,并对纯化蛋白进行了活性检测和酶学性质分析,纯化的重组pUOX的比活为50.63IU/mg,并发现重组蛋白在最佳温度、热稳定性等方面与天然pUOX相同,为后续动物实验奠定重要的基础。
- 吴双林陈斌刘成倩欧瑜易建中
- 关键词:包涵体纯化生物活性