孙法良
- 作品数：8 被引量：37H指数：4
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- 氟苯尼考人工抗原的制备与鉴定被引量：3
- 2009年
- 将氟苯尼考(FFC)进行化学修饰引入羧基活性基团,合成具有半抗原结构特征的氟苯尼考半琥珀酸酯(FFC-HS).采用混合酸酐(MA)法将FFC-HS与牛血清白蛋白(BSA)偶联合成人工抗原BSA-FFC-HS.通过紫外(UV)、凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,证明BSA-FFC-HS偶联成功,得到了结合比较好的人工抗原,为进一步制备抗FFC抗体提供了良好的免疫原.
- 刘悦竹刁有祥孙法良孙宁马艳芳
- 关键词：氟苯尼考半抗原人工抗原凝胶电泳
- 氟苯尼考人工抗原的合成与鉴定被引量：2
- 2009年
- 采用混合酸酐(MA)法,将氟苯尼考(FFC)分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)连接,制备人工免疫抗原FFC-HS-BSA和包被原FFC-HS-OVA,经紫外扫描(UV)、凝胶电泳(SDS-PAGE)、红外扫描光谱(IR)和动物免疫试验证实人工抗原合成成功。
- 孙法良刁有祥刘悦竹孙宁马艳芳
- 关键词：氟苯尼考人工抗原凝胶电泳
- 鸡传染性支气管炎病毒变异株(793/B)M基因与2种截短M基因的原核表达及鉴定被引量：5
- 2010年
- 运用生物信息学技术推测鸡传染性支气管炎病毒(IBV)变异株(793/B)M基因的抗原位点,应用DNAStar软件针对M基因及其抗原表位片段设计3对引物,PCR扩增并成功构建了M基因的pGEX6p-M和2种截短M基因的pGEX6p-M1,pGEX6p-M2原核表达质粒,SDS-PAGE检测分别在50000,32000,29000处有特异性表达条带,表明GST-M,GST-M1,GST-M2重组蛋白获得成功表达;Westernblotting检测显示,GST-M和GST-M1重组蛋白能被鼠抗IBV(793/B)血清识别,而GST-M2重组蛋白不能被识别。GST-M与GST-M1重组蛋白具有良好的抗原性,初步证实M蛋白存在抗原表位,这为进一步研究IBV(793/B)M蛋白的免疫原性和制备基因工程疫苗提供了重要依据。
- 孙宁李宏梅刁有祥孙法良王明亮马艳芳纪巍
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒原核表达
- 猪胸膜肺炎放线杆菌毒素ApxⅠ对小鼠的致病性及免疫原性研究被引量：1
- 2009年
- 将血清10型胸膜肺炎放线杆菌接种于含0.02%NAD、5%犊牛血清、1mMCaCl2的LB液体培养基中培养12h,离心后的上清液经硫酸铵盐析、葡聚糖凝胶分子筛层析,分离纯化ApxⅠ。将纯化的ApxⅠ进行半数致死量测定,并对小鼠剖检后进行内脏器官病理变化观察。将纯化的ApxⅠ与弗氏佐剂按1：1的比例混合制备亚单位疫苗,免疫小鼠,初免2周后加强免疫1次,二免2周后用血清10型胸膜肺炎放线杆菌攻毒,测定最佳免疫剂量。根据最佳免疫剂量于30日龄和45日龄免疫小鼠,60日龄时分别用血清1、3、5、7型胸膜肺炎放线杆菌攻毒。结果该毒素对小鼠的LD50为80.9mg/kg,LD50的95%平均可信限为63.2～103.5mg/kg;ApxⅠ亚单位疫苗的最佳免疫剂量为40μg,对血清1、3、5、7型胸膜肺炎放线杆菌的攻击具有一定的免疫保护效果。
- 马艳芳刁有祥张鑫纪巍孙法良孙宁
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌免疫原性
- 氟苯尼考、安普霉素药物残留的ELISA检测方法研究
- 氟苯尼考和安普霉素分别属于氯霉素类和氨基糖苷类抗生素,目前在临床上应用十分普遍。并且两者在畜禽组织中的残留都会引起一系列后果。酶联免疫检测法/(ELISA/)是一种简便、快速,并非常适合大规模样品筛选的检测方法,但国内主...
- 孙法良
- 关键词：氟苯尼考安普霉素人工抗原酶联免疫分析
- 文献传递
- 鸡传染性支气管炎病毒变异株(793/B)M基因的克隆与序列分析被引量：3
- 2009年
- 根据GenBank已发表的传染性支气管炎病毒（IBV）全基因组序列设计引物，对793／B型IBV分离毒株TA03M基因进行克隆与序列分析。结果表明，793／B型IBV的M基因由669bp组成，与GenBank已发表的15株IBV的M基因相比较，793／B型IBV的M基因在第4-15位发生了3-12个核苷酸的缺失，对应1-4个氨基酸的缺失，共有30多处点突变。与其他各毒株M基因的核苷酸同源性为84.2％-93.6％，氨基酸同源性为82.1％-96.0％；进化分析显示TA03株与H52和IBN毒株之间的亲缘关系较近。该研究为进一步探讨793／B型IBVM基因（蛋白）在遗传变异和免疫等方面的作用奠定了理论基础。
- 孙宁刁有祥孙法良纪巍马艳芳王明亮
- 关键词：传染性支气管炎病毒M基因
- 鸡肉中氟苯尼考ELISA检测方法的建立及应用被引量：9
- 2009年
- 【目的】制备抗氟苯尼考(FFC)的高亲和力特异性抗体,建立检测氟苯尼考的间接竞争ELISA新方法。【方法】氟苯尼考分别与牛血清白蛋白(BSA)和人血清白蛋白(HSA)经混合酸酐法偶联,得到免疫抗原和包被抗原,其偶联比分别为14.4和14.7。用免疫原FFC-HS-BSA免疫新西兰大白兔获得了效价较高的特异性抗体。建立并优化了间接竞争ELISA检测方法。【结果】抗血清效价为1:102400。最佳包被抗原浓度为0.5μg·ml-1,最佳抗体工作浓度为1:6400,酶标二抗的工作浓度为1:20000。回归方程Y=-0.1516X+0.788(R2=0.9859),检测范围为0.18～500ng·ml-1,检出限为0.18ng·ml-1,批内和批间平均变异系数分别为4.86%和7.77%。交叉反应试验中,抗血清与FFC结构相似的氯霉素和甲砜霉素交叉反应率分别为0.094%和0.098%,与其它药物交叉反应率均小于0.01%,表明该方法具有很强的特异性。FFC以浓度0.18～500ng·g-1在鸡肉中添加,回收率为84.14%～106.1%,变异系数为2.1%～5.6%。【结论】成功获得了高效价、高特异性的抗FFC抗体,建立了鸡肉中氟苯尼考残留检测的ELISA方法。结果表明,所建立的检测方法具有灵敏、准确、简便、快速的特点。
- 孙法良刁有祥孙宁马艳芳纪巍
- 关键词：氟苯尼考ELISA鸡肉食品安全
- 一株经鸭胚传递的鸭副黏病毒的分离鉴定及生物学特性被引量：7
- 2010年
- 从表现疑似副黏病毒症状的1日龄雏鸭和死亡鸭胚中分离到1株病毒,经HA、HI和病毒中和反应鉴定为副黏病毒,命名为SDFCH株。按常规方法测得SDFCH株的生物学毒力指标MDT、ICPI和IVPI分别为56.6 h、1.78和2.59,鸭胚半数致死量LD50为10^-8.5,表明SDFCH株为副黏病毒强毒株。用分离病毒对11日龄鸭胚和7日龄雏鸭攻毒,孵化出的雏鸭和攻毒的雏鸭均出现明显的剖检变化。根据GenBank中NDV F基因序列设计合成了3对引物,通过RT-PCR扩增出了鸭源Ⅰ型禽副黏病毒（APMV-1）SDFCH株的F基因。与已发表副黏病毒F基因相关序列对比结果表明：SDFCH株与鸭、鹅源副黏病毒的同源性较高,核苷酸和氨基酸的同源性均在96.4%-98.0%之间,而与Lasota株同源性较低,核苷酸和氨基酸同源性仅为84.4%和87.9%。表明该毒株相对于传统的Lasota株已经发生了较大的变异。
- 纪巍刁有祥王明亮马艳芳孙宁孙法良吴焕荣
- 关键词：F基因
