廖金花
- 作品数：10 被引量：98H指数：4
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- 相关领域：生物学农业科学医药卫生理学更多>>
- 僧帽牡蛎碱性磷酸酶性质的研究被引量：16
- 2003年
- 从僧帽牡蛎分离纯化出一种碱性磷酸酶,采用Sephadex G-200凝胶过滤柱层析法测得该酶分子量为1.57×10~5.以对硝基苯磷酸为底物,该酶的最适温度为43℃,最适pH值为10.0.在37℃和pH值为10.0的条件下,酶催化反应的米氏常数(K_m)为9.68×10^(-4)mol/dm^3,活化能(E_a)为45.85kJ/mol,温度系数(Q_(10))为1.80(30～40℃).对该酶的热稳定性研究表明:其在45℃以下较为稳定,50℃以上明显失活,并测定了该酶的热失活速度常数.金属离子对酶活力的效应研究结果表明:Mg^(2+)、Mn^(2+)、Ca^(2+)、Co^(2+)对酶有激活作用,Ag^+、Hg^(2+)、Zn^(2+)表现为抑制作用,Cd^(2+)几乎没有影响.Mg^(2+)是较有效的激活剂,表现为部分非竞争性效应,激活常数(K_a)为2.48×10^(-4)mol/dm^3,有Mg^(2+)存在时该酶活性中心的转换数量是无Mg^(2+)时的4.0倍.几种效应物对酶的抑制机理研究表明:HPO_4^(2-)、HAsO_4^(2-)、Cys为竞争性,其抑制常数分别为1.61、1.18和0.15mmol/dm^3;L-Phe为反竞争性,抑制常数为3.26mmol/dm^3.
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- 关键词：僧帽牡蛎碱性磷酸酶热稳定性金属离子抑制剂海洋生物
- 乙醇对鲍鱼碱性磷酸酶活力与构象的影响被引量：4
- 2005年
- 以乙醇为效应物研究对鲍鱼碱性磷酸酶(ALP)活力影响的结果表明,酶的剩余活力随着乙醇浓度增大而迅速下降,乙醇浓度40%可使酶活力完全丧失,说明乙醇对鲍鱼ALP有明显的失活作用,IC50为13%.含较低浓度乙醇(30%)的失活过程是可逆的反应.测定乙醇对酶的失活作用机理,结果表明乙醇对鲍鱼ALP的失活作用是非竞争性机制,说明底物存在不影响乙醇对酶的失活作用.应用荧光光谱、紫外吸收光谱研究鲍鱼ALP经乙醇微扰后的分子构象变化,发现乙醇对酶分子构象有显著的影响,酶的内源荧光强度随乙醇浓度增大而增强,荧光发射峰逐渐发生红移.紫外吸收光谱在276 nm吸收峰随乙醇浓度增大而增强.这些结果表明,酶蛋白分子中的生色基团残基的微环境发生变化.
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- 关键词：碱性磷酸酶失活作用构象乙醇
- 杂色鲍碱性磷酸酶在醇、醛和酮溶液中的失活作用被引量：2
- 2005年
- 报道了杂色鲍碱性磷酸酶(ALP)在甲醇、乙醇、丙醇、甲醛、丙酮等溶液中的失 活动力学．结果表明:酶的剩余活力随着有机溶剂浓度的增大而迅速下降．测得上述 5种有机溶剂对该酶的半抑制率(IC50)分别为5．41、3．07、1．80、31．0×10-3、2．30 mol／dm3．在这些有机溶剂溶液中酶的失活过程都是可逆反应．检测醇、醛、酮对该酶 的失活作用机理,结果表明甲醇、乙醇、丙醇对杂色鲍ALP的失活作用均为非竞争性 机制,其抑制常数分别为5．36、3．02、1．80mol／dm3．甲醛、丙酮对杂色鲍ALP的失活 作用都呈现为混合型抑制,其对游离酶的抑制常数(K1)分别为24．7×10-3、1．66 mol／dm3;对酶-底物络合物的抑制常数(KIS)分别为56．2×10-3、5．40mol／dm3．
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- 关键词：海洋生物碱性磷酸酶杂色鲍失活作用有机溶剂
- 巯基化合物和磷酸盐及其类似物对鲍鱼碱性磷酸酶的抑制作用被引量：3
- 2004年
- 研究二巯基苏糖醇(DTT)、巯基乙醇(ME)等巯基化合物及磷酸盐(Na2HPO4)、砷酸盐(Na2HAsO4)、酸盐(Na3WO4)和钼酸盐(Na3MoO4)对鲍鱼碱性磷酸酶(ALP)活力的影响.结果表明:这些效应物对该酶都具有明显的抑制作用,而且它们的抑制作用强度依次为:DTT>ME;Na2HPO4>Na3WO4>Na2HAsO4>Na3MoO4.进一步研究这些效应物对该酶的抑制作用机理,表明:巯基化合(DTT、ME)均非竞争性抑制;Na2HPO4、Na2HAsO4和Na2HWO4表现为竞争性抑制;本文测定了它们的抑制常数并加于比较.
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- 关键词：巯基化合物磷酸盐碱性磷酸酶杂色鲍抑制动力学
- SDS变性剂对杂色鲍碱性磷酸酶的活力与构象的影响被引量：4
- 2005年
- 以十二烷基磺酸钠(SDS)为变性剂,研究其对杂色鲍碱性磷酸酶(ALP)活力的影响,结果表明酶的剩余活力随着SDS浓度增高而下降,但当下降到67%时,随着SDS浓度增高,酶活力几乎不再发生明显变化.这说明杂色鲍ALP对SDS具有高度的耐受性.研究SDS对杂色鲍ALP的pH稳定性的影响,发现该酶的pH稳定性区域由5.9～10.0区域漂移到7.6～10.6区域,显示酶的pH稳定性往碱性区域偏移.进一步以荧光和紫外光谱为监测手段,研究杂色鲍ALP经SDS微扰后的分子构象变化情况.其结果表明随着SDS浓度增高,荧光发射强度逐渐发生变化,但发射峰未发生明显变化;紫外吸收强度发生变化,但吸收峰也未发生明显变化.这说明该酶活性中心对SDS变性剂并不敏感.这在以往文献中未见过报道.
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- 关键词：碱性磷酸酶SDS杂色鲍变性剂监测手段分子构象
- 鲍鱼碱性磷酸酶的分离纯化和性质研究被引量：50
- 2005年
- 以杂色鲍(Haliotis diversicolor)内脏为原料,经Tris HCl缓冲液(pH 7.5,含0.1mol/L NaCl)抽提,正丁醇处理,硫酸铵分级沉淀分离,DE 32离子交换、Sephadex G 150分子筛、DE 32纯化,得到电泳单一纯的碱性磷酸酶制剂,比活力为1 226 U/mg.酶学性质和动力学性质研究表明:该酶催化对硝基苯磷酸水解反应的最适 pH值为 10.08,最适温度为48℃.米氏常数Km 值为0.80 mmol/L,Vm 值为20.1 mmol/L·min-1(pH 10.0,37℃).酶的热稳定性研究表明:该酶在pH 7~11区间和在温度低于55℃下稳定.金属离子对酶活力的影响结果表明:Li+、Na+和K+对酶活力没有影响,Mg2+、Ca2+、Ba2+、Mn2+和Co2+对酶有不同程度的激活作用,而Cu2+、Cd2+、Zn2+、Hg2+、Ag+、Bi2+和Pb2+等对酶起抑制作用.
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- 关键词：杂色鲍碱性磷酸酶酶活性金属离子生物体
- 氨基酸对鲍鱼碱性磷酸酶活力的影响被引量：4
- 2004年
- 选用L Ala、L Val、L Leu等15种氨基酸为效应物,研究它们对杂色鲍(Haliotisdiversicolor)碱性磷酸酶(EC.3.1.3.1)催化pNPP水解反应的影响.结果表明:上述这些氨基酸对鲍鱼碱性磷酸酶均有一定程度的抑制作用,抑制程度随着试剂浓度增大而加剧.当浓度为10.0mmol/L时,分别可以使酶活力下降:7.77%、36.75%、22.79%、39.86%、16.16%、19.33%、94.77%、20.19%、17.02%、40.15%、31.08%、17.52%、30.56%、36.77%和12.59%.尤其以L Cys对酶的抑制作用最为显著(抑制率为94.77%),其次是L Ile和L His,它们均能使酶活力下降40%;对酶抑制率在30%以上的氨基酸还有L Val、L Trp、L Phe和L Lys,其它选用的氨基酸对酶的抑制率小于25%.选择对杂色鲍ALP具有较明显的抑制作用的氨基酸L Val、L Ile、L Trp和L Cys等氨基酸为研究对象,研究它们对酶催化pNPP水解反应的抑制作用机理,并测定其抑制常数.结果表明L Cys的抑制作用为混合型效应,其KI和KIS值分别为0.042mmol/L和0.139mmol/L;而L Val、L Ile、L Trp为反竞争性,其KIS分别为9.56、8.55、8.09mmol/L.
- 林丽蓉廖金花陈清西
- 关键词：氨基酸碱性磷酸酶
- 金属离子对鲍鱼碱性磷酸酶活力的影响被引量：17
- 2004年
- 碱性磷酸酶(ALP,EC3.1.3.1)是一种金属酶,其结构的维持和酶活性的表现均需金属离子.本文研究了几种金属离子分别对鲍鱼ALP活力的影响.结果表明,Li+,Na+和K+等正一价碱金属离子对酶活力没有任何效应;碱土金属离子Mg2+,Ca2+和Ba2+对酶有激活作用,其激活程度依次为:Mg2+>Ca2+>Ba2+,而且Mg2+在5.0mmol/L时可以使酶活力提高267%;在过渡金属离子中,Zn2+,Mn2+,Co2+和Cu2+对酶的效应不同,Zn2+、Cu2+为抑制作用,而Co2+、Mn2+表现为激活作用;重金属离子Hg2+、Pb2+、Ag+和Cd2+对酶有抑制作用,其中Hg2+的抑制效应最强,1.0mmol/LHg2+可使酶活力抑制94%.研究Mn2+和Cu2+的抑制类型表明,Mn2+为混合型激活作用,而Cu2+对酶的抑制类型为非竞争性抑制作用,其抑制常数(KI)为0.316mmol/L.
- 廖金花陈清西
- 关键词：碱性磷酸酶碱土金属离子重金属离子过渡金属离子
- 僧帽牡蛎碱性磷酸酶功能基团的研究被引量：5
- 2004年
- 采用化学修饰法研究僧帽牡蛎碱性磷酸酶活性功能基团性质.酶经0.4mmol·L-1PCMB修饰30min后活力仍然保持不变,提示巯基与酶的活力无关;用二巯基苏糖醇(DTT)对酶进行修饰,当DTT浓度达到2.5mmol·L-1时,酶活力丧失98%,表明硫 硫键与酶活力有密切的关系;以N 溴代琥珀酰亚胺(NBS)修饰酶的色氨酸残基,酶的修饰失活呈一级反应,当NBS浓度达到0.65mmol·L-1时,酶活力丧失100%,并辅以紫外吸收光谱的变化分析,表明色氨酸残基是酶催化活力所必需的;醋酸酐、马来酸酐、甲醛等氨基试剂对酶的修饰作用显示氨基是酶的必需基团.
- 陈巧廖金花王勤陈清西
- 关键词：碱性磷酸酶活性牡蛎残基色氨酸酶活力功能基团
- 杂色鲍碱性磷酸酶在DMSO溶液中的活力与构象变化的研究被引量：2
- 2005年
- 以二甲亚砜(DMSO)为效应物,研究其对杂色鲍碱性磷酸酶(ALP)活力的影响,结果表明:该酶的剩余活力随着DMSO浓度增大而迅速下降,当DMSO浓度达40%,酶活力几乎完全丧失.说明DMSO对杂色鲍ALP有明显的失活作用.导致酶活力丧失50%的DMSO浓度为17%.在较低DMSO浓度(<20%)的失活是可逆的反应过程.动力学研究表明,该酶的失活过程属于混合型.进一步测定游离酶(E)和酶底物络合物(ES)与DMSO的结合常数(KI和KIS),结果表明KI
- 陈巧洪燕飞廖金花陈清西
- 关键词：杂色鲍碱性磷酸酶失活作用构象DMSO
