彭伍平
- 作品数：12 被引量：75H指数：7
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 猪瘟病毒E2蛋白主要抗原区编码基因的原核表达及其单克隆抗体的制备被引量：27
- 2008年
- 利用RT-PCR扩增了猪瘟病毒(CSFV)兔化弱毒疫苗株(C株)的E2蛋白主要抗原区(tE2)编码区,并定向克隆到表达载体pPROEX-HTb中,获得重组表达载体pPROEX-tE2,将其转化大肠杆菌DH5α菌株,经IPTG诱导,tE2蛋白获得高效表达;经检测,该重组蛋白能被CSFV C株抗血清识别。用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了1株稳定分泌抗tE2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经检测,该单克隆抗体能够与CSFV C株和石门株以及杆状病毒表达的重组E2蛋白发生特异性反应。推测,该单克隆抗体是针对CSFV E2蛋白的一个保守线性表位。
- 侯强彭伍平孙元仇华吉
- 关键词：猪瘟病毒E2蛋白原核表达单克隆抗体
- 猪瘟病毒中和抗体竞争抑制ELISA检测方法的建立被引量：13
- 2008年
- 利用杆状病毒表达的猪瘟病毒(CSFV)重组E2蛋白作为包被抗原,辣根过氧化物酶标记的E2蛋白中和性单克隆抗体作为竞争抗体,建立了一种用于检测CSFV中和抗体的重组E2蛋白竞争抑制ELISA(CI-ELISA)方法。经筛选确定,CI-ELISA的抗原最佳包被浓度为3μg/mL,酶标竞争抗体的最佳稀释度为1∶4 000,阴性血清临界值为33%,阳性血清临界值为40%。CI-ELISA的检出下限为1∶44(中和抗体效价),与进口阻断ELISA试剂盒的符合率为85.00%,高于间接ELISA与进口阻断ELISA试剂盒的符合率(81.25%),CI-ELISA与其他主要病毒的阳性血清均无交叉反应。对采自我国4个省份的290份现地血清进行CI-ELISA检测,结果273份(94.1%)为CSFV抗体阳性。
- 梁冰冰孙元彭伍平夏照和仇华吉
- 关键词：猪瘟病毒中和抗体
- 猪瘟病毒野毒株E2蛋白特异性单抗免疫抑制制备法的建立被引量：8
- 2008年
- 采用环磷酰胺免疫抑制法制备特异性识别猪瘟病毒(CSFV)野毒株的单克隆抗体,用纯化的杆状病毒表达的重组HCLV-E2蛋白作为耐受原,Shimen-E2蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了1株能稳定分泌抗E2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,结果显示,该单克隆抗体能够与CSFV石门株发生反应,同时能与1.1、2.1、2.2和2.3基因亚群CSFV野毒发生特异性反应,并具有中和活性,而与CSFV兔化弱毒疫苗株不发生反应。表明,该单克隆抗体可以用于鉴别CSFV野毒株和兔化弱毒疫苗株。
- 夏照和彭伍平成丹侯强王万利孙元仇华吉
- 关键词：猪瘟病毒E2蛋白重组杆状病毒免疫抑制
- 基于重组E2蛋白的猪瘟病毒抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：11
- 2008年
- 根据昆虫细胞密码子偏嗜性,对猪瘟病毒E2基因进行密码子优化,并利用昆虫杆状病毒表达系统进行了表达,表达水平约为野生型E2基因的3倍。将表达的重组E2蛋白纯化后作为ELISA包被抗原,建立了一种基于重组E2蛋白的间接ELISA方法,并对此方法的反应条件进行了优化。确定的ELISA最佳条件为:抗原包被浓度为2μg/mL,封闭液为10 g/L聚乙烯醇PBS溶液,被检血清1∶160稀释,辣根过氧化物酶标记的兔抗猪IgG(二抗)1∶5 000稀释。确定的阴性血清临界D450 nm值为0.30,阳性血清临界D450 nm值为0.35。将该ELISA方法与IDEXX公司生产的猪瘟病毒抗体检测试剂盒做相关比较,结果符合率为82.3%。表明,该方法可以用于猪瘟病毒抗体的检测。
- 孙元夏照和梁冰冰彭伍平仇华吉
- 关键词：猪瘟病毒E2蛋白密码子优化杆状病毒表达系统间接ELISA
- 牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白的截短表达与活性检测被引量：8
- 2007年
- 经生物学软件DNAStar分析,以牛传染性鼻气管炎病毒(Banha Nu/67)基因组DNA为模板,PCR扩增gD基因943bp的片段,将目的片段定向克隆到pET30a表达载体中,酶切及测序鉴定均正确后,转化BL21表达菌,经IPTG诱导得到部分可溶表达的重组蛋白。用Ni柱亲和层析法在非变性的条件下纯化重组蛋白,纯化的重组蛋白浓度为0.852mg/mL,纯度为85.2%。Westem blot、间接ELISA检测证明纯化的重组蛋白具有良好的抗原性和特异性。
- 王延辉薛飞朱远茂彭伍平
- 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒原核表达活性检测
- 用免疫抑制法制备猪瘟病毒野毒株E2蛋白的特异性单克隆抗体
- 采用环磷酰胺免疫抑制法,用纯化的杆状病毒表达的重组HCLV-E2蛋白作为耐受原,Shimen-E2蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经筛选获得一株稳定分泌抗E2蛋白单克隆抗体...
- 夏照和彭伍平成丹侯强王万利孙元仇华吉
- 关键词：猪瘟病毒E2蛋白重组杆状病毒单克隆抗体
- 文献传递
- 利用噬菌体展示技术鉴定猪瘟病毒E2蛋白抗原表位
- 猪瘟/(classical swine fever，CSF/)是由猪瘟病毒/(Classical swine fever virus，CSFV/)引起的一种高度接触性传染病，几乎遍及全世界/(除北美洲和大洋洲外/)，死亡...
- 彭伍平
- 关键词：猪瘟病毒噬菌体展示单克隆抗体
- 文献传递
- 抗猪瘟病毒野毒株E2蛋白的单克隆抗体及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种抗猪瘟病毒野毒株E2蛋白的单克隆抗体以及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株。本发明采用环磷酰胺免疫抑制法，用杆状病毒表达的猪瘟兔化弱毒疫苗株E2蛋白作为耐受原，以石门株E2蛋白作为免疫原，免疫小鼠，经细胞融合...
- 仇华吉夏照和彭伍平成丹侯强王万利孙元涂长春
- 文献传递
- 牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白的截短表达与活性检测
- 经生物学软件DNAstar分析,以IBRV(Bartha Nu/67)基因组DNA为模板,PCR扩增gD基因943bp的片段,将目的片段定向克隆到pET30a表达载体中,酶切及测序鉴定均正确后,转化BL21表达菌,经IP...
- 朱远茂薛飞王延辉彭伍平
- 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒原核表达活性检测
- 文献传递
- 抗猪瘟病毒野毒株E2蛋白的单克隆抗体及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种抗猪瘟病毒野毒株E2蛋白的单克隆抗体以及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株。本发明采用环磷酰胺免疫抑制法，用杆状病毒表达的猪瘟兔化弱毒疫苗株E2蛋白作为耐受原，以石门株E2蛋白作为免疫原，免疫小鼠，经细胞融合...
- 仇华吉夏照和彭伍平成丹侯强王万利孙元涂长春
- 文献传递
